RNA提取步骤

1. 组织样品：称取 20mg-50mg 样品，使用液氮研磨或者匀浆器匀浆，加入 RNA-Solv ? Reagent裂解

2. 室温静置 2-3 分钟。

3. 加入 200μl 氯仿(氯仿的使用量为 1/5 RNA-Solv ? Reagent 的使用量） ，涡旋混匀 15 秒，冰浴 10 分钟。

4. 4℃，12,000×g 离心 15min。

5. 小心转移不大于 80%的水相层至新的离心管，加入 1/3 倍体积的无水乙醇，涡旋混匀 15 秒。

6. 将 HiBind RNA 结合柱套在 2ml 离心管中， 转移不大于 700μl 混合液至 HiBind RNA 结合柱中。

室温下 10,000×g 离心 1 分钟，弃滤液。

7. 重复步骤六，直至所有的混合液全部离心，结合到 HiBind RNA 结合柱上。

8. 将 HiBind RNA 结合柱套在新的 2ml 离心管中， 加300μl RNA Wash Buffer I 至 HiBind RNA 结合柱中，10,000×g 离心 1 分钟，弃滤液； 9. （选做）DNase I 消化:

a. 配制 DNase I(Digestion Buffer, 73.5μl; RNase-Free DNase I,1.5μl),混匀。 b. 将上述 75μl DNase I 溶液转移至 HiBind RNA 结合柱膜的正中央，不要将消化液转移至柱子内 壁。

c. 室温静置 15 分钟。

10. 将 HiBind RNA 结合柱套在同一个 2ml 离心管中，加入 400μl RNA Wash Buffer I 洗涤，如做了 DNase I 消化，需室温静置 5 分钟，10,000×g 离心 1 分钟，弃滤液。 11. 将 HiBind RNA 结合柱套在同一个 2ml 离心管中， 加入 500μl RNA Wash Buffer II 洗涤， 10,000×g 离心 1 分钟，弃滤液。

12. 重复步骤 11 一次，＞10,000xg 离心空甩 2min 干燥 HiBind RNA 结合柱基质。

13. 将 HiBind RNA 结合柱套在干净的 1.5ml 离心管中，加 30-50μl DEPC Water，室温静置 2min。≥10,000xg 离心 1min 洗脱 RNA。

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