SSAT通过AKT-GSK-3β-β-catenin信号通路抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目录

摘要........................................................................................................................................... I ABSTRACT ............................................................................................................................ III 第一章绪论 (1)

第二章试剂、材料和仪器 (5)

2.1 主要试剂及材料 (5)

2.2 细胞株与菌株 (6)

2.3 质粒、小干扰RNA与引物 (6)

2.4 试剂及主要溶液的配制 (7)

2.4.1细胞及细菌培养溶液配制 (7)

2.4.2 HPLC所用试剂的配制 (7)

2.4.3蛋白印迹实验所用试剂的配制 (8)

2.5主要仪器 (9)

第三章实验方法 (11)

3.1 细胞株的培养 (11)

3.2质粒DNA的转化及提取 (11)

3.3 细胞转染实验 (11)

3.4单克隆筛选 (12)

3.5细胞迁移实验： (12)

3.6细胞侵袭实验 (13)

3.7 伤口愈合实验 (13)

3.8 细胞生长曲线的测定 (14)

3.9 细胞克隆形成分析 (14)

3.10 HPLC法检测细胞内多胺含量 (15)

3.11 蛋白提取及浓度测定 (17)

3.12 蛋白印迹法检测细胞内蛋白水平方法 (17)

3.13 统计学分析 (18)

V 万方数据

第四章实验结果 (21)

4.1SSAT高表达和低表达细胞株的构建 (21)

4.2 SSAT对结直肠癌细胞增殖能力的影响 (23)

4.3 SSAT对结直肠癌细胞的迁移的影响 (24)

4.4 SSAT对结直肠癌细胞侵袭的影响 (26)

4.5 SSAT对AKT/GSK-3β通路的影响 (27)

4.6 SSAT通过改变多胺含量来调节AKT/GSK-3β活性 (28)

4.7 SSAT对WNT信号通路的影响 (29)

4.8 GSK-3β抑制剂逆转SSAT引起的细胞侵袭抑制作用 (30)

结论 (33)

讨论 (35)

参考文献 (41)

附录 (45)

致谢 (47)

VI

万方数据

第一章绪论

第一章绪论

癌症是世界范围内引起死亡的主要疾病之一。癌细胞具有快速地增长、扩散、转移等特点，使得癌症难以控制，易复发。这种特征成为人们难以攻克癌症的主要原因。随着抗肿瘤药物的不断研发，抗肿瘤靶点不断研究以及各种预防治疗手段的应用，癌症患者的生存率在逐年的升高。然而，癌症的治疗发展前景并不容乐观。2014年美国结直肠癌统计数据显示：在过去的十年里，随着结肠镜筛查的应用，结直肠癌患者的发病率有所下降，其中，年龄超过50岁的结直肠癌患者的发病率下降了30%。尽管如此，结直肠癌的发病率和死亡率仍对人类的健康具有极大的威胁。因此，进一步研究结直肠癌发展、转移的分子机制是发展化疗药物治疗结直肠癌疾病的首要任务。

多胺，包括腐胺（Putrescine，Put）、精脒（亚精胺，Spermidine，Spd）、精胺（Spermine，Spm），是一类在原核细胞和真核细胞中广泛存在的阳离子物质，在抗肿瘤药物的研发和治疗靶点的发展过程中，因在细胞生长分化等生理过程中具有关键作用引起人们广泛关注。细胞内多胺的水平被细胞内外多个因素紧密调控，如：生物合成、分解代谢以及转运系统等[1]。多胺水平的减少可能影响细胞的增殖与迁移，引起真核细胞生长缺陷。然而，多胺的积累也同样可能诱导细胞的凋亡以及转变[2]。所以，多胺的代谢失调会引起多种疾病，尤其是在癌症患者体内，多胺的代谢和需求在癌症中通常是失调的。不仅如此，多项研究表明癌症患者的体内多胺的浓度通常高于正常人，并且提示这种现象的发生与不良的预后有明显的相关性，所以多胺也被提出作为肿瘤的标志物

[3]。这种肿瘤与多胺水平密切地联系使得众多学科都致力于研究多胺的功能和代谢活性，

以此作为治疗的靶点，严格调控细胞内的多胺浓度。在抗肿瘤药物的发展史上，基于大量的多胺水平与肿瘤的增长相关性关系的建立以及多胺的特性，以多胺途径为基础的抗肿瘤药物得到迅速的发展。在多胺的合成与代谢的生物途径基础上，人们已经开发出一些抑制多胺生物合成，促进多胺代谢，减少多胺摄入以及以多胺作为靶向载体的药物。

如二氟甲基鸟氨酸（Difluoromethylornithine，DFMO），主要是作为鸟氨酸脱羧酶（Ornithin decarboxylase，ODC）的不可逆抑制剂而抑制多胺合成；多胺转运系统（Polyamine transporter system, PTS）抑制剂，如ORI1202，其可以阻挡从外部摄入的多胺进入；设计药物-多胺缀合物，利用PTS靶向转运多胺的特点可提高抗肿瘤药物的靶向性等等[4]。

1 万方数据

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/717q.html