附录88 BIOLOGICAL REACTIVITY test in vivo 翻译 - 图文

The following tests are designed to determine the biological response of animals to elastomerics, plastics and other polymeric material with direct or indirect patient contact, or by the injection of specific extracts prepared from the material under test. It is essential to make available the specific surface area for extraction. When the surface area of the specimen cannot be determined, use 0.1 g of elastomer or 0.2 g of plastic or other material for every mL of extraction fluid. Also it is essential to exercise care in the preparation of the materials to be injected or instilled to prevent contamination with microorganisms and other foreign matter. Three tests are described. The Systemic Injection Test and the Intracutaneous Test are used for elastomeric materials, especially to elastomeric closures for which the appropriate Biological Reactivity Tests, In Vitro 87 have indicated significant biological reactivity. These two

tests are used for plastics and other polymers in addition to a third test, the Implantation Test, to test the suitability of these materials intended for use in fabricating containers and accessories thereto, for use in parenteral preparations, and for use in medical devices, implants, and other systems.

以下实验适用于检测动物在直接或间接接触合成橡胶、塑料和其他高分子聚合物后或注射了其提取物后的生物反应性。确定提取的比表面积是试验的必要条件。当无法确定试样的表面积时，使用每ml含0.1g合成橡胶或0.2g塑料或其他聚合物的进行试验。另外，在准备注射或植入聚合物时，应小心操作防止微生物和其他外源物质的污染也是至关重要的。以下描述了三种测试方法。系统性注射试验和皮肉注射试验用于合成橡胶材料，尤其在生物活性体外测试法87中具有显著生物反应性的合成橡胶塞。除了第三法-植入试验以外，这两个试验也可用于塑料和其他聚合物材料。植入试验是对这些用于制造容器及其配件，用于注射剂和用于医疗器械、买只和其他系统的材料的适用性进行检测。

These three tests are applied to materials or medical devices, if there is a need for classification of plastics and other polymers based on in vivo biological reactivity testing.

如果需要根据体内生物反应试验对塑料及其他聚合物材料进行分类，上述三个实验可用于材料或医疗设备（中的塑料或其他聚合物的检测）。

For the purpose of this chapter, these definitions apply: the Sample is the specimen under test or an extract prepared from such a specimen. A Blank consists of the same quantity of the same extracting medium that is used for the extraction of the specimen under test, treated in the same manner as the extracting medium containing the specimen under test. A Negative Control* is a specimen that gives no reaction under the conditions of the test.

根据本章目的，使用以下定义：样品是指试验中所使用的试样或试样的提取物。空白是指采用与提取试样所用的等量的提取液，且采用与试样提取物相同的处理方法。阴性对照是指在试验条件下无任何反应的试样。

Classification of Plastics— Six Plastic Classes are defined (see Table 1). This classification is based on responses to a series of in vivo tests for which extracts, materials, and routes of administration are specified. These tests are directly related to the intended end-use of the plastic articles. The choice of extractants is representative of the vehicles in preparations with which the plastics are likely to be in contact. The Table 1 classification facilitates communication among suppliers, users, and manufacturers of plastics by summarizing the tests to be performed for containers for injections and medical devices if a need for classification exists.

塑料的分类-被分为6类（见表1）。这个分类是根据提取物、材料及其给药途径对一系列体内检测试验的反应。这些试验方法与塑料材料的最终用途直接相关。提取物的选择应代表塑料可能接触到的制剂的载体。如果存在对分类的需求的话，通过对注射剂包装容器和医疗器械的试验总结，表1的分类便于供应商、用户及塑料生产商之间的沟通。

除了植入试验，其他两个实验均需要使用提取物，根据材料的耐热性，可从50℃、70℃、和120℃三个标准温度中选择一个温度进行提取物的制备。因此，塑料分类名称中必须带有提取物的温度标识（如IV-121℃表示第IV类塑料在121℃进行提取；

I-50℃表示第I类塑料在50℃下进行提取）。根据表1所述标准可将塑料分为USP I-VI。

这个分类标准不适用于口服或外用制剂的塑料容器或作为药物配方成分的塑料材料。表1的分类标准也不适用于天然橡胶材料，天然橡胶只可用氯化钠注射液和植物油提取检测。

全身注射试验和皮下注射试验分别用于检测单剂量注射试样提取物后，动物对塑料或其聚合物的全身或局部反应。植入试验是将试样直接植入动物组织后，评价活体组织对塑料或其他聚合物的反应。在无菌条件下，正确的制备及放置样本是植入试验的重点。

这些实验需要在与其塑料或其他聚合物的使用条件一致的条件下进行。如果材料在使用前要暴露在洁净及无菌的环境中，那么样品制备的过程也应在相同的条件下进行。

材料的组成、加工和清洁过程、接触的介质、燃料、粘合剂、防腐剂的吸附和渗透以及储存条件都会对特殊用途的材料的适用性产生影响。应通过适当的附件的试验对这样的因素进行评估，判定材料适用于其的既定用途。

USP标准物质11-USP高密度聚乙烯标准品

提取介质-氯化钠注射液（见品种专论）。使用含0.9%氯化钠的氯化钠注射液。 聚乙二醇400（见品种专论） 植物油-用新近精制的芝麻油（见品种专论）或棉花籽油（见品种专论）或其他适用的植物油。 药物植物载体（需要时） 注射用水（见品种专论）

注-芝麻油或棉花籽油或其他适用植物油应符合以下要求。尽可能使用新鲜精制的油。用3只准备好的动物，每个动物注射10个点，每个点注射0.2ml植物油，分别在注射后的24小时、48小时、72小时观察反应。按照表2进行评分。对实验中的三只兔（30各注射点）在任何观察时间内，红斑

反应的平均评分应不大于0.5，水肿平均评分不大于1.0，组织反应总体直径不得大于10mm。应避免将注射部位残留植物油误判为水肿。轻轻按压水肿组织会出现发白现象。 表2 皮肤反应评价

仪器-用于试验的仪器如下。 高压灭菌器：使用能够使温度保持在121 ± 2.0°的高压灭菌器，且灭菌器备有温度计、压力计、气阀、可以使检测用容器处于水面以上的支架和在热循环后可以使容器温度迅速下降到约20°以上的冷凝系统。

烤箱-最好使用强制循环模式的烤箱，可以使操作温度保持在50±2°或 70±2°以内。

提取容器-只选用I类玻璃安瓿或旋

盖培养管。如果使用旋盖培养管，螺旋盖内应有合成橡胶塞垫。合成橡胶垫的暴露表面应被0.05-.75mm厚的惰性垫片保护。垫片可采用聚四氯乙烯树脂材料。

仪器的准备-用铬酸洗液清洗所有的玻璃器皿，必要时可用热硝酸进行清洗。清洗后用流水长时间冲洗。在用工具对样品进行切割前，应对切割器具进行正确的清洗（例如用丙酮或二氯甲烷浸泡）。用适当的洗涤剂彻底清洗其他器皿，然后用流水长时间冲洗。

对于提取用的、转移用的以及给药用的容器和仪器应灭菌和干燥。【注：如果用环氧乙烷做灭菌剂，应留出环

氧乙烷逸散的时间】。

测定法：

样品制备-可使用相同的提取物进行全身注射和皮下注射试验，必要时也可分别使用不同的提取物。按照表3所示选择并切割试样。去除切割后试样和阴性对照中棉绒和细微颗粒物等微粒物质，按照以下方法操作：将样品置于洁净并具塞的I型玻璃制成的100ml量筒中，加入70ml注射用水。搅拌30秒后，沥干水，然后重复上述操作，将提取用的试样碎片和植物

油一起在不超过50°的烤箱中干燥。【注：避免用干或湿布擦拭样品，不得用有机溶液、表面活性剂等润洗或清洗样品。】 表3 供试样品的表面积 提取物的制备

提取物的制备：将适当处理后的供试样品加入提取容器中，加入20ml提取介质。以同样的方法加入试验要求的其他提取介质。同时平行设置每个提取液的20ml空白对照用于平行注射和对比。在高压灭菌器内在121°下保持60分钟，烤箱内在70°保持24小时或50°保持72小时进行加热提取。使容器内的液体有充分的时间来达到提取温度。【注：提取条件不应引起任何样品的物理变化，如熔化、熔合等，这些可以引起有效表面积减少。但轻微的样品黏连可以接受。通常是把干净的单个样品放入提取液中进行提取。如果用培养管在高压灭菌器内用植物油进行提取，一定要用压力敏感性胶带将螺旋盖充分密封。】 将上述提取容器的温度冷却至室温

但不低于20°，用力振摇几分钟，按照无菌操作规范将提取物倾倒至干燥、无菌的试管内。提取物在20-30℃下保存，超过24小时不得使用。至关重要的是塑料与提取介质的有效接触面积，提取时间和温度，恰当冷却、搅拌以及倾倒过程，无菌操作以及提取后提取物的储存。

全身注射试验

本实验用于评价注射试样提取物后小鼠的全身系统反应。

实验动物-用健康、未曾使用过的，体重在17-23g之间的小鼠。每个实验组使用同品系的小鼠。和通常实验室所用动物一样正常喂食和进水。

过程-【注：注射前用力将提取物摇匀，确保提取物均匀分布。然而，可见微粒物质不得注入静脉内。】根据表4给出的要求，将样品或空白分别注射到每个实验组的5只小鼠中，但用聚乙二醇400提取的样品及相应空白对照需进行稀释，用4.1体积的氯化钠注射液制成每ml

含聚乙二醇400 200mg的溶液。 表4. 注射方案–全身注射试验

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