高迁移率族蛋白B1单克隆抗体制备与竞争ELISA测定法的建立

目的 制备高迁移率族蛋白B1(HMGB1)单克隆抗体和建立HMGB1的直接竞争ELISA测定方法。方法 采用PEG细胞融合技术、有限稀释法和间接ELISA法制备和筛选杂交瘤细胞。直接竞争ELISA法测定大鼠血清HMGB1水平。结果 共获得7株HMGB1特异性杂交瘤细胞株。建立的直接竞争ELISA方法的测定范围为1～320ng／ml,回收率为97%～106%,变异系数为2.6%～7.3%。用该方法测定大鼠血清HMGB1水

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现代检验医学杂志 2 0年 3 07月第 2卷第 2 2期

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高迁移率族蛋白 B单克隆抗体制备与竞争 E IA测定法的建立 1 LS王维刘淑娟勾宏娜王金龙，,,

(.天津市血液中心，津 1天

3 0 1;.天津医科大学免疫学教研室，津 0 10 2天

30 7) 0 0 0

摘要：的制备高迁移率族蛋白 B (目 1 HMG 1单克隆抗体和建立 HMGB B) 1的直接竞争 E IA测定方法。方法采用 LS P EG细胞融合技术、限稀释法和间接 EL S法制备和筛选杂交瘤细胞。直接竞争 E IA法测定大鼠血清 HMG 1水有 IA LS B平。结果共获得 7 HM G 1特异性杂交瘤细胞株。建立的直接竞争 E I A方法的测定范围为 1 3 0n/,收率株 B LS￣ 2 g ml回直接竞争 E IA可用于 HMG 1的测定，方法较双抗体夹心 E IA法更简便、速。 LS B该 LS快 为 9%~ 1 6, 7 0%变异系数为 2 6 .%~ 7 3。用该方法测定大鼠血清 HMGB水平发现，尿病大鼠模型 HMGB .% 1糖 1水平高于正常大鼠( O0 1。结论尸< . 0 )

关键词：高迁移率族蛋白 B; 1单克隆抗体；联免疫吸附试验酶中图分类号： 9— 3 Q5 3 R4 6 6文献标识码： R3 23 0 4.1 A文章编号：6 17 1 (0 7 0—0— 4 1 7 - 4 4 2 0 ) 20 50

Pr pa to nd Ap i a i n o i h e r i n a plc t o f H g M o iiy G r u x o c o lAntb d b lt o p Bo l M no l na io yW ANG e LI S u j a GOU n— a, ANG i—o g W i, U h—u n, Ho g n W Jn ln( .口 i o d Ce tr Tin i 3 0 1 Ch n 1 n n Blo n e, a jn 0 1 0, ia;

2 L bo mmu oo yo a j e i l ies y Tini 3 0 7, hn ) . a I f n lg Tini M dc vri, a jn 0 0 0 C ia f n a Un tA sr c: b e t e T

r p r mo o l a a t o ys ei c o b ta t O jci o p e a e n c n l n i d p c i f r v o b f HMGB n sa l hadr c c mp t i L S f r s 1 de t bi i t o ei v E IA — a s e te oas y n e u HM GB1 M e h d a i g s r m . tos Hy rd ma t c n q e l t d d l t n, n n ie tELI A r s d i h r p r t n b i o e h i u,i e i i a d i d r c mi u o S we e u e n t e p e a a i oo M GB1 m o fH noco la tbo l na n i dy. The die tc r c om p ttv e ii e ELI SA wasus n t t c i ats r ed i he de e ton ofr e um M G B1 Re u t H . s ls Se e l v n cone brdom as c e i M G B1m ono l na ntb y w e eob ane A ompe ii sofhy i e r tng H c o la i od r t i d. c ttveELI as d on H M GB1 SA b e 一

H o jg t se tbi e . d t ec mp t ieE I A wa u d t d t c HMGB a gn o 2 g ml n RP c nu aewa sa l h d An h o ei v L S s o n o ee t s t f 1 n i f m 1 o3 0/ d r g r t n a t a ear c v r a gn o m 9 t 0% a daC r m . t . . yu ig t ec mp t i I A eet oh v e o e y rn i fr 7 g o1 6 n V fo 2 6 o 7 3 B s h o ei v EL S t d tc n te ot e s r m e e o h e u lv l fHM GB1 o a s, sf u d t a h fr t i wa o n h t t e HM GB1 lv l n t e r t t ib t s mel u smu h hg e t e e h a swi d a e e l t s wa c i h r i h i

t a h ti o ma n s尸< O 0 1 . n lso Th

o eiieELI A ae nHMGB1HRP c nu aei ap atc l h n ta n n r l e ( o . 0 ) Co cu in ec mp tt S b sd o v一 o jg t s r ci am et d f rde e ton o M G B1, nd i i a i nd m o e r pd t n s n ho o t c i fH a t se sera r a i ha a dw ih ELI c SA a e n a i dis b s d o ntbo e . K e wor s: M G B1; on l a ntb dy; om p ttve ELI y d H m ocon la i o c e ii SA

细高迁移率族蛋白 B1 hg bly g o p血病细胞分化。作为晚期炎性细胞因子，胞外 ( ih mo it ru i bx, o 1 HMGB ) 1旧称为 HMG1因其在凝胶电泳中 HMGB, 1与多种疾病过程有关，如，脉粥样硬例动 4缺血性心脑血管疾病[、] 5急性创伤[、漫性] 6弥]迁移速度快而得名。 HMG 1由 2 5氨基酸残基化[、 B 1个组成，子量约 3 D,高度保守的染色质蛋血管内凝血 L、毒症 L以及某些自身免疫病[分 0k a是 7脓] 2 8白，哺乳动物的氨基酸序列同源性高达 9%,在 8鼠与人类 HMG 1的不同点只是 C末端重复序列中 B有 2残基被置换L]个 1。 HMG可表达于多种细胞， B1大多分布在细胞核中。细胞核中 HMGB 1主要和 D NA结合起骨架 (少年风湿性关节炎、青药物诱导自身免疫病、自身免疫性肝炎、系统性红斑狼疮和系统性硬化病 )在。这些疾病患者血清中， HMGB 1的水平均有明显升

高。还有研究认为， HMG 1可作为脓毒血症的诊 B断指标和弥漫性血管内凝血的预后指标。因此，对HMG 1的研究日益受到重视。 B

蛋白作用。HMGB 1可提高一些转录因子如 Ho, x P u蛋白等与 D o NA的亲和力，挥转录调节作发用[。HMGB 3] 1也可通过被动释放和主动分泌方式分泌到细胞外，械损伤和细胞坏死也可将细胞核机

本实验的目的是制备 HMGB 1单克隆抗体和建立 HMGB 1的 E IA测定方

法，于 HMG LS用 B1的实验室和临床研究。1材料和方法

内的 HMGB 1释放至细胞外。 血管内皮细胞增生，抑制神经轴突生长，激红白刺

. Sg )细胞外 HMG 1参与肿瘤的发生和转移，激 1 1主要试剂和动物 HMGB1( ima、 B刺

HMG 1B A偶联物 (津医科大学免疫教研室 B一S天

作者简介：王

维 ( 97 )女，津人，师，读硕士，要从事输血免疫及临床免疫方法学研究， l0 22 6 1 0,— i:u 17一，天医在主 Te:2—7 1 7 8E ma d— l

a et@y h o t m. a n ru a o . o c。

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