恩诺沙星明胶微球的研究

恩诺沙星明胶微球的研究

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中国兽医杂志２００６年（第４２卷）第４期

ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｅｔｅ“ｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ

恩ｌ谍｝沁｝星｝姝｝靶ｌ甑｝微｝球｝娟｝砥｝茕

周友中１，李

锐１，林佳洁１，朱树汉２，肖希龙１

（１．中国农业大学动物医学院，北京海淀１０００９４；２．广东四会市动物防疫监督所，广东四会５２６２００）

中图分类号：Ｓ８５９．５

文献标识码：Ｂ

文章编号：０５２９—６００５（２００６）０４—００６０—０２

恩诺沙星（ＥＮＲ）是兽医专用的第３代氟喹诺酮类抗菌药，有广谱杀菌作用，对革兰氏阴性杆菌和球菌、阳性菌、支原体、衣原体均有杀灭作用，对静止期和生长期的细菌均有效，其杀菌活性依赖于浓度［１］。临床上主要用于各种动物敏感菌引起的各种感染。

随着耐药性的产生导致药物治疗效果的降低，且喹诺酮类药物体内分布广泛，所以在治疗动物的肺炎、支气管炎等呼吸道感染时，要使药物在肺部组织达到有效的浓度，势必增加药物的剂量，这样易造成药物在其他组织中残留的增高并产生一些毒副作用。因此尝试研究恩诺沙星的一种新的剂型一肺靶向微球，利用微球静脉注射后被肺毛细血管机械性滤取而表现肺靶向性Ｄ］，以提高治疗动物的呼吸道疾病的效果，降低毒副作用。目前国内外未见恩诺沙星微球的相关报道。１材料与方法

１．１

１．３恩诺沙星明胶微球的制备球（Ｅｎｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ

ｇｅｌａｔｉｎ

恩诺沙星明胶微

ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ，ＥＮＲ—ＧＭＳ）

是在空白ＧＭＳ制备工艺基础上，在明胶水溶液中加入一定量ＥＮＲ混匀作为分散相，照ＧＭＳ制备过程，即得到ＥＮＲ—ＧＭＳ。

１．４微球的外观观察和特性测定

使用光学显微

镜观察ＥＮＲ—ＧＭＳ，并用测微尺对其粒径分布进行统计。采用量筒法测定微球的堆密度，固定漏斗法测定休止角，醋酸纤维薄膜电泳法显示带电性，固体粉末法测定临界相对湿度（ＣＲＨ）。１．５微球的载药量与包封率测定

１．５．１

标准曲线的绘制取ＥＮＲ标准品加ｏ．１

ｍ０１／ＬＮａＯＨ溶解，配制系列浓度（１～９弘ｇ／ｍ１）标准溶液，然后按紫外分光光度法，在２７２ｎｍ波长处测定吸光度，将结果回归得出标准曲线：Ａ（吸光度）＝ｏ．０９８１Ｃ（浓度）一０．０８５５，ｒ—Ｏ．９９９７，测得高低不同浓度添加的平均回收率为９９．９５％，变异系数为

试验材料紫外分光光度计（美国

１．３８％（ｎ＝４）。

１．５．２

ＵＮＩＣＡＭ）；磁力加热搅拌器（德国Ｈｅｉｄ０１ｐｈ）；光学显微镜（重庆光学仪器厂）；恩诺沙星（东北兽药厂，纯度≥９９．４％）；酸性明胶（北京化学试剂公司，等电点为ｐＨ７～９）；液体石蜡（北京化学试剂公司）；Ｓｐａｎ８０（北京中邦德科贸有限公司）。

１．２空白明胶微球的制备参照文献［３］并根据单因素考察结果，选定对制备明胶微球（Ｇｅｌａｔｉｎｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ，ＧＭＳ）影响较大的４个因素；明胶浓度、搅拌速度、乳化剂用量及液体石蜡用量，每个因素选定３个水平，按Ｌ９（３４）正交设计表（见表１）安排试验设计，筛选出ＧＭＳ最佳制备工艺条件。

表１正交设计

样品药物含量的分析

将ＥＮＲ—ＧＭＳ用

Ｏ．１ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ溶液溶解，超声１５ｍｉｎ，于３７℃恒

温振荡６ｈ，过滤２次后稀释，用紫外分光光度计２５℃测定吸光度。载药量一微球中药物总量／明胶微球重量×１００；包封率（％）一微球中药物总量／投药量×１００。

１．６

ＥＮＲ—ＧＭＳ的体外释药试验采用动态透析

法口“］，精密称取ＥＮＲ和ＥＮＲ—ＧＭＳ装入透析袋内，置于加有溶出介质ｐＨ７．４磷酸盐缓冲液的锥形瓶中，３７℃恒温振荡（１００ｒ／ｍｉｎ），定时取样检测，同时补充等量的溶出介质，测定后计算累计释药百分率，得出体外释药曲线。

１．７

ＥＮＲ—ＧＭＳ的稳定性考察取ＥＮＲ～ＧＭＳ

３

批密封于西林瓶中，分别在冰箱（４℃）、室温（２５＾Ｃ）与３７℃（ＲＨ７５％）放置３个月，最后进行外观形态、料径及其分布、载药量、体外释药特性的考察。２结果与分析

２．１

收稿日期：２００５一０６一０９毒理学研究

通讯作者：肖希龙，Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｉａｏｘｌ＠ｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ

、

微球的制备工艺由极差Ｒ确定主次影响因素

作者简介：周友中（１９８１－），男，在读硕士，主要从事兽医药理氨

＼

及用量为：明胶溶液浓度１０％，搅拌速度７００ｒ／ｍｉｎ，乳化剂为２．ｏ％，水相、油相体积比１：７．５。以此确定ＥＮＲ—ＧＭＳ乳化冷凝法工艺为：取３０ｍ１液体石蜡为

万方数据　

恩诺沙星明胶微球的研究

ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ连续相，加Ｓｐａｎ

８０ｏ．６

ｍ１置于具塞锥形瓶中，于

６０℃混匀；取明胶ｏ．４ｇ，用４ｍｌ双蒸水水浴中完全溶胀，调ｐＨ值至５．ｏ后加入０．４

ｇ

ＥＮＲ混匀作为分散

相；搅拌下将水相滴入油相，制成ｗ／Ｏ型乳剂，再冰浴、加戊二醛交联固化、异丙醇脱水，然后用异丙醇、石油醚洗涤，真空干燥，即得到橙黄色微球。２．２微球的外观观察和特性测定结果

光学显微

镜下的ＥＮＲ—ＧＭＳ见图１，粒径分布见表２。通过测微尺测定ＥＮＲ—ＧＭＳ平均粒径（Ｄａｖ）为１１．７１牡ｍ，粒径７～３０ｐｍ范围内的微球占总数的９２．８％，形态圆整、分散性好、较少粘联。微球的其他参数见表３。

图Ｊ

ＥＮＲ—ＧＭＳ光学显微镜下照片（１００×）表２

ＥＮＲ—ＧＭｓ的粒径分布

粒径范围（扯ｍ）

平均值（ｐｍ）

微粒数

比例（％）

堆密繁≯ｕ唆些Ｐ

（ｎ一３）

（ｎ一３）需电性（％）

一

２．３微球的载药量与包封率根据ＥＮＲ的标准曲线回归方程计算，得到ＥＮＲ—ＧＭＳ的载药量为３８．２０±ｏ．３７％、包封率为４２．９６±０．３９％（ｎ一３）。

２．４

体外释药试验结果

试验结果表明ＥＮＲ—

ｈ释放药量为９４．３９％，ＥＮＲ

２

ｈ释放药

量为９３．２４％，从体外释药曲线（图２）计算得出ＥＮＲ的ｔ。／２约为２８ｍｉｎ，ＥＮＲ—ＧＭＳ的ｔ１／２为６．６

ｈ，ＥＮＲ—

ｍｉｎ内有突万

方数据中国兽医杂志２００６年（第４２卷）第４期

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ｒ—ｏ．９８１１。故可推论ＥＮＲ～ＥＭＳ在ｐＨ７．４磷酸盐缓冲液中属一级动力学规律释药。

２．５

稳定性考察结果ＥＮＲ—ＧＭＳ在冰箱（４℃）、

室温（２５℃）与３７℃（ＲＨ７５％）放置３个月，其外观形态、粒径及其分布、载药量、体外释药百分率与考察前均无显著变化，微球稳定性较好。

＾

水

褥求

妞

疆懿氍

嚓

时间（ｈ）

图２

ＥＮＲ—ＧＭｓ、ＥＮＲ体外释药曲线

３讨论

体内的网状内皮系统（ＲＥＳ，包括肝、脾、肺和骨髓等组织）具有丰富的吞噬细胞，可将一定大小的微粒作为异物而摄取，较大的微粒由于不能滤过毛细血管床，而被机械截留于某些部位。ｏ．１～３弘ｍ的微粒可被动靶向肝脏和脾脏为主的ＲＥＳ，７～３０肚ｍ的微

粒可被动靶向肺部，而小于５０ｎｍ的微粒可靶向骨髓。微球给药系统的靶向性可通过控制颗粒的大小、表面的性质如表面电荷、选择不同表面化学性能的载体材料等来实验［２“］。微球的表面性质主要指微球表面所带的电荷及表面亲和力，休止角５０。～６０。，即可被水润湿的微球最易被吞噬细胞吞噬［７］，且微球表面带较多的正电荷粒子较易到肺，疏水性的粒子易于在肺部沉积［８］。本试验制备的恩诺沙星微球平均粒径为１１．７１弘ｍ，粒径７～３０弘ｍ范围内的微球占总数的９２．８％，带正电荷、休止角为５７．８。，符合肺靶向的要求，载药量为３８．２０％有较好的实用性，体外释药试验

有明显的缓释作用，室温条件下性质稳定，其肺靶向

性及相关参数需在动物体内进一步研究。

近年来，兽医药剂学已经由普通的注射剂、片剂、散剂、预混剂等向缓释、控释、靶向制剂发展。肺

靶向微球是药剂学研究的一个热点，在兽医药剂学亦有广阔的应用前景，特别是宠物临床，但相关研究报道很少。参考文献：

［１］

朱模忠．兽药手册［Ｍ］．北京：化学工业出版社，２００２．１０３—

１０４．

［２］

陆彬．药物新剂型与新技术［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，

１９９８．

２２９—２３０．

［３］

Ｂ

Ｌｕ，ＪＱｚｈａｎｇ，ＨＹａｎｇ．

Ｌｕｎｇ—ｔａｒｇｅｔｉｎｇ

ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓｏｆ

ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＩｎｔＪＰｈａｒｍ，２００３，２６５：１—１１．

ｒ４］

曾凡彬，陆彬，杨红．盐酸川芎嗪肺靶向微球的研究［Ｊ］．药学

ＧＭＳ的４８ＧＭＳ有明显的缓释作用，其在最初３０破效应，之后转为缓释过程，释药可用一级动力学方程描述：ｌｎ（１一Ｑ）一ｏ．０５７２４ｔ—Ｏ．３１４７，相关系数

恩诺沙星明胶微球的研究

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中国兽医杂志２００６年（第４２卷）第４期

ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ

苯巴比妥残留快速检测阻断ＥＬＩＳＡ试剂盒的

研制及性能测定

王自良ｈ２，王建华１，杨艳艳３，张海棠２，柴书军３，张改平３

（１．西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌７１２１００；２．河南科技学院动物科学学院，河南新乡４５３００３；３．河南省农业科学院生物技术研究所，河南郑州４５０００２）

中图分类号：Ｓ５９．８４

文献标识码：Ｂ

文章编号：０５２９—６００５（２００６）０４一００６２一０３

苯巴比妥（Ｐｈｅｎｏｂａｒｂｉｔａｌ，ＰＢ）具有镇静、催眠建立：用０．０１ｍ０１／ＬｐＨ７．４的磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）等作用，在肉用畜禽生产中常被用作饲料添加剂，但配制ＰＢ标准品，浓度分别为Ｏ、１、２、４、８、１６、３２、６４、ＰＢ存在神经、骨髓、致畸、致癌等毒性作用，其残留１２８肛ｇ／Ｌ共９个，用阻断ＥＬＩＳＡ［４１测定ＰＢｍＡｂ对严重危害人们的身体健康口］，我国和世界上多数国不同浓度ＰＢ标准品的抑制效价。（３）标准曲线的绘家都严禁ＰＢ用作饲料添加剂［２］。目前，国外已开发制与曲线拟合：根据阻断ＥＬＩＳＡ所测抑制效价，以出ＰＢ残留检测的ＥＬＩＳＡ试齐０盒，如德国Ｄａｄｅ吸光率Ｂ／Ｂ。（Ｂ是ＰＢ不同标准浓度的ＯＤ。。。值，Ｂ０是Ｂｅｈｒｉｎｇ公司等，国内尚未见报道。本研究应用杂交ＰＢｏ标准浓度的ＯＤ。。。值）为纵座标，以不同标准品瘤技术在制备出ＰＢ单克隆抗体（ｍＡｂ）基础上，成浓度的对数值为横座标，在半对数座标纸上绘制标功研制出ＰＢ残留检测阻断ＥＩＬＳＡ试剂盒（ＰＢ—准曲线，推导回归方程，进行回归分析。（４）ＰＢ—ＫｉｔＫｉｔ），并对其性能进行了测定，现报告如下。的配置：组成为ＯＶＡ—ｐＡＰＢ包被并封闭好的８×１２１材料与方法

孔酶标板，Ｃ１号液（最佳工作浓度的ＰＢｍＡｂ），Ｃ２号液（最佳工作浓度的ＧａＭＩｇＧ—ＨＲＰ），Ｃ３号液（底１．１

材料与仪器ＰＢ，Ｓｉｇｍａ产品，纯度≥９９．ｏ％；

物缓冲液Ａ），Ｃ４号液（底物缓冲液Ｂ），Ｃ５号液（终包被抗原（ＯＶＡ—ｐＡＰＢ）、羊抗鼠酶标二抗（ＧａＭＩｇＧ—止液），ＰＢ标准品１～９，洗液（ＰＢＳＴ）等。

ＨＲＰ）、抗ＰＢｍＡｂ４Ｅ６一Ｃ７杂交瘤细胞株，本实验室１．３

样品预处理及ＰＢ—Ｋｉｔ的操作

（１）样品预处

制备、鉴定并冻存；其他试剂市售所得，ＡＲ级。５５０理：饲料样，称取ｌｏ．ｏｇ样品，加入４０ｍｌＰＢＳ和

型酶标仪，美国Ｂｉｏ—Ｒａｄ公司；ＥＬｘ一５０型洗板机，５ｍｌ

１ｍｏｌ／Ｌ

ＮａＯＨ溶液，搅拌３０ｍｉｎ，过滤，滤液

Ｂｉｏ—ＴＥＫ公司；ＡＥ２６０电子天平，Ｍｅｔｔｌｅｒ公司；３Ｋ一用１ｍ０１／ＬＨＣｌ调ｐＨ值７．２～７．４，处理后的样品已１８高速冷冻离心机，Ｓ遮ｍａ公司。

稀释５倍，测定结果相应扩大５倍；猪尿样，一般可直１．２

ＰＢ—Ｋｉｔ的研制（１）ＰＢｍＡｂ与ＧａＭＩｇ—ＨＲＰ

接用于检测，若浑浊不清，可过滤，取滤液用于检测。最佳工作浓度的确定：用方阵法［３１确定ＰＢｍＡｂ和（２）ＰＢ—Ｋｉｔ的操作：第一步，根据待测样品数量取出ＧａＭＩｇＧ—ＨＲＰ的工作浓度。（２）阻断ＥＬＩＳＡ方法的

所需酶标板并标记对照孔和样品孔，样品也加入ｃ１号液和待测样品各５０弘ｌ（对照孔加ＰＢＳＴ），室温孵收稿日期：２００５一１１一１４

育１５ｍｉｎ，ＰＢＳＴ洗６次；第二步，每个样品孑Ｌ加入Ｃ２基金项目：国家８６３项目资助（２００１ＡＡ２４９０３０）

号液５０ｐ１，室温孵育２５ｍｉｎ，ＰＢＳＴ洗６次；第三步，作者简介：王自良（１９６６一），男，副教授，博士，从事动物性食品安全生物技术研究。Ｅ—ｍａｉｌ：ｗａｎｇｚＬ２００８＠Ｙａｈ００．ｃｏｍ．ｃｎ

每孑Ｌ加入Ｃ３、Ｃ４号混合液１００弘ｌ，室温反应１０ｍｉｎ，通讯作者：张改平，电话：０３７１—６５７３８１７９Ｅ—ｍｉａｌ：Ｇａｉｐｉ“ｇｚｈａ“ｇ

加入Ｃ５号液１００弘ｌ终止反应；第四步，用酶标仪读２００３＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ

取各孔ｏＤ。。。值。结果判定，根据各样品的Ｂ／Ｂ。值在

学报，１９９６，３１（２）：１３２一１３７．ｉｎ

ｂｅａｇｌｅ

ｄｏｇ［Ｊ］．ＪＰｈａｒｍｓｃｉ，１９８０，６９（７）：７５５—７６２．

［５］

ｚｈａｎｇ

ｗ，Ｊｉａｎｇｘ，ＨｕＪ，以口ｚ．Ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎｐｏｌｙｌａｃｔｉｃａｃｉｄ

［７］ＴａｂａｔａＹ，ＩｋａｄａＹ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｓｕｒｆａｃｅｗｅｔｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｍｉｃｒｏｓｐｈｅ—

ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓｆｏｒｌｕｎｇ

ｔａ‘ｇｅｔｉｎｇ［Ｊ］．ＪＩⅥｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ，

ｒｅｓ

ｏｎ

ｐｈａｇｏｙｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｊｃｏｌｌｏｉｄｉｎｔｅｒｆａｃｅｓｃｉ，１９８９，１２７：

２０００，１７（６）：７８５—７８８．

１３２—１３９．

［６］ＫａｎｋｅＭ，ｓｉｍｍｏｎｓＧＨ，ｗｅｉｓｓＤ

Ｌ，以ｎｚ．ｃｌｅａｒａｎｃｅｏｆ１４１ｃｅ—

［８］

ＩｌｌｕｍＬ，Ｄａｖｉｓｓｓ．Ｔｈｅ

ｔａｒｇｅｔｉｎｇ

ｏｆｄｒｕｇｓｐａｒｅｎｔｅｍｌｌｙｂｙ

ｕｓｅ

Ｉａｂｅｌｅｄｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ

ｆｒｏｍｂｌｏｏｄａｎｄｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｉｎ

ｓｐｅｃｉｆｉｃ

ｏｆ

ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ［Ｊ］．ＪＰａｒｅｎｔｅｒｓｃｉＴｅｃｈｎｏｌ，１９８２，３６（６）：

ｏ‘ｇａｎｓ

ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ

ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓａｎｄｉｎｔｒａａｒｔｅｒｉａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ

２４２—２４８

万　

方数据

恩诺沙星明胶微球的研究

恩诺沙星肺靶向微球的研究

作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：

周友中， 李锐， 林佳洁， 朱树汉， 肖希龙

周友中,李锐,林佳洁,肖希龙(中国农业大学动物医学院,北京,海淀,100094)， 朱树汉(广东四会市动物防疫监督所,广东,四会,526200)中国兽医杂志

CHINESE JOURNAL OF VETERINARY MEDICINE2006，42(4)2次

参考文献(8条)

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引证文献(2条)

1.远立国.李成明.杜琼.张秀英 兽药缓控速释药剂型的研究进展[期刊论文]-中国兽医科学 2007(8)2.任海霞.朱家壁.汤玥 微球制剂的应用研究进展[期刊论文]-药学进展 2007(2)

本文链接：/Periodical_zgsyzz200604022.aspx授权使用：华中农业大学(hzny)，授权号：771c6e25-1546-42ca-98f4-9e0f0165632e

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本文来源：https://www.bwwdw.com/article/6k61.html