细胞培养基质量规范及检验方法

欢迎阅读细胞培养基质量标准及检验方法

中国医药生物技术协会

二0一一年四月

编写说明

一、根据中国医药生物技术协会2010年9月20日组织召开的《动物细胞培养基生产管理

称取每升标示量的实验室样品，置于1000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml,搅拌均匀。按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅤA进行。

2.3干燥减量的测定

按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅦL干燥失重测定法进行。

2.4渗透压的测定

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称取每升标示量的实验室样品，置于1000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml,搅拌均匀。按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅤH渗透压摩尔浓度测定法进行。

取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的5%。

2.5细菌内毒素的测定

按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅫE细菌内毒素检查法中的凝胶法进行。

2.6

2.7

2.7.1

72h，养

；

，混

150代。

4)细胞培养液：按产品使用说明书要求配制；

3)胰蛋白酶溶液：称取胰蛋白酶（1:250）2.5g，精确至0.01g，加1000ml平衡盐溶液，混匀、测pH值，用1mol/LNaOH或1mol/LHCl调pH值7.6～7.8，过滤除菌即得。

2.7.1.3仪器

1）医用净化工作台：洁净级别为百级.

2）二氧化碳恒温培养箱：能通二氧化碳气体并且保持二氧化碳体积分数为（5±0.1）％，能在（37±1）℃恒温。

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3）细胞培养瓶：T25型、无菌。

4）显微镜：倒置、相差。

5）血球计数板。

6）盖玻片：无水乙醇浸泡并擦干。

2.7.1.4试验步骤

1）制备细胞悬液

A取长成致密单层的细胞种子，将原细胞培养液从细胞培养瓶内吸出，用适量平衡盐溶

B

C

A

B

C

D

E

3)

A

B

C

沿盖玻片边缘点加细胞悬液使其通过毛细作用自然渗入，不要留有气泡，不要外溢，显微镜下计数。

D观察计数板四角大方格中的细胞数，细胞压中线时，一般遵循“计左不计右，计上不计下”的原则。将计数板观察细胞数代入下列公式：

计数板观察细胞数×104×稀释倍数/4＝细胞数/ml

2.7.1.5分析结果的表述

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培养72h的细胞，细胞形态应正常，活细胞数量应达到1×105个/ml以上。继续维持培养48h的细胞形态应正常，活细胞数量应不小于1×105个/ml以上。

2.7.2悬浮型细胞生长试验

2.7.2.1方法提要

本试验所用容器具及溶液均为无菌，试验操作过程均为无菌操作。

细胞在37℃恒温条件下，在细胞培养液中悬浮生长72h，观察细胞形态，进行72h细胞计数。

1

2

仪器

1

2

3

4

1

2

3

4

5

1

2～3

2）计数：步骤1）进行。镜下观察可见细胞分散各处，健康细胞胞体完整，透明不着色，凡着色细胞均为死细胞。记录活细胞数及细胞总数。

3）活率计算细胞活率%=（活细胞数量/细胞总数）×100%

6分析结果的表述

悬浮培养72h的细胞形态应正常，培养72h细胞数量应达到1.0×106个/ml以上,活率应达到90%以上。

2.8牛血清白蛋白残留量

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依据中华人民共和国药典2010年三部附录ⅧI牛血清白蛋白残留量测定法进行，不得检出牛血清白蛋白。

2.9抗生素残留量

依据中华人民共和国药典2010年三部附录ⅨA抗生素残留量测定法进行，不得检出青霉素、链霉素及庆大霉素。

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