AB液质操作规程

第一部分开关机

A A、开机

1.打开UPS电源，打开氮气发生器（气瓶），确认Curtain gas的输入压力为0.4MPa， gas1/2为0.7MPa，exhuast为 0.4MPa。

2.打开机械泵电源开关（5500系列直接打开质谱主机电源，仪器自动启动机械泵） 3.等机械泵工作至少30min 5.打开质谱主机电源开关 6.过夜抽真空 B B、关机

1.停止输液：关停针泵或液相泵，或断开输液管线（一般质谱主机Standby后液相系

统也自动待机，输液泵自动关停，但建议操作人员再次确认，必须保证没有任何液体

再泵入质谱）

2.使仪器待机，并灭活配置

2.关闭质谱仪主机电源开关（5500系列只需按下电源开关旁的VENT按键排放真空）

3.机械泵继续工作至少30min

4.关闭机械泵上的电源开关（5500系列会自动关停机械泵，待机械泵停止后即可关闭

5500系列主机上的电源开关） 5.关闭气体发生器或气瓶

第二部分调谐

1、PPG就是正离子校正液，PPG3000负离子调谐液，本台仪器只用两瓶校正液，正离子一瓶，负离子一瓶。洗液一瓶50%的甲醇水。调谐前先用洗液洗针两次。吸校正液的时候慢慢吸，避免吸入气泡，吸好以后将针泵卡住。再将高度调到5，将管路重新连接。不再连接六通阀，由质谱直接进样，且将针泵的速度调到10μL/ml。

2、调谐液弄好后在仪器面板工具栏上：TOOl→项目→创建项目。此项目为一个文件夹，文件夹里面包括所有此次采集的信息，方法、序列等，且所有采集的项目都固定在一个文件夹下面：D:/Analyst Data/Project。新建项目的时候，弹出窗口中有个Add All，可以创建孙文件夹。

3、联机：软件打开后在左上方硬件配置（单机选中，双击打开）→只需选中仪器MS→active profile。图标变为绿色，表示联机成功。调谐只需要选中质谱。仪器的实时状态可以点击右下方的图标，质谱和液相都是单独观察，质谱要注意真空度，为0.5.

4、调谐→手动调谐→项目（文件夹）选中下拉菜单中的Installation 20161102（为系统默认的调谐文件夹），先Q1→start syring pump（打开针泵）→start（质谱），开始采集以后观察基线是否平衡，若等两分钟还未平衡好，则手动将针泵往上抬。

5、平衡好后（基线平稳则为平衡好），重新进样，重新点击start syring pump。Resolution（分辨率）→advanced（高级选项）（看到结果后调节质量轴和分辨率做准备，只能先打开这个，再打开谱图）→实时质谱图右键→open file→随便点一个框→软件上方的从谱图校正 →PPG.POS(正离子) →start→出现三行：（1、质量轴。2、分辨率。3、两次调谐的差异）→若质量轴有差异→右上角 →yes→若分辨率飞离出虚线→offset（偏大调大，偏小调小）输入校正的数值，再重新进样，如此反复，直到点落在虚线以内，实线代表最合适。

6、校正好后仪器会自动保存，直接关掉窗口即可。负离子调谐和正离子调谐步骤一样，只是在选择方法的时候要注意选择负离子模式。还有看结果时要选择PPG3000.此为负离子调谐液。调谐因针泵流速很小，10μL/ml，所以不需要设定离子源温度及辅助气，直接设定喷雾器流速为50，就可以将样品雾化，气帘气也不需要设置，因为没有多余的溶剂需要吹走。

第三部分：方法优化

1.在Analyst软件Tools菜单中选择Project→Create Project。在Project name项下输入新建的Project名称。注意，不要点选窗口中的其他按钮！点击OK，确认新建Project。

2.在Analyst软件界面下，双击导航栏内Hardware Configuration。在弹出窗口中选择MassOnly，点击Activate Profile，激活MassOnly（只联接质谱主机）。 3.在导航栏内单击Tune and Calibrate，进入调谐模式。点击上方工具条中的T钮。此时，应注意到主机有“扑”声音，表明进入调谐状态。此时右下角质谱状态显示绿色。双击Manual Tuning，进入质谱参数设置及运行窗口。

4.使用1mL玻璃进样针吸取适当标准溶液，置于进样针座上。点击MS Method下拉菜单，选择Syringe Pump Method，设定针泵流速Flow Rate为10μL/min。 5.点击Start Syringe Pump按钮开针泵进样。

6.返回MS Method，选择扫描模式Scan Type为Q1 MS，设定扫描速度Scan Rate为10Da/s，设定扫描范围Start——Stop设定为50——化合物分子量。DP预输入60。

7.点击start开始采集数据。运行稳定后，注意观察是否有预期的母离子出现，并控制其响应值在约E4以下。点击stop，选择第一个峰（后面是同位素峰）的平稳段，双击，选中母离子。点击右键，选择Delete Pane。

8.设定Scan type为产物离子扫描Product Ion（Ms2），扫描速度200Da/s，选择扫描正/负离子，输入母离子（product of），设定扫描范围start——stop为50——MW+20，覆盖可能的子离子质量范围，点击compoud标签，设定（DP）60，（CE）5。

9.点击start，开始采集数据，注意观察是否有预期的母离子出现。手动调节CE，以5eV为步长，逐渐增加。每次增加后稍作等待，直至目标化合物的子离子清晰看见。选择平稳的一段，双击，选择子离子。

10.选择Scan Type为MRM。设定参数表格中的Q1对应的母离子，Q3对应的子离子，time（ms）为50，ID值设为名称 1（定量），名称 2（定性）。 11.点击Edit Ramp，在Parameter下选择Collision Energy，点击OK。点击start开始采集数据，记录每个MRM通道的最佳CE电压。在MRM参数设定表中，右键点击。选择Collision Energy CE，调出表格中的CE列，输入每个MRM通道的最佳CE电压值，精确到个位数。重复以上步骤，在Parameter项下选择Declustering Potential，优化并保存DP。完成后选择菜单File/Save保存采样方法，[文件名].dam。

第四部分：方法建立

一、LCMS方法的建立：

1、连接仪器：打开 HPLC质谱电源，将 HPLC系统接上柱子，将6号出口管线与离子源连好。调离子源喷雾针位置到2mm处，双击Hardware Configure，在硬件配置菜单下单击LCMS ( 液相与质谱联用 )，单击Activate profile激活仪器，会听到笛的一声，说明仪器已经连接上。

2、确认液质同步：选择项目（之前优化方法的时候已经建立的项目）；双击Build acquisition method新建方法，弹出新建方法模板。在模板左侧点击acquisition method，模板右边显示对应的参数，确认synchronization mode选择LC Sync,表示液质同步。

3、设置MRM参数：点击方法模板左侧的MRM, 在模板右侧 Scan Type下选择MRM；在polarity下选择化合物极性：Positive(正离子)、Negative（负离子）；Duration为15min(与液相分离相同的时间)；表格中Q1：母离子分子量，Q3(Da)：子离子分子量，Time（msec）：50，ID栏：化合物名称（离子对名称后空格加1为定量，空格加2为定性），在表格中右键分别单击DP、CE，点击工具栏的OPEN打开之前优化的方法参数，调出DP,CE值，选中整行，Ctrl+c(复制)参数，关闭窗口，再Ctrl+v(粘贴)参数）；最后点击Edit parameter设置离子源参数：Source/Gas项用以下推荐值：CUR 35，IS:5500(正离子) 或-4500（负离子），TEM 600，GS1 60，GS270，点击OK。

4、设置液相参数：点击模板左边的shimadzu LC system，①在右边的pumps栏下，设置stop time （运行时间）为15min， flow流速为1mL/min，A为水相设为95%，B为有机相设为5%（设置时改B，A自动），泵最大压力为50；点击time program设置液相梯度：例咪唑类梯度设置： Time(min) --- 5 10 10.1 15 A 95% 5% 5% 95% 95% B 5% 95% 95% 5% 5% ②接着在右边的Auto sampler栏下，设置清洗时间，在Rinse mode 下选择Before and after(前后都洗)，并设置清洗时间为5s，清洗液用50%甲醇水。最后点击保存按钮,在保存窗口输入该方法的名称。 二、建立批处理：

1、双击Build acquisition batch，在右边窗口set栏为批处理保存的文件夹命名以便识别，再点击add set，最后点击add sample，再选择之前建立的LC-MS方法，在弹出的窗口内的number（进样样品数）处填入需要进样的样品个数，点击OK。

2、在加入的样品列表内依次填写sample name（样品名称）、via position（样品瓶的位置）、inj.volunme（进样体积：一般5微升或10微升）。

3、在submit项下点击submit按钮以提交样品序列。

4、点击工具条上左上角的view queue按钮，可查看已提交的样品。 此时将仪器从校正状态退出，进入分析模式。确认泵已打开，首次进样液相先排气，再平衡仪器：先点击工具条上的equilibrate平衡按钮，在弹出的平衡窗口中输入平衡时间10min，点击ok。右下角图标会变黄，待平衡结束后此处图标会变成绿色，此时即可点击start sample按钮采集样品信息，仪器会自动对已提交的全部样品进行采集。

第五部分数据处理

1. 双击打开Multiquilt，选择项目，点击File下的荧光棒型图标，点击sample，选择需要的标准品和样品数据，点击next，create new method，为方法命名，点击next，选择一个有代表性的样品（一般选择浓度较大的标品数据），设置分组（同一物质定量离子和定性离子设置为一组），并指定内标，next，对每个物质进行积分。 2. 设置积分参数：

a、 CausianSmoth（平滑）：一般是0，如有毛刺可改成1或2； b、Expeceted Time（保留时间）:一般不动

c、 Expected time范围：一般30s，表示在保留时间±15s范围 d、最小峰宽 e、 最小峰高

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