实验五___放线菌、霉菌及真菌的形态观察

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实验五

放线菌、 放线菌、霉菌及酵母菌的 形态观察

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一.实验目的学习并掌握观察放线菌、 学习并掌握观察放线菌、霉菌及酵母菌 形态的基本方法； 形态的基本方法； 初步了解放线菌、霉菌及酵母菌的形态 初步了解放线菌、 特征。 特征。

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二.实验原理1.放线菌：是一类主要呈菌丝状生长和孢子繁 放线菌： 放线菌 殖的陆生性较强的革兰氏阳性细菌， 殖的陆生性较强的革兰氏阳性细菌，广泛分布 于含水量低、有机质丰富的微碱性土壤中。 于含水量低、有机质丰富的微碱性土壤中。 放线菌的菌落形态特征为：形成干燥、 放线菌的菌落形态特征为：形成干燥、不透 表面呈致密丝绒状，上有一层彩色“干粉” 明、表面呈致密丝绒状，上有一层彩色“干粉” 的菌落。菌落与培养基连接紧密，难以挑取， 的菌落。菌落与培养基连接紧密，难以挑取， 菌落正反面颜色不一致， 菌落正反面颜色不一致，在菌落边缘的琼脂平 板上有变形的现象，有泥腥味。 板上有变形的现象，有泥腥味。

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放线菌在显微镜下一般气丝在上， 放线菌在显微镜下一般气丝在上，基丝在 气丝色暗，基丝较透明。 下，气丝色暗，基丝较透明。有的放线菌 只产生基丝而无气丝。 只产生基丝而无气丝。 本实验采用插片法来观察放线菌的菌丝形 态。

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2.酵母菌：酵母的菌落形态与细菌的相仿， 酵母菌：酵母的菌落形态与细菌的相仿， 由于酵菌细胞比细菌的大， 由于酵菌细胞比细菌的大，细胞内有许多分化 的细胞品，细胞间隙含水量较少，不能运动， 的细胞品，细胞间隙含水量较少，不能运动， 帮菌落较大、较厚，外观较稠和、不透明， 帮菌落较大、较厚，外观较稠和、不透明，菌 落颜色多为乳白色或矿烛色。 落颜色多为乳白色或矿烛色。 一些不产假菌丝的其菌落更隆起、边缘极圆整； 一些不产假菌丝的其菌落更隆起、边缘极圆整； 产假菌丝的其菌落较扁平，表面和边缘较粗糙。 产假菌丝的其菌落较扁平，表面和边缘较粗糙。

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a.形态观察：酵母是不运动的单细胞真核生物， 形态观察：酵母是不运动的单细胞真核生物， 形态观察 通常比常见细胞大几倍甚至十几倍。 通常比常见细胞大几倍甚至十几倍。 大多数 酵母菌以出芽方式进行无性繁殖， 酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁 有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。 殖；有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。 b.死活鉴定：美蓝是一种无毒的染料，它的氧 b.死活鉴定：美蓝是一种无毒的染料， 死活鉴定 化型呈蓝色，还原型呈无色。 化型呈蓝色，还原型呈无色。用美蓝对酵母的 活细胞进行

染色时，由于细胞的新陈代谢作用， 活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用， 细胞内具有较强的还原能力， 细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色 的氧化型变为无色的还原型。因此， 的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原 能力的酵母活细胞是无色的， 能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢 作用微弱的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。 作用微弱的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。

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3.霉菌：也呈菌线体形态，但霉菌的菌 霉菌：也呈菌线体形态， 丝和孢子比放线菌的粗得多。 丝和孢子比放线菌的粗得多。霉菌的菌 落形态较大，质地蔬松，外观干燥， 落形态较大，质地蔬松，外观干燥，不 透明，菌落与培养基间连接紧密， 透明，菌落与培养基间连接紧密，不易 挑取，菌落正反面，边缘与中心的颜色、 挑取，菌落正反面，边缘与中心的颜色、 构造通常不一致，有霉味。 构造通常不一致，有霉味。菌丝的孢子 较大， 较大，在低倍镜下即可清晰观察到有隔 或无隔菌丝和孢子及巨大的孢子囊。 或无隔菌丝和孢子及巨大的孢子囊。

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三. 实验步骤放线菌形态观察： 1. 放线菌形态观察： A. 用接种铲或解剖刀将平板上的菌苔连同培 养基切下一小块，菌面朝上放在一载玻片上。 养基切下一小块，菌面朝上放在一载玻片上。 另取一洁净载玻片置火焰上微热后， B. 另取一洁净载玻片置火焰上微热后，盖在 菌苔上，轻轻按压，使培养物(气丝、 菌苔上，轻轻按压，使培养物(气丝、孢丝或 孢子)粘附在后一块载玻片中央， 孢子)粘附在后一块载玻片中央，有印迹的一 面朝上，通过火焰2 次固定。 面朝上，通过火焰2~3次固定。 用番红染液覆盖印迹，染色约1min 1min后水洗 C. 用番红染液覆盖印迹，染色约1min后水洗 D. 干后用油镜观察

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2. 酵母菌形态观察及死活细胞鉴别： 酵母菌形态观察及死活细胞鉴别： 美蓝浸片的观察: A.美蓝浸片的观察: 按无菌操作取少量酵母菌与0.1 0.1% (1)按无菌操作取少量酵母菌与0.1%吕式碱性美蓝染 色液混合均匀，放置约3min 3min后 色液混合均匀，放置约3min后，先用低倍镜后用高倍 镜观察酵母的形态和出芽情况， 镜观察酵母的形态和出芽情况，并用颜色区别死活细 胞。 染色0.5h后再次观察，注意死细胞是否增加。 0.5h后再次观察 (2)染色0.5h后再次观察，注意死细胞是否增加。 0.05%吕式碱性美蓝染色液重复上述操作。 (3)用0.05%吕式碱性美蓝染色液重复上述操作。 B.水-碘液浸片的观察：先滴加碘液后加水，取少量 碘液浸片的观察：先滴加碘液后加水， 酵母菌混合均匀，盖上盖玻

片观察。 酵母菌混合均匀，盖上盖玻片观察。

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霉菌的形态观察： 3. 霉菌的形态观察： 先观察霉菌的菌落形态; A. 先观察霉菌的菌落形态; 然后在载玻片上滴加一滴0.1 的美蓝染液； 0.1% B. 然后在载玻片上滴加一滴0.1%的美蓝染液； C. 用解剖针或镊子从霉菌菌落底部小心挑取少 量已经产孢子的霉菌菌丝； 量已经产孢子的霉菌菌丝； D. 放在载玻片上的染液中 盖上盖玻片，置于低倍镜下观察， E. 盖上盖玻片，置于低倍镜下观察，必要时换 高倍镜。 高倍镜。

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四. 习题你认为在显微镜下，细菌、放线菌、 你认为在显微镜下，细菌、放线菌、酵 母菌和霉菌的主要区别是什么？ 母菌和霉菌的主要区别是什么？

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