分解纤维素的微生物的分离

专题课题3

二微生的培物养与应用分解纤维素的生物 的分微离

.基一础识 ㈠知.维纤素与纤维酶 1素.纤素维纤维素是种由葡一糖萄尾首连相成 而的分子化合物高是，含最量丰的多糖 类富质物。

考思纤维素：是球上含地最丰量的富 多类物质糖，植每物产年生的维纤素 超过70亿吨但却不会在地球，大量 上积的，为累什？

么纤维能素土壤被某些中微物生分解 利用这，因为是它们能产生纤维够素。酶人可应类分用解维纤的微素生将秸物 秆等弃物转变成酒废，用纤维精素处酶理 服面料装。

棉花等是自界中然纤维含量素高的最然产天。物

一

.础知识 基.㈠维素与纤维素纤酶2.维素纤酶纤维素酶是一复种合，一酶般认它为少至包 三种括分组，C即酶1(外酶)切、C酶(内切X)酶和葡 萄糖苷酶前，种酶两纤使素分维成纤解 二糖维第，种酶将三维纤二分解成糖萄葡糖

纤。维素

1酶、Cx酶

纤C维糖

二葡糖苷酶

葡萄萄

糖一.

基知础识㈠.纤素维与纤维素酶 .纤维3的分解：素分解纤维的微素物生，各种细有、菌 真菌少和放线菌数。

实:纤验维素酶解分维纤的实素验①取支二02mL的试 管各②入一加张滤纸条③加各pH4.入，物质8为量.01om/lL 醋的酸-醋酸缓冲液1钠1ml1和m0 l④乙在试管中入加1Lm纤素酶维 ⑤两支管固定在锥形瓶试，中放在 10r/m4ni摇的床振荡1h ⑥结上果乙：试的滤纸管消失条甲乙

讨：乙论试管的滤纸为条么什消失会？试管的作用甲是什 么?

一基础知.识㈡ .维纤分解细菌的素选：1.方法：筛刚 果染红法。色.2原：理刚 果红可以与纤素维形成红色复物合当， 维素被纤维纤素分酶后解红，复色合无法形物， 出现成纤维以分解素菌为中的心透圈明，们可我以 过是否通生透产明来筛圈选纤素分维解菌。3.优点 该方：法以通可颜色反应过直接选。筛

操作

步

骤1、土壤样取：富纤维素的环含中 境分布环①境②原因 由于 生物适一应定环的境环，境生对有选物择 用作在，富纤维含素环的境，纤中素分解菌维 的量含相对高，提此因从种这土样中获目得微 的物的几生率要于普通高境。环③实 ：例树 中多林年叶落成的形殖腐，土多年 累积的枯枝败等。叶④

论:讨果找如不到适合的境环可以将，滤 纸在埋壤中土，将纸埋滤在壤中土有么 作用？你认什为纸应该埋在土壤中滤深多

答？将滤：埋在土壤纸中能纤使素维分解 菌相集对中实际上，是人工置设纤维素分 解菌生的适宜环境存。一应般将 纸滤埋于约1深cm0右的左土中壤

。.实二验设与操作计 .实验㈠设计土：取样 壤择选养培 度稀释

将样品涂梯布鉴别到 纤维素解菌的培分养基上

挑选生产明圈 的菌透落

2选、择培 ①养目的： 加纤维素分增解菌浓的度，确保以能够 从品样分离所中要的微需生。

物

、选2培择 ②制养选备培择养：阅读书基P29本纤维 素解菌的分择选培养基 方配回，问题。

答A、旁栏的中方是配液培养基还体是体固培养基？为什？ B么这、培个基养微生物对是具否有择选用？如作果有具， 是如何进行择选的？ C你能否、设一计个照实验对说，明择选养培的基用

答作有：择选作用，配方本以纤维中作为 答：素是体液养培基，原是配因中方无凝固 剂答：牛肉用蛋膏白胨养基与培之照对或。唯一 源，只有能分解碳维纤素的微生可以物( 琼脂) 者纤维将素改为葡萄。 大量繁糖殖

。2、

选培养 ③操择作：称取样土20 g在，无条菌件加入装下30 m有L 培养基的瓶摇中将。摇置瓶摇于床上，3在 ℃0振下荡培 1~2养 ，至培d基变混浊养吸取一。的培 养定(约液 m5L)转，至另移瓶新鲜一的择选培 基中，养同样以方法培的养到培养液变浊。浑也可重复选择培 。养

〖旁思栏考题〗什为么选培养能够“择缩浓 所”的需生物微

在选择？养的培条件下，以可使些能那 适应这种营养条件的够微物生得到迅速 繁殖，而那不些适这种应养条营的件微 物的生繁殖被抑，制因可此起到以浓“缩” 的作。用

二.实验

计与设操 ㈠作实验设.计：土壤取样选择 培养 梯稀释度将样品涂布到别鉴纤维素 解分的菌培 养基上选产生挑明圈 透菌落

3的梯度稀释.照课按题1稀的操作释方法将选择培养，后 培养的进基行比稀释等11010~7倍

。101

120

103

14015

100

6

.4将品涂布到鉴别纤样维分素解菌的养培基上 鉴别培基养—在培养—基中 入某种指示加或化剂学品药用,以⑴ 备制鉴别培基养: 别不鉴同类的种微物。生配方见书本92页操。作过见课题1程(2涂)平布：板将稀度为释104106的菌~悬液各 取.01m涂l布到平板养基上培，30倒置 培养。℃

5刚果红.色法染

法一方先 ：养培生微 物再，加入果刚进行颜红色应。反 法二：在方倒 平 板就加时入刚果。 红〖栏思旁题〗考两这方种各有法哪优些点与足？ 染色法 不优 点色反应颜基本 方法 一是上维素纤 分菌的作用解操作简 不便存在菌落混 杂 问题缺点 作操繁琐刚果红会使菌 落之间生混发杂 产 淀粉生的酶生物也产生 微模透糊圈，明 有些微物生降能色素解， 成形明的显透明圈。方二

法思考：

方一法中NCla溶的液作？用漂洗作用，洗去与纤素结合维不的牢刚果红，以免出现的 透明圈够清不晰用。这方可以法判断酶 力的大活小，实上刚际红是结果合培养基到多糖的底物，但分 解纤素维的细菌以产生纤可维酶素能分， 这解个多糖物成为单底糖，样这果红刚就能不结合上 了，去化氯钠液溶就以使结合可牢的刚不红果洗 去这样，留下大大小就小透明圈的大的透，明当 然分解圈维纤的素就强能！

6、纯

培化养在产明生的透显圈的菌明落，取挑并 接到纤种维分解菌的选择素培 基上养，3在00C 3-70培C,可养获 得化培纯。养

〖旁

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