实验九 补骨脂素的提取,分离与鉴定
更新时间:2024-02-28 07:33:01 阅读量: 综合文库 文档下载
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实验九 补骨脂素、异补骨脂素的提取、分离和鉴定
补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea coryli folia L.的干燥成熟果实。具有补肾助阳、温中止泻之功。主治肾虚阳痿、遗精遗尿及腰膝冷痛,小便频数;外用治白癫风。补骨脂中含有数种香豆素和黄酮类成分,主要有补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂双氢黄酮(补骨脂甲素)、异补骨脂查耳酮(补骨脂乙素)、补骨脂次素等。药理研究证明,补骨脂甲素有明显扩冠作用,补骨脂素及异补骨脂素是具吸收紫外线性质的光敏性物质,因此是抗白癫风的有效成分,制剂有祛白素,补骨脂注射液、复方补骨脂酊等。 一、补骨脂中主要成分的物理性质
1.补骨脂素(psoralen) : C11H603, 无色针状结晶(乙醇),mp189oC, ~ 190oC。溶于乙醇、苯、氯仿、丙酮;微溶于水、乙醚和石油醚。UVλmax m( lgε ): 242sh (4.38), 247 (4.40), 291 (4.03), 330 (3.80)。 IRνmax cm-1 : 1710, 1630, 1575,1259。
2.异补骨脂素(isopsoralen): C11 H603, 无色针状结晶,mp137oC, ~ 138oC。溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿;微溶于水、乙醚,难溶于石油醚。UVλmax m( lgε ): 245 (4.38), 297 (3.96)。 IRνmax cm-1 : 1724, 1709, 1613, 1513, 1370, 1330, 1266, 1250, 1055, 999, 833, 747。
3.补骨脂双氢黄酮(补骨脂甲素)(bavachin, corylifolin): C20H2004, 无色结晶,mp191oC, ~ 192oC,[α]D为-29.1o(乙醇)。
4. 异补骨脂查耳酮(补骨脂乙素)(isobavachalcone, corylifolinin): C20H20O4,黄色针状结晶,mp154oC, ~ 156oC。
5.补骨脂次素(psoralidin): mp292oC。 二、目的要求
1. 掌握用溶剂法提取呋喃香豆素类化合物的操作技术。
2. 通过补骨脂素和异补骨脂素的分离,熟悉干柱色谱法的操作技术。 3. 掌握香豆素类化合物的鉴定方法。 三、基本原理
根据内酯类化合物在乙醇中溶解度大,水中溶解度小的性质,利用乙醇,从中药补骨脂中提取补骨脂素及异补骨脂素,并用活性炭进行脱色,最后利用两者的极性差异,用氧化铝干柱层析予以分离。 四、操作
(一)提取分离流程
(二)提取
1.超声波振荡提取
取补骨脂粗粉200g,用50%乙醇1500m1分3次进行超声波振荡提取,每次30min, 过滤,合并滤液,回收乙醇至无醇味,放置过夜,倾去上清液,得棕黑色粘稠物。将棕黑色粘稠物加20倍量甲醇分4次回流,每次15min,趁热抽滤,合并滤液,浓缩至小体积,放置析晶,滤取结晶,80oC干燥即得补骨脂素粗品,称重。 2.浸渍法提取
称取补骨脂粗粉200g,用50%乙醇浸泡3次,每次24h,合并3次滤液,回收乙醇至无醇味,以下操作同1法。 3.称取补骨脂粗粉200g,放入1000ml烧瓶中,加入50%乙醇500ml,热回流1h, 过滤,回收乙醇至无醇味,放置过夜,倾去上清液,得棕黑色粘稠物。将棕黑色粘稠物加80ml甲醇溶解,加少许活性炭,回流l0min,趁热抽滤,滤液回收甲醇至小体积,放置析晶。 (三)精制
将上述粗品加适量甲醇(3:100的比例)溶解,加少许活性炭,回流l0min,趁热抽滤,滤
③
液放冷析晶,滤取结晶,少量甲醇淋洗,80oC以下干燥即得补骨脂素精品。 (四)补骨脂素和异补骨脂素的分离
取色谱用中性氧化铝40g,装于直径1.6cm*30cm的色谱柱中。取补骨脂素精品甲醇液约1-2ml,加样,以石油醚-乙酸乙酯(1:2)作洗脱剂,洗脱,每20ml为一溜份,各溜份回收溶剂后,用薄层板检查,和标准品对比,于紫外光灯下观察荧光与颜色。 (五)鉴定 1.呈色反应
(1)异羟肟酸铁反应 取补骨脂素精品少量,置于试管中,加入7%盐酸羟胺甲醇溶液2滴~3滴,再加10%氢氧化钾甲醇溶液2滴~3滴,于水浴上加热数分钟,冷却,用盐酸调至pH3~4,加1%三氯化铁试液1滴~2滴,观察溶液颜色。
(2)开环闭环试验 取样品少许加稀氢氧化钠溶液1m1—2m1,加热,观察现象;再加稀盐酸试液几滴,观察所产生现象。
(3)荧光 取样品少许溶于氯仿中,用毛细管点于滤纸上,于紫外光灯下观察荧光与颜色。 2.薄层色谱鉴定
薄层板:硅胶G—CMC-Na板。
点样:补骨脂素精品乙醇液、干柱色谱分得的两样品乙醇液、补骨脂素对照品乙醇液及异补骨脂素对照品乙醇液。
展开剂:石油醚一乙酸乙酯(2:3)。 展开方式:上行展开。
显色:在紫外光灯(365nm)下观察荧光斑点。 观察记录:记录图谱,计算Rf值。 五、附注
①原料最好用未炮制过的补骨脂种子,其中补骨脂素和异补骨脂素含量较高。
②补骨脂含大量油脂,据文献报道,用50%乙醇或40%丙酮提取,方法简便,得率高,亲脂性杂质少,乙醇又较丙酮便宜,故选用50%乙醇提取。利用香豆素内酯类的特点,用碱提酸沉法,由于补骨脂中含大量油脂和糖类成分,易发生皂化反应和形成胶状物,难以过滤,得率低。
③从补骨脂中提取得到的白色针状物,为补骨脂素和异补骨脂素的混合物,两者含量比随药材的品种、质量不同而不同,由于两者均属于光敏性物质,故临床应用时,不必将两者分开。在进行干柱色谱分离前,应先做薄层色谱检查两者的含量情况。 六、思考题
1. 从中药中提取香豆素类成分还有哪些方法?
①②
2.异羟肟酸铁反应的机理是什么? 参 考 文 献
1.洪永福等,补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的分离和鉴定,药学通报,(10)1979,447页.
2.徐永昭,补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取实验,中药通报,7(5)1982,30页. 3.翼春如等编,中药化学实验技术与实验,郑州,河南科学技术出版社,1986,291页. 4.吴焕,补骨脂的化学成分(综述),中草药通讯;(10)1978,32页.
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