阿司匹林综述(1)

药学综合性、设计性试验

（药物分析部分）

阿司匹林

Aspirin

C9H8O4 180.16

摘要 阿司匹林是一种历史悠久的解热镇痛药，诞生于

1899年。用于治

疗感冒、发热、头痛、牙痛、关节痛、风湿病，还能抑制血小板的聚集，用于预防和治疗缺血性心脏病、心绞痛、脑血栓形成，应用于血管形成术及旁路移植术也有效。《中国药典》收载的品种有阿司匹林片、阿司匹林肠溶片、阿司匹林肠溶胶囊、阿司匹林泡腾片和阿司匹林栓，以及国家食品药品地标收载的小剂量的阿司匹林肠溶片，这些药品成分相同，作用类似，市场应用广范。随着科学技术的进步，各种仪器设备、新方法的应用，形成了阿司匹林鉴别和含量测定方法的各异性。其理化性质如下：

（1） 本品为白色结晶或结晶性粉末；无臭或微带醋酸臭，味微酸；遇湿气即缓慢水解。

（2） 本品在乙醇中易溶，在三氯甲烷或乙醚中溶解，在水或无水乙醚中微溶。 （3） 结构中具有羧基具有酸性。

（4） 结构中有酯键，在氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液中溶解，但同时分解。 （5） 苯环具有紫外吸收。

关键词 阿司匹林 鉴别 含量测定

正文

试剂：三氯化铁试液、碳酸氢钠溶液、稀硫酸试液、中性乙醇、酚酞指示液、

氢氧化钠试液、盐酸试液

仪器：紫外分光光度仪、高效液相色谱仪、恒温恒湿箱、恒温水浴箱、薄层色谱

扫描仪、荧光分光光度计、紫外褶合光谱仪、气相色谱仪、烧杯、量筒、移液管、胶头滴管、滴定管、玻璃棒、研钵、电子天平

一、原料药的分析

鉴别：1.方法一：物理方法

（1）外观及熔点：纯乙酰水杨酸为白色针状或片状晶体，m.p135~136℃，但由于它受热易分解，因此熔点难测准。 （2）各种谱图:例如红外光谱 2.方法二：化学方法

（1）三氯化铁反应：水杨酸及其盐在中性或弱酸条件下，与三氯化铁试液反应分子中的酯键受热水解，生成紫色铁配合物，显紫堇色。这是部分本品水解成水杨酸，三价铁离子与水杨酸的酚羟基结合所致。

（2）水解反应阿司匹林与碳酸钠试液加热水解，得水杨酸钠，醋酸钠加过量稀硫酸后，水杨酸白色沉淀析出产生醋酸的臭气

(3)薄层色谱法：将阿司匹林供试品与标准品同时点样，比较斑点大小，位置。 (4)高效液相色谱法：具体方法见下页原料药含量测定 （5）紫外-可见光分光光度法： 含量测定 1. 酸碱滴定法

（1）直接滴定：取本品0.4g，精密称定，加中性乙醇20ml，溶解，加酚酞指示液3d，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/l）滴定。每1ml滴定液相当于18.02mg 的C9H8O4。(优点：简便、快速。缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定）。以及酸性杂质干扰（如水杨酸 ）。)

(2)水解后剩余滴定： 取本品1.5g，精密称定加氢氧化钠滴（0.5mol/l） 50.0ml，混合，缓缓煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mol/l）

滴定剩余的氢氧化钠。由反应式得知，硫酸标准液与阿司匹林的摩尔比为1∶1(优点：消除了酯键水解的干扰,缺点：酸性杂质干扰) 2.电极法测定

参比溶液并以Ag／AgCl丝作为内参比电极导出至离子计。电极使用前需于0.01mol／l水杨酸钠溶液中浸泡2h进行活化处理。电极及备用膜长期不使用时可洗净后．置于氮气氛围下保存。在此条件保存，电极的各项性能指标至少可于5个月内维持稳定。可用于阿司匹林原料药及制剂的分析。原理： 阿司匹林易水解得到水杨酸根离子，且反应定量。因此，通过对水杨酸根离子的测定即可得出样品中的阿司匹林含量。

3.高效液相色谱法：采用反相高效液相色谱法【1】

（1）阿司匹林对照品溶液的制备：精密称取阿司匹林对照品150mg，置50ml量瓶中，加乙腈适量使溶解并稀释至刻度；精密量取10ml，置25ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，制成含阿司匹林1200ug/ml的对照品溶液。

（2）部分降解供试品溶液的制备：精密称取阿司匹林样品150mg，平铺于50ml烧杯内，然后置于恒温恒湿箱（75℃、80%相对湿度）中加速其降解，一定时间后取出样品，按（1）项下方法制成部分降解的供试品溶液。

（3）含量测定：精密称取不同批样品150mg，置50ml量瓶中，加乙腈适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，取15ul注入液相色谱仪，记录峰面积。另取（1）项下方法制成的对照品溶液（含阿司匹林1200ul/ml）15ul，同法测定，按外标法计算阿司匹林含量。 优选：直接滴定法，原料药的纯度较高，可用容量分析法直接测定其含量，不用重新提纯和精制，本法所用仪器价廉易得，操作简便、快速；方法耐用性高；测定结果准确，相对误差在0.2%以下。 4、反相高效液相色谱法[1]：

（1）阿司匹林对照品溶液的制备：精密称取阿司匹林对照品150mg，置50ml量瓶中，加乙腈适量使溶解并稀释至刻度；精密量取10ml，置25ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，制成含阿司匹林1200ug/ml的对照品溶液。

（2）部分降解供试品溶液的制备：精密称取阿司匹林样品150mg，平铺于50ml烧杯内，然后置于恒温恒湿箱（75℃、80%相对湿度）中加速其降解，一定时间后取出样品，按（1）项下方法制成部分降解的供试品溶液。

（3）含量测定：精密称取不同批样品150mg，置50ml量瓶中，加乙腈适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，取15ul注入液相色谱仪，记录峰面积。另取（1）项下方法制成的对照品溶液（含阿司匹林1200ul/ml）15ul，同法测定，按外标法计算阿司匹林含量。 优选：直接滴定法，原料药的纯度较高，可用容量分析法直接测定其含量，不用重新提纯和精制，本法所用仪器价廉易得，操作简便、快速；方法耐用性高；测定结果准确，相对误差在0.2%以下。 5、动力学光度法测定衡量乙酰水杨酸

原理：碘对Ce4+和As的氧化还原反应有明显的催化作用，乙酰水杨酸和碘容易发生取代反应，使碘的浓度降低，导致碘的催化作用减弱，由此建立动力学光度法测定痕量乙配水杨酸的新方法。直接滴定法，操作简单、快速，方法耐用性高，测定结果准确。 二、制剂的分析

鉴别：（1）三氯化铁反应：取本品的细粉适量（约相当于阿司匹林0.1g）,加水10ml,煮沸，放冷，加三氯化铁试液1滴，即显紫堇色。（这是部分本品水解成水杨酸，三价铁离子与水杨酸的酚羟基结合显色所致。）

（2）取本品的细粉适量（约相当于阿司匹林0.5g），加碳酸钠试液10ml,振摇后，放置5分钟，滤过，滤液煮沸2分钟，放冷，加过量的稀硫酸，即析出白色沉淀，并发出醋酸的臭气。（水解反应阿司匹林与碳酸钠试液加热水解，得水杨酸钠，醋酸钠加过量稀硫酸后，水杨酸白色沉淀析出产生醋酸的臭气） （3）高效液相色谱法：在含量测定下记录的色谱中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。 （4）薄层色谱法： 含量测定： （1） 滴定法：

第一步中和：取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于阿司匹林0.3g），置锥形瓶中，加中性乙醇（酚酞指示显中性）20ml,振摇是阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）至溶液显粉红色。 第二步水解与滴定：再精密加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）40ml,，置水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定，

并将滴定结果用空白试验校正。每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于18.02mg的C9H8O4。

该法可用于阿司匹林片和胶囊的含量测定，由于片剂中常加入少量酒石酸和枸橼酸做稳定剂，在片剂储存过程中因酯键水解可产生水杨酸和醋酸，这些酸性物质对直接滴定可产生干扰，所以采用两步滴定法。 （2） 光谱法：

①紫外分光光度法[4] 原理：结构中具有苯环，具有紫外吸收的特性。精密称取在105℃干燥至恒重的阿司匹林对照品32.08mg, 置25ml量瓶中, 加0.1mol/LNaOH溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为贮备液。精密吸取上述储备液1.5,2.0,2.5,3.0,3.5ml, 分别置100ml量瓶中, 用0.1mol/LNaOH稀释至刻度, 摇匀, 照分光光度法, 在297nm处测定吸出度A,以A值对浓度C回归, 得回归方程为A=1.839×10

②分光光度法【2】 原理：阿司匹林肠溶片的主要成分为乙酰水杨酸, 分子中酯基在碱性溶液中可与羟胺反应生成羟肟酸; 后者在酸性条件下与三氯化铁形成酒红色的羟肟酸铁, 最大吸收波长为520nm,在一定浓度范围内, 吸光度呈线性关系, 可测出阿司匹林药片中乙酰水杨酸的含量。 标准溶液系列和样品溶液的配制：

分别取0. 5g/L乙酰水杨酸标准溶液0. 00ml( 空白溶液) , 0. 50ml, 1. 00ml, 1. 50ml,2. 00ml和阿司匹林样品溶液1. 00ml 置于25ml 容量瓶中, 分别加入7% 盐酸羟胺乙醇液1. 00ml, 2 mol/L NaOH 1. 00ml, 放置3 分钟, 再分别加入4 mol/L HCl和10tCl3 各1. 00ml, 加水至刻度, 摇匀。 标准曲线的绘制：

标准溶液系列和样品溶液放置10 分钟后, 用空白溶液做对照, 在520nm 处测定吸光度。以吸光度为纵坐标, 标准溶液浓度为横坐标作图, 绘制出标准曲线。总之，阿司匹林的测定方法较多，处理样品方法也较多，各种测定方法都有他的优势，也有不足；同一测定方法在不同样品之间处理方法不同，灵敏度、检出限也不相同。因此，在实际样品中阿司匹林含量测定时，根据自身所有仪器条件，选择合适的测定方法或研究出新的测定方法。适用于阿司匹林片、阿司匹林肠溶片等。

3、双波长紫外分光光度法【3】

采用双波长紫外分光光度法测定波长为276nm 与322nm.结果:阿司匹林的平均回收率为100.3，RSFD为0.3%. 结论:本方法能有效地消除阿司匹林水解产物水杨酸对测定的干扰9方法简便,快速,准确。适用于阿司匹林肠溶片的测定。 ④、荧光光度法【4】

其原理为将阿司匹林配置成一定量的稀溶液，然后A=ECL可以计算出，小剂量阿司匹林的含量。适用于小剂量阿司匹林片的含量测定。 ⑤、差示分光光度法【5】

在波长297 nm 处, 阿司匹林以其在0. 1mol/l盐酸溶液为参比液, 测得其在0.1mol/l氢氧化钠溶液中的差示吸收值。结果:阿司匹林浓度在10. 29-30. 87 mol/l范围内A与溶液浓度呈良好线性关系( r= 0. 9998),平均回收率为99. 84% ( n = 6), RSD为0. 51%。结论:该法简便、快速、准确。适用于阿司匹林肠溶片的含量测定。 ⑥、紫外褶合光谱法

褶合曲线分析法是一种数学变换办法，根据谐波分析原理，将光谱吸收曲线看作是多个数学分量加权而成，由于它提供的信息量大，可以显示曲线的细微差异，以减少相似组分的数学相关性，所以在混合物定量方面具有明显的优点。小儿退热灵的主要成分为阿司匹林和苯巴比妥，侯巍等[9] 经褶合光谱仪采集其245～295 nm波长范围吸收度信息，产生褶合光谱，冉利用计算机信息处理技术的褶合曲线分析法对阿司匹林和苯巴比妥进行同时测定，获得了满意的结果。 ⑦柱分配色谱-紫外分光光度法：

USP32-NF27采用柱分配色谱分离消除阿司匹林胶囊和栓剂中辅料及降解产物的干扰。方法如下：

色谱柱的制备：于玻璃柱（20cmX2.5cm）下端少量玻璃棉，装入硅藻土3g和新制碳酸氢钠液（1→12）2ml的混合填充剂。

对照溶液的制备：去阿司匹林对照品50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加冰醋酸0.5ml，加三氯甲烷溶解至刻度，摇匀。精密量取5ml,置100ml量瓶中，加冰醋酸三氯甲烷液（1→100）稀释至刻度，混匀。制成每1ml中约含50μg的溶液。

供试品溶液的制备：取胶囊20粒，尽可能倾出内容物，精密称定，研细，混匀；取细粉适量（相当于阿司匹林50mg）, 精密称定，置50ml量瓶中，加盐酸甲醇溶液（1→50）1ml，加三氯甲烷稀释至刻度，混匀。精密量取5ml，移至色谱柱填充剂上，用三氯甲烷5ml,25ml相继洗涤，弃去洗液，用冰醋酸三氯甲烷溶液（1→100）85ml洗脱，收集洗脱液于100ml量瓶中，并用并醋酸三氯甲烷液（1→100）稀释至刻度，混匀。

测定方法：用1cm吸收池，以三氯甲烷为空白，立即于最大吸收波长280nm处测定对照溶液和供试溶液的吸光度，用下式将囊内容物细粉中含阿司匹林的量（mg）:

阿司匹林量（mg）=CR(AX/AR)

式中，CR阿司匹林对照液浓度(μg/ml); AX和 AR分别为对照品溶液和供试品溶液的吸光度。 （3）色谱法

【6】

①薄层色谱法：

供试品溶液的制备取本品细粉适量(约相当于阿司匹林50 mg)，加乙醇5 ml，振摇溶解，静置，取上清液，即得。

参比物溶液的制备取谷维素片2 片，研细，加乙醇3 ml 溶解，静置，取上清液即得。

薄层色谱鉴别取参比物溶液和供试品溶液各2 μl，点样于硅胶GF254 板（快检专用薄层板），将正己烷-乙酸乙酯-冰乙酸（15∶5∶1）混合液8～10 ml 倒入层析缸中，将点样完毕的薄层板放入，待展开前沿至距原点8 cm 处，将板取出，待展开剂挥尽，置于254 nm 紫外光灯下观察

2.2.4 精密度考察供试品的Rf值在日内（3 次/d）、日间（3 d）、温度（约10℃、20℃、30℃）及展距8 cm 进行精密度考察。结果判断：供试品中显主斑点的Rf值为0.30～0.60；主斑点与谷维素片的Rf值比值为0.60～0.75。 讨论

化学颜色反应为典型的水杨酸与三氯化铁的颜色反应，反应迅速，颜色明显。薄层色谱鉴别中，分离效果好，254 nm紫外光灯下斑点清晰明显， 精密度考察显示阿司匹林的Rf值为0.30～0.60；其与谷维素片的Rf

值比值为0.60～0.75。表明分离明显，稳定。

本研究中所建方法简单、快速，方法准确，可用最短的时间快速筛查出假劣药品，适合于药品抽样过程中的快速初筛。 ②高效液相色谱法

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20：5：5：70）为流动相；检测波长为276nm。理论板数按阿司匹林峰计算不低于3000，阿司匹林峰与水杨酸峰的分离度应符合要求。 测定法 取本品20片，精密称定，充分研细，精密称取细粉适量（约相当于阿司匹林10mg），置100ml量瓶中，用1%冰醋酸的甲醇溶液强烈振摇使阿司匹林溶解，并用1%冰醋酸的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤膜滤过，精密量取续滤液10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿司匹林对照品，精密称定，加1%冰醋酸的甲醇溶液振摇使溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。（《中国药典》(2010年版)二部采用此法）。适用于阿司匹林片、阿司匹林胶囊等各种剂型。

3气相色谱法【7】 原理：利用要分离的各组分在流动相和固定相两相间的分配差异，当两相作相对运动时，这些组分在两相间的分配反复进行，可以分离出组分，从而进行含量测定。色谱条件：色谱柱： 3％SE一3O+3% Carbonwax20M，Chromosorb WAWDMCS60~80目， 不锈钢桂长2m ， 内径3 mm。气体流速及温度： 载气： 氨气流速30ml/min， 氢气流速65ml／min ， 空气流速425ml／min， 柱温230℃，检测器温度240℃，进样器温度280℃， 1ul进样器。含量测定：准确称取阿斯匹林0．2g，于50ml烧杯中，加少量氮仿：乙醇(1：1)溶剂移至100ml容量瓶中。稀释至射度，摇匀。以上述色谱条件进样3次，每次0．5gl 以烽面积法分别计算含量。适用于阿司匹林片、阿司匹林肠溶片等。

参考文献

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[3] 池秀珍. 双波长紫外分光光度法测定阿司匹林肠溶片含量[J]. 海峡药学,2002,14(1)：27-28

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[5] 张宏祥，刘燕. 差示分光光度法测定阿司匹林肠溶片的含量[J]. 安徽医药,2010,14(8):901-902

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