医学实验室生物安全手册

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生物安全手册

（第一版）

AA大学附属RYC医院检验科

AA大学附属RYC医院检验科目录

1．生物安全管理体系1-1

1.1 紧急事件电话和办公室联系方式

1.2 生物安全管理机构

1.2.1 RYC医院生物安全管理机构

1.2.2 RYC医院检验科生物安全管理小组

1.3 职责

2．生物安全评估和管理2-1

2.1风险评估和风险管理表

2.2 暴露途径

2.3 生物安全等级和检查制度

3．标志3-1

3.1 墙面标志

3.2 门上标志

3.3 标贴和颜色

3.4 外送维修或处理的设备

4．生物安全要求和人员管理4-1

4.1 生物物质的使用登记

4.2 生物安全柜

4.3 人员管理

5．医学监督程序5-1

5.1 暴露于结核杆菌实验室工作人员的筛选

5.2 免疫

5.3 医学限制

5.4 实验室工作人员血清贮存

6．个人防护装备（PPE）6-1

6.1 实验服、隔离衣

6.2 手套

6.3 工作鞋

6.4 护目镜

6.5 口罩、帽子

7．实验室设备7-1

7.1 生物安全柜

7.2 离心沉淀程序

AA大学附属RYC医院检验科目录

7.3 化学吸附真空管和过滤器

7.4 注射器和针头

7.5 移液管

7.6 搅拌机、混匀器、超声波清洗和粉碎机

7.7 冻干

7.8 其它设备（水浴箱、冷藏箱、振荡器）

8．实验室操作8-1

8.1 与实验室事故相关的人为因素和态度

8.2 一级生物安全

8.3 二级生物安全

8.4 细胞培养

8.5 生物危害物的运输（实验室间或物体间）

8.6 基础生物安全操作

8.7 内务管理

8.8 菌（毒）种和生物样本管理

9．意外9-1

9.1 暴露事件的紧急处理

9.2 报告事件

9.3 医疗援助

9.4 实验室事件的调查

9.5 应急处臵

10．溢出反应10-1

10.1 一个生物溢出试剂盒的组成

10.2一级生物安全实验室溢出

10.3二级生物安全实验室溢出

11．消毒和灭菌处理过程11-1

11.1 实验室材料的清洁

11.2 消除局部环境的污染

11.3 清除生物安全柜的污染

11.4 洗手/清除手部污染

11.5 消毒和灭菌方法

11.6 高压灭菌器程序

11.7 化学去污剂的特征（特性）

11.8 废弃物处理

AA大学附属RYC医院检验科目录

12．运送12-1

12.1 传染性物质的包装和运送

13. 化学品、火和电的安全13-1

13.1 危害性化学品

13.2 暴露途径

13.3 化学品的储存

13.4 化学品的毒性作用

13.5 爆炸性化学品

13.6 化学品溢出

13.7 压缩气体和液化气

13.8 其他实验室危害

附录A 卫生部人间传染的病原微生物名录A-1附录B 生物安全实验室检查表B-1附录 C 生物安全等级C-1附录D 污染的来源D-1附录 E AA大学附属RYC医院医疗废物管理制度E-1

AA大学附属RYC医院生物安全管理体系

1.生物安全管理体系

1.1 紧急事件电话和办公室联系方式

救护车/火警/警察120/119/110

生物安全负责人AAAA

生物安全办公室AAA

1.2 生物安全管理机构

1.2.1 RYC医院生物安全管理机构

生物安全负责人：AA

生物安全委员会委员：主任顾AA 副主任：AA、AA

委员：AA、AA、A、AA、AA、AA、AA、AA、AA

实验室生物安全责任人：检验科：AA 生物安全管理员AA

中心实验室：AA 生物安全管理员AA

核医学科：AA 生物安全管理员AA

输血科：AA 生物安全管理员AA

生物安全办公室：设在医院医务科内

1.2.2 RYC医院检验科生物安全管理小组

生物安全管理机小组负责人：组长：

组员：AA、BBB、CC、DD、EE、FF、

检验科实验室生物安全日常事务管理责任人：AA

1.3 职责

1.3.1 生物安全负责人

AA大学附属RYC医院法定代表人为生物安全负责人。生物安全负责人的主要职责是：◆负责建立本单位生物安全管理体系，落实生物安全管理责任部门或责任人。

◆定期召开生物安全管理会议，对实验室生物安全相关的重大事项作出决定。

◆批准和发布实验室生物安全手册、生物危害评估等重要文件。

◆保持与生物安全办公室的联系。

1.3.2 实验室生物安全责任人

各专业实验室主任为实验室生物安全责任人，其主要职责是：

◆全面负责本实验室生物安全工作。

◆决定并授权进入本实验室的工作人员。

◆监督有关法规和标准操作规程的执行，纠正违规行为并有权作出停止实验的决定。

1-1

AA大学附属RYC医院生物安全评估和管理

◆任命实验室生物安全管理员具体落实实验室生物安全管理工作。

◆负责制定和实施实验室应急处臵预案。

◆负责实验室安全事故的现场处臵和调查，并将调查结果以及处理意见向生物安全办公室报告。

◆负责对涉及感染性物质的研究计划、方案以及操作程序等，实施前的生物安全审查。

1.3.3 实验室生物安全管理员

实验室生物安全管理员的主要职责是：

◆负责实验室生物安全保障以及技术规章方面的咨询工作。

◆就技术方法、程序和方案、生物因子、材料和设备进行定期的内部安全检查。

◆纠正违反生物安全操作规程的行为。

◆在出现潜在感染性物质溢出或其他事故时，协助事故调查。

◆检查和监督实验室废弃物的有效管理与安全处臵。

◆检查和监督实验室各项消毒灭菌措施的落实情况。

1.3.4 生物安全办公室

生物安全办公室设在AA大学附属RYC医院医务科内，其主要职责是：

◆负责组织制（修）订和实施实验室生物安全手册、生物安全规章制度、操作规范和标准操作规程。

◆负责组织对涉及的生物因子、使用动物、重组DNA 以及基因修饰物质的研究方案进行审查和风险评估。

◆负责对本单位实验室生物安全防护，微生物菌（毒）种和生物样本保存和使用，实验室安全操作，实验室废气、废水、废弃物处臵和消毒灭菌等规章制度实施情况进行监督、检查，并定期评估实施效果。

◆负责组织跟踪国际国内实验室生物安全管理最新动态。提供实验室操作的咨询以确保遵循国家相关的标准。

◆负责定期调查、了解实验室工作人员的健康状况和健康监护情况。决定必要的特殊医学监测。

◆组织生物安全知识培训并评估培训效果。

1-2

AA大学附属RYC医院生物安全评估和管理

2 生物安全评估和管理

在建设实验室或开展实验活动之前，生物安全办公室应参照卫生部《名录》组织各相关方面的专家对拟操作的生物因子的危害程度、实验活动的危险性、气溶胶传播的可能性、预防治疗的获得性、防护屏障的安全性、应急预案的有效性等因素进行评估，确定相应的生物安全防护水平等级。

实验室生物危害评估结果应由医院的法定代表人签字认可，并归档保存。

生物安全负责人最终对实验室内的安全负责，其职责之一是指导现行工作以判断潜在的危害（生物安全评估），职责之二是实验开始前采用合适的安全程序（风险管理）。

特定的实验开始前需要预先进行登记和通过生物安全负责人的批准。

风险评估和风险管理的5 个"P"是指：

◆Pathogen 病原体--危险的生物因子

◆Procedures 规程--推荐的实验操作和安全的操作规范

◆Personnel 人员--相应的培训与技能

◆Protective equipment 防护设备--防护衣和安全设备

◆Place 地点--实验室所在位臵

实验室工作的每一方面都应考虑风险评估和风险管理的5 个"P"。正确地指导和风险评估能帮助免受生物危害的暴露，以及最大程度减少实验室受到感染的可能性。

2-1

2-2

2.2 暴露途径

生物因子要导致疾病发生，首先必须有足够数量的因子进入或侵入人体，进入的途径有经口、呼吸道、黏膜及与动物的接触（叮、抓伤），当生物危害物进入人体，它产生疾病还需满足其它条件，它们必须在人体细胞、组织和/或器官内生长繁殖，克服人体的自然免疫机制和变异或适合人体的变化。

年龄、免疫状况、职业、物理或地理环境等因素会导致个体对疾病的不同易感性。在涉及生物危害时，确定其最低感染量是很困难的。同一病原体相同剂量在一个人身上可能无症状，而在另一人身上可能导致严重的症状甚至致命。有些微生物只要一个进入到人体就足以侵入并促使疾病的发生，结核杆菌就是一个例子。暴露途径的更多信息见下图。

在实验室内的任何时候始终执行以下工作制度：

◆不在实验室内吃、喝或吸烟

◆工作结束后或脱去手套后总是洗手

◆实验室内穿戴好个人防护设备，离开实验室前务必脱去个人防护设备

◆不用口吸、始终用手工吸液

◆使用锐器格外小心

◆用合适的设备抑制气溶胶的产生

◆对工作台面、溢出物和废弃物进行消毒

2.3 生物安全等级和检查制度

国家和卫生部对微生物和生物医学实验室确立了从事生物危害工作对应的生物安全等级。提供了微生物操作、实验室设备和安全设施的结合使用，以及所选的感染因子与使用推荐的四种生物安全等级的实验室操作。

以下是1-4 级生物安全所要求的实验室操作、防护设备、实验室设施和传染因子的概括。

2.3.1 所推荐的生物安全等级与相应感染因子

2-3

据国家标准GB 19489-2004《实验室生物安全通用要求》编制

2-4

2.3.2 生物安全评估

2-5

根据上述病原体检测的表格，仅仅允许在生物安全等级为1 和2 的实验室里工作。

2.3.3 生物安全检查

生物安全办公室应定期组织人员对实验室进行生物安全检查，每年至少一次（可以和内审一同进行）。检查的内容可参照附录B（一、二级生物安全实验室检查表）。

检查结果应与实验室人员和管理者一起讨论，并输入到管理者评审中。对于在检查过程中发现的所有不足之处，实验室应指定专人负责采取改正措施。

2-6

AA大学附属RYC医院标志

3．标志

3.1 墙面标志

3.1.1 实验室入口处的墙面上应有实验室名称。

3.1.2 实验室入口处的墙面上应有"上海市病原微生物实验室备案凭证"。

3.2 门上标志

3.2.1 实验室入口处门上必须有生物危害警告标志。标志包括国际生物危害符号、生物危害等级（如BSL-1 或2 或3），有特殊要求的专用实验室应标明特殊进入等要求。

3.2.2 BSL-2 实验室入口处门上必须有人员出入限制标志和相关信息，如实验室生物安全责任人的姓名、联系电话等。

3.3 标贴和颜色

3.3.1 在实验室内，生物危害符号应贴在医用垃圾容器、冰箱、冷冻箱、培养皿和含BSL-2 或BSL-3 传染因子的离心机、污水池、超声腐蚀器及生物安全柜等上。

3.3.2 当设备用于处理人血液标本、其它潜在感染物质或感染因子时，生物危害符号应临时贴在相关的设备上。

3.3.3 生物危害符号也应贴在其它用于储存、运送BSL-2 或BSL-3 传染因子、血液标本或"其它潜在感染物质"（注意：未怀疑包含传染因子或"其它潜在感染物质"的运送可以不贴生物危害符号，而贴诊断样品标志）的容器上。标贴应用带子、线、粘胶或其它方式尽可能贴近容器以防止松动或意外弄丢。

3.3.4 生物危害警告标志底色应该是桔红色带荧光，字母和符号用对比明显的颜色。

（可以购买）

3-1

AA大学附属RYC医院标志

如果有下列情况，生物危害警告标志可以免贴：

（1）废弃物是放在黄色有生物危害符号的袋内；

（2）在储存、转移、运送、处理过程中，单个盛血液或"其它潜在物质"的容器被放臵在贴有生物危害符号的第二个容器中。

（3）当实验室门上贴有生物危害警告标志时，其室内的仪器等物品可免贴。

3.4 外送维修或处理的设备

3.4.1 已污染或可能污染的设备外送维修或处理必须尽可能彻底消毒，在设备上贴上生物危害警示。

3.4.2 对一些不能进行彻底消毒的仪器设备，在外送之前，将这些仪器设备尽可能的消毒（冲洗或擦干净外部），并贴上生物危害警示。

3.4.3 生物危害警示还必须注明哪些部分仍存在污染，生物危害符号贴在污染区域附近。

生物危害警示

本设备的外部和内部表面已消毒，已无任何生物危害。

本设备将作为（在□内打勾）

服务/维修□重新安臵□报废□

消毒操作人员_______________________________________

所使用的消毒剂_______________________________________

消毒日期_______________________________________

设备放臵地点_______________________________________

实验室联系电话_______________________________________

设备的以下区域_______________________________________ 仍存在污染

生物危害警示的推荐样式

AA大学附属RYC医院

3-2

AA大学附属RYC医院生物安全要求和人员管理

4.生物安全要求和人员管理

4.1 生物物质的使用登记

各实验室生物安全责任人要完成和递交"生物物质的使用登记表"。生物安全办公室必须保存有关人员使用生物物质的准确的信息（例如：微生物、细胞系、人源物质、动物和毒物），并要求实验室生物安全责任人每年递交准确信息，以及一年里有关生物物质的增加或删除、房间位臵的增加或删除等变化。

4.1.1 人类病毒

在开始研究人类致病因子前需要在生物安全办公室登记。生物安全办公室必须在实验开始前批准全部包括有传染性因子或潜在生物危害的生物物质导入动物。

实验室工作人员必须在新的实验开始前接受生物安全培训。生物安全培训由生物安全办公室组织安排。生物安全负责人的职责是确保实验室全体人员得到适当操作和技术的培训。

生物安全负责人和/或实验室生物安全责任人在用风险组2（生物安全水平2）因子工作前必须到生物安全办公室登记。风险组2 和较高致病因子名单见附录A。

生物安全办公室将定期监控设备和操作，同时回答任何关于安全的问题。

在下列情况发生之前必须联系生物安全办公室：

◆开始用新的可感染因子工作

◆改变现有工作的范围或位臵

◆将可感染因子提供给医院实验室内外其他工作人员

◆在实验室安排非本实验室的工作人员工作

4.1.2 人类血液、体液、组织和其他潜在有传染性的物质

血液耐受致病标准适用于"职业暴露"于人类血液或其他潜在有传染性物质下的工作人员。其他潜在有传染物质包括：

◆人类细胞或组织培养

◆来自于人类（活的或死的）任何不固定的组织或器官，除了完整无缺的皮肤。

◆人类体液，包括尿液、粪、唾液或眼泪等。

◆HIV－或HBV－包括培养液或其他溶液。

◆血液，器官或其他来自于感染了HIV 或HBV 或其他血液耐受致病原的实验动物组织。

如果实验室工作人员没有直接接触血液或其他潜在有传染物质，但使用那些用于处理或贮存血液，其他潜在有传染物质或血液耐受致病原的仪器，那么此人也被认为是职业暴露。

员工暴露于由人类血液、组织和体液，可引起一个重要的健康风险，它们含有血液耐受致病原诸如：

?人类免疫缺陷病毒（HIV）?巴贝西虫?科罗拉多壁虱热

4-1

AA大学附属RYC医院生物安全要求和人员管理

?乙型肝炎（HBV）?疏螺旋体菌?虫媒病毒

?丁型肝炎（HDV）?布氏杆菌?减少螺菌

?丙型肝炎（HCV）?钩端螺旋体? Creutzfeldt-Jakob

virus ?疟原虫?弗朗西斯菌? Human

T-Lymphotro-

pic virus TypeI I型人

类T-淋巴促激素病毒?密螺旋体? Streptobacillus ? Hemorrhagic Fever

moniliformis念珠链杆菌viruses出血热病毒4.1.3 动物

全部的研究实验包括动物管理必须由生物安全负责人批准。一经批准，必须在实验开始前与生物安全办公室联系确保制定安全协议。实验人员必须与生物安全办公室及有关安全人员沟通描述标准操作规程概要。

4.2 生物安全柜

空气清洁设备能确保医院员工的健康和安全，同时可保护实验和预防临床传染性物质释放到环境中。

生物安全柜的功效依赖于操作者的行为，如在设备中物品的定位和实验室人员的移动。

本医院的全部生物安全柜必须具有医院证明/服务合同以及至少每年鉴定。

生物安全办公室联系确定需每年鉴定的日期。

当转让给新买主、报废、从医院搬走或从其他单位或制造商获得生物安全柜时，须预先通知生物安全办公室。如设备有服务或维修需要（例如，更换荧光灯、开关等）应联系生物安全办公室。在生物安全柜被重新贮存、维修（内部）或报废前，必须由有证的技师用甲醛等专业排污。

购买生物安全柜应与生物安全办公室协调。生物安全办公室评价全部生物安全柜的购买要求。医院不购买和使用超净工作台，因为超净工作台的空气吹向工作表面而进入操作者的面部和（皮肤）破损处。超净工作台不能提供保护人员或环境防止可传染性或潜在可传染性因子、过敏原、化学品或物质。

4.3 人员管理

实验室应建立工作人员上岗考核制度，所有与实验活动相关的人员都应经过培训并取得上岗资质。培训对象应包括实验室管理人员、实验室技术人员、样本运输人员、废弃物处臵人员、仪器设备维修人员及保洁工等。实验室相关人员应每年接受生物安全培训。培训组织机构应采取有效方法对培训的效果进行评估。医院应建立人员培训档案。

人为的失误和不规范的操作会极大地影响所采取的安全措施对实验室人员的防护效

4-2

AA大学附属RYC医院生物安全要求和人员管理

果。因此，熟悉如何识别与控制实验室危害的有安全意识的工作人员是预防实验室感染、差错和事故的关键。基于这一原因，不断地进行安全措施方面的在职培训是非常必要的。一个有效的安全规程首先始于实验室管理者，管理者应确保安全的实验室操作及程序融合到工作人员的基本培训中。安全措施方面的培训是新工作人员岗前培训的有机组成部分，应向工作人员介绍生物安全操作规范和实验室操作规程，包括安全手册或实验的操作手册。应采用诸如签名传阅的方法，来确保工作人员阅读并理解这些规程。各实验室生物安全责任人在对属下工作人员进行规范性实验室操作技术培训时起着关键作用，生物安全委员会可以帮助进行人员培训并研制教具和教案。

4.3.1 培训规划

不断进行岗位安全教育对于维持实验室工作人员和后勤保障人员的安全意识是很重要的。下列各项是保证生物安全培训规划行之有效的必备要素：

4.3.1.1 需求评估。这一过程包括确定相关的任务、重要性等级（以发生频率、危害程度以及复杂性来表示）以及完成这些任务的必要步骤等细节。

4.3.1.2 确立培训目的。最令人满意的情况是，期望受培训者在进行培训之后，能在工作中加以应用。培训的目的是要了解开展实验的条件以及所需的熟练水平。

4.3.1.3 规定培训的内容和方法。培训内容是受培训者为了实现实验操作目标所必须掌握的知识或技术。通常由那些对工作和相关要求最为了解的人员来确定生物安全培训规划的内容。其他的内容可能集中在练习如何解决工作中发生的问题，以及学习纠正人们在使用某一技术过程中所犯的错误。

人员培训的内容应包括实验室生物安全的基本知识、基本技能、消防和应急处臵预案、化学、生物危险和传染预防、应急救护等课程。还应包括：

A. 吸入危险（气溶胶产物），如何使用接种环、划线接种琼脂平板、移液、制作涂片、打开培养物、采血/血清标本、离心等。

B. 食入危险，如处理标本、涂片以及培养物。

C. 在使用注射器和针头时刺伤皮肤的危险。

D. 处理血液以及其它有潜在病理学危险的材料。

E. 感染性材料的清除污染和处理。

4.3.1.4 考虑不同培训对象的差异。有效的培训一定要考虑培训对象的特点。不同人员在资质、读写、文化、口语以及培训前所掌握的技术水平等方面都可能不一致。关于培训规划能否提高受培训者的操作技能和个人安全水平，这可能取决于培训所采用的方法。对某些人应采用更直观的或"手把手"的方式更好；而其他人则以学习文字材料更有效果。工作人员如有特别要求时也应提出，例如对听力缺陷人员的课程调整。

4.3.1.5 针对不同的学习要求。教学内容（例如培训课程、录像、文字材料等）不应该同所教授的技术或主题相冲突、相抵制或没有关联。例如，如果培训的目的是要提高解决问题的

4-3

AA大学附属RYC医院生物安全要求和人员管理

能力，那么在教育中就应该强调思维／推理而并非死记硬背，应该要求培养创造性的行为和／或相应的反馈（肯定／正确／可靠）能力。此外，提供与实际工作条件相似的实践机会有助于将技能应用到实际工作中。

4.3.1.6 培训评估。培训评估有助于判断培训是否达到了预定效果。培训评估通常包括下列四种方式：

。检查培训对象对所进行培训的反应

。考核培训对象对所培训内容的记忆和/或操作执行情况

。评估培训对象在工作中的行为变化

。按培训机构的目的或目标来考查是否已有明确的效果。

对培训效果最完整的评估应包括全部上述四个方面。仅考虑培训对象对所进行培训的反应是一种最不有效的评估方法，因为这种反应与培训对象对培训内容的实际掌握程度之间可能没有关系，它也不应作为评估培训效果的唯一指标。

4.3.1.7 培训调整。由于衡量结果的标准多种多样，因此对培训效果的评估很难表明培训规划究竟是完全成功还是彻底失败。通常的结果为，培训对象与其他人相比，对课程内容的某些部分会有更好的理解、掌握和应用。培训所造成的知识或能力上的不同或差异，可能提示是否需要更长的培训时间、采用其他的培训方法或聘请更有能力的教师。

4-4

AA大学附属RYC医院医学监督程序

5.医学监督程序。

医学监督程序由生物安全办公室负责管理。程序的目的是对实验室工作人员进行定期的健康评估，特别应注意与实验室工作人员健康有关的生物因子处理的因素或条件。对特殊的实验室工作人员医学监督程序可以做一些预防测定，包括免疫、定期身体检查和采集血清样本。实验室应定期对实验人员开展与其从事实验活动相关的健康体检，建立人员健康档案。实验室工作人员应在身体状况良好的情况下进入实验区工作，若出现疾病、过劳状态或其他意外状况，则不应进入实验区或立即退出实验区。

医学监督程序的目的是：

◆推荐下列的合适的医学预防（措施）

◆做实验室工作人员的定期评价以确定与工作相关的医学环境的影响是否普遍存在，如果是的话，采用明确的监测以降低这些影响。

对一个特定的实验室工作人员医学监督的范围取决于：

▲研究课题本身存在的潜在危险因素

▲那些直接或潜在暴露生物因子的实验室工作人员与现在或以前健康状况有关的某些附加因素。

医学监督程序将可提供实验室工作人员可能导致的潜在暴露。

5.1 暴露于结核杆菌实验室工作人员的筛选

面对职业暴露于结核杆菌的实验室工作人员在医院的生物安全办公室登记。

职业安全和健康管理从下列范围鉴定潜在暴露：

◆可能处理肺结核菌的实验室

可能有感染结核风险的新进实验室工作人员在聘用时必须用肺结核皮肤试验（PPD）测试TB 暴露因素以建立其基础值。所有可能有暴露风险的实验室工作人员每年必须做PPD 试验以建立基础值。暴露于活性TB 环境中的实验室工作人员必须报告在暴露初期的TB 试验基础值和暴露3 个月后的暴露事件和PPD 测试结果。

5.2 免疫

在一些事件中定期收集上述血清样本测定疫苗引起的抗体。

5.3 医学限制

5.3.1 怀孕

一般认为在怀孕期间暴露某些传染因子的母亲被因子感染后可能会影响胎儿。怀孕的或将怀孕的妇女要告知生物安全办公室。实验室工作人员要与生物安全委员会及生物安全办

5-1

AA大学附属RYC医院医学监督程序

公室讨论关于实验操作与怀孕的风险问题。

怀孕妇女可向生物安全办公室询问任何涉及到有关她们工作环境生物危害的问题，同时办公室又是怀孕实验室工作人员和她们各自的部门负责人之间的联络员。

5.3.2 生殖生物学危害

生殖生物学危害包括但并不仅仅限于下列：

◆巨细胞病毒（CMV）