荧光原位杂交联合核基质蛋白22检测在诊断膀胱癌中应用

荧光原位杂交联合核基质蛋白22检测在诊断膀胱癌中应用_百度学术庞程 , 邱敏捷 , 吴炳权 - 《解放军医药杂志》 - 2016

四论著四

荧光原位杂交联合核基质蛋白22检测在诊断膀胱癌中应用庞一程,邱敏捷,吴炳权,杨志坚,刘肇华,陈敏坚,徐一乐

[基金项目]一肇庆市科技局项目(2015040307-9)

[作者单位]一526040广东肇庆,肇庆市第一人民医院泌尿

外科(庞程二吴炳权二杨志坚二刘肇华二陈敏坚);511400广州,

广州市番禺区何贤纪念医院泌尿外科(邱敏捷二徐乐)一一[摘要]一目的一探讨荧光原位杂交(FISH)联合核基质蛋白22(NMP22)检测在诊断膀胱癌中应用价值三方法一选取2014年1月 2016年1月因血尿就诊的100例患者作为研究对象,均行FISH二NMP22二尿脱落细胞学检查,以临床病理检查作为 金标准 ,分析各种检查方式诊断膀胱癌的结果三结果一FISH二NMP22和FISH 联合NMP22诊断敏感性高于尿脱落细胞学检查(P <0．05);FISH 联合NMP22和尿脱落细胞学检查的特异性高于NMP22检查(P <0．05);FISH二NMP22二FISH 联合NMP22诊断膀胱癌恶性程度G1二G2二G3级的敏感性均高于尿脱落细胞学检查(P <0．05)三结论一FISH 联合NMP22诊断能提高膀胱癌的敏感性和特异性,利于临床早期诊断膀胱癌三一一[关键词]一膀胱肿瘤;血尿;原位杂交,荧光;核基质蛋白22;诊断

[中国图书资料分类号]一R737.14一一[文献标志码]一A一一[文章编号]一2095-140X(2016)12-0062-03

[DOI ]一10.3969/j.issn.2095-140X.2016.12.016Fluorescence in Situ Hybridization Combined with Nuclear matrix Protein 22Detection in Application of Diagno-sis for Bladder Cancer PANG Cheng 1,QIU Min-jie 2,WU Bing-quan 1,YANG Zhi-jian 1,LIU Zhao-hua 1,CHEN Min-jian 1,XU Le 2(1.De-partment of Urology,the First People Hospital of Zhaoqing,Zhaoqing,Guangdong 526040,China;2.Department of U-rology,Hexian Memorial Hospital of Panyu District in Guangzhou City,Guangzhou 511400,China)[Abstract ]一Objective 一To investigate application value of fluorescence in situ hybridization (FISH)combined with nuclear matrix protein 22(NMP22)detection in diagnosis of bladder cancer.Methods 一A total of 100patients with hematuria between January 2014and January 2016were recruited in this study.FISH,NMP22and urine exfoliative cy-tology examinations were performed for all patients.Results of single three different methods in diagnosis of bladder canc-er were analyzed on the basis of clinical pathological examination as the golden standard.Results 一Values of diagnostic sensitivity of FISH,NMP22and FISH combined with NMP22were higher than that by urine exfoliative cytology examina-tion (P <0．05).Values of diagnostic specificity of FISH combined with NMP22and urine exfoliative cytology were high-er than that by NMP22(P <0．05).The sensitivities of FISH,NMP22and FISH combined with NMP22in diagnosis of malignant degree of G1,G2and G3grade bladder cancer were higher than those by urine exfoliative cytology (P <0．05).Conclusion 一FISH combined with NMP22can improve sensitivity and specificity in diagnosis of bladder cancer,which is helpful for early diagnosis of bladder cancer.[Key words ]一Urinary bladder neoplasms;Hematuria;In situ hybridization,fluorescence;Nuclear matrix protein 22;Diagnosis 一一膀胱癌是常见泌尿系统恶性肿瘤,多发于尿路上皮组织,90%以上为移行上皮细胞癌[1]三70%~80%膀胱癌存在无痛性血尿,部分为间歇性,临床症状无

特异性,早期诊断难度大三以往临床采用尿脱落细胞

学诊断,但敏感性较低三核基质蛋白22(NMP22)属

于膀胱癌标志物,正常人NMP22水平低,而膀胱癌尿

液中NMP22呈高表达三胡海洋等[2]指出,NMP22可

用于早期诊断膀胱癌三荧光原位杂交(FISH)属于非

放射性杂交技术,具有快速二无创二安全二高灵敏度二高特异度的特点,逐渐用于膀胱癌的诊断三麦海星等[3]发现,FISH 在初步诊断膀胱癌及预测疾病复发中具有较高的应用价值三然而,临床关于FISH 联合NMP22诊断膀胱癌的报道还相对较少三故本文分析了FISH二NMP22二尿脱落细胞学以及FISH 联合NMP22在膀胱癌诊断中的应用情况,探讨FISH 联合NMP22诊断膀胱癌的价值,现报道如下三1一资料与方法1．1一临床资料一选取2014年1月 2016年1月因肉眼血尿就诊于肇庆市第一人民医院和广州市番禺

区何贤纪念医院的100例患者,其中男76例,女24四26四解放军医药杂志2016年12月第28卷第12期Med &Pharm J Chin PLA,Vol.28,No.12,Dec.2016

万方数据

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例,年龄22~85(62.16?3．85)岁三排除标准:入组前已确诊为膀胱癌;合并输尿管癌二肾癌等其他泌尿系肿瘤;FISH二NMP22二尿脱落细胞学或临床病理检查资料缺乏三

1．2一方法

1．2．1一尿液留取:均留取患者晨尿200ml,1h内送检,保持尿液新鲜三留取尿液标本时避免粪便二白带二月经血等混入标本中,以免影响标本质量三1．2．2一FISH检测:取晨尿100ml,按照原位杂交试剂盒说明书操作,进行标本处理二预处理二变形和杂交三采用3二7二17号染色体着丝探针(CEP)和9p21区带探针进行检测三3号CEP为红色荧光信号,7号CEP为绿色荧光信号,17号CEP为蓝色荧光信号,9p21区带探针为黄色荧光信号三荧光显微镜下观察,通过M-FISH点计数分析2.0软件控制的冷电荷耦合设备相机摄取图像进行分析三分析20例志愿者泌尿系结果或正常人的FISH的结果并建立阈值,根据正常阈值建立异常结果的判断标准:对100个不重叠的细胞核进行计数,细胞核内出现3二7二17号染色体非整倍体的信号,9p21染色体缺失的细胞百分比大于正常阈值判定为异常结果;当出现至少2种探针信号异常时,可诊断为膀胱癌三1．2．3一NMP22检测:取晨尿50ml进行NMP22检测,向NMP22测试板进样区滴注4滴尿液,等待30min后读取结果三参照Soloway等[4]提出的标准,以NMP22含量>5U/ml为阳性三

1．2．4一尿脱落细胞学检测:取50ml新鲜尿液, 1850r/min离心8min,留尿沉渣,沉渣涂片2张,常规固定二浸洗二HE染色二脱水二透明二封片,镜下观察癌细胞三核大二深染二形态改变等判定为阳性结果三1．2．5一FISH结合NMP22检测:以FISH二NMP22结果均为阳性判定为阳性,否则为阴性三

1．3一观察指标一比较FISH二NMP22二尿脱落细胞学以及FISH联合NMP22检查膀胱癌的敏感性二特异性;分析4种检测方式诊断膀胱癌恶性程度分级结果三膀胱癌恶性程度分级标准是:①G1级:低度恶性倾向尿路上皮乳头状瘤;②G2级:乳头状尿路上皮癌,低分级;③G3级:乳头状尿路上皮癌,高分级三1．4一统计学方法一采用SPSS19.0统计学软件处理数据三计数资料以率(%)表示,多组间比较采用秩和检验,两两组间对比采用Fisher确切概率法或χ2检验三以α=0.05为检验水准三

2一结果

2．1一不同方式检测膀胱癌结果比较一以临床病理检查结果作为 金标准 ,71例诊断为膀胱癌,23例诊断泌尿系统良性病变,6例正常;FISH诊断结果中15例漏诊,6例误诊;NMP22诊断结果中14例漏诊,8例误诊,尿脱落细胞学诊断结果中43例漏诊,

1例误诊;FISH联合NMP22诊断结果中22例漏诊, 2例误诊三4种检测方式及病理检查结果见表1三表1一不同方式检测膀胱癌结果比较(例)检查方式结果

病理检查

阳性(n=71)

病理检查

阴性(n=29)

合计尿脱落细胞学阳性28129

阴性432871 FISH阳性56662

阴性152338 NMP22阳性57865

阴性142135 FISH联合阳性55156 NMP22阴性162844一注:NMP22为核基质蛋白22,FISH为荧光原位杂交

2．2一不同方式检测膀胱癌的敏感性和特异性比较一尿脱落细胞学检测的敏感性和特异性分别为39．44%和96.55%,FISH检测分别为78.87%和79.31%,NMP22检测分别为80.28%和72.41%, FISH联合NMP22检测分别为77.46%和96.55%三FISH二NMP22和FISH联合NMP22检测敏感性高于尿脱落细胞学检查(P<0．05),但3者间比较差异无统计学意义(P>0．05)三FISH联合NMP22及尿脱落细胞学检测的特异性高于NMP22检查(P< 0．05);其余各组间特异性比较差异无统计学意义(P>0．05)三

2．3一不同方式诊断膀胱恶性程度的敏感性分析一FISH二NMP22和FISH联合NMP22诊断膀胱癌恶性程度G1二G2二G3级的敏感性均高于尿脱落细胞学检查(P<0．05),但3组组间比较差异无统计学意义(P>0．05)三见表2三

表2一不同方式诊断膀胱恶性程度的敏感性分析[例(%)]检查方式

G1级

(n=24)

G2级

(n=31)

G3级

(n=16)

尿脱落细胞学5(20.83)13(41.94)10(62.50) FISH15(62.50)a26(83.87)a15(93.75)a NMP2215(62.50)a28(90.32)a14(87.50)a FISH联合NMP2214(58.33)a26(83.87)a15(93.75)a 一注:NMP22为核基质蛋白22,FISH为荧光原位杂交;与尿脱落细胞学检查比较,a P<0．05

3一讨论

一一膀胱癌是临床较为常见的恶性肿瘤,具有发病

四36四

解放军医药杂志2016年12月第28卷第12期Med&Pharm J Chin PLA,Vol.28,No.12,Dec.2016万方数据

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率高二复发率高的特点,严重威胁着人们的身心健康三以往临床常采用膀胱镜检加组织活检二尿脱落细胞学检查诊断膀胱癌,其中膀胱镜检加组织活检的准确性较高,但对微小扁平肿瘤诊断存在局限性;此外,该诊断方式为有创检查,检查后出现逆行感染的风险较高三尿脱落细胞诊断膀胱癌的特异性较高,且在高病理分级肿瘤诊断也存在独特优势,但诊断膀胱癌的敏感性较低三本研究中,尿脱落细胞诊断膀胱癌的敏感性和特异性与刘跃新等[5]研究结果基本一致三

NMP是细胞核内的一种网状结构蛋白,在DNA 复制二RNA合成等中起重要作用三有文献指出,膀胱癌患者尿液中NMP22呈异常高表达[6]三还有研究报道,膀胱癌患者尿液中NMP22水平是正常人的20~80倍[7]三NMP22表达与癌细胞脱落和凋亡密切相关,不受吸烟二年龄二心血管疾病等因素影响,特异性相对较高,但受部分泌尿系统良性病变,如泌尿系统感染二尿路结石等的影响,可能出现假阳性结果三本研究中,NMP22诊断膀胱癌的敏感性二特异性与彭晓晖等[8]报道的大致相同三本组研究中, NMP22诊断膀胱癌恶性程度G1二G2二G3级的敏感性,与Ponsky等[9]报道的G1二G2二G3级的敏感性60%二86%二96%有差异,可能与研究对象少有关三FISH利用碱基互补配对原理在细胞核中或染色体中显示DNA的序列位置的方法,对DNA进行定量二定性诊断,了解染色体异常情况三膀胱癌是最容易发生染色体的结构及数目异常,3二7二17号CEP 及定位P16抑癌基因的9p21位点特异探针常用于诊断膀胱癌三虽然国外批准FISH用于膀胱癌诊断,但国内应用时间较短,各家诊断膀胱癌的敏感性二特异性差异较大三本研究中,FISH诊断敏感性二特异性分别为78.87%二79.31%三陈瑞廷等[10]采用FISH诊断膀胱癌的敏感性为82.7%,特异性为92．0%三曹会彦等[11]研究中,FISH诊断膀胱癌的敏感性为97.6%,特异性为92.9%三分析FISH在恶性程度中的应用情况,发现随着恶性程度的增高诊断敏感性也随时升高三

目前,临床关于FISH联合NMP22诊断膀胱癌尚未形成统一结论,联合诊断是否能够提高膀胱癌诊断敏感性二特异性还有待分析三冉俊武等[12]研究发现,FISH联合NMP22检查膀胱癌的特异性较FISH二NMP22单独检查上升,与尿脱落细胞学检查结果一致,本组研究结果与其相同三

综上所述,FISH联合NMP22诊断膀胱癌的特异性较NMP22单独检查提高,可为临床诊治膀胱癌提供丰富信息三然而,本研究还存在局限性:①本组研究病例数较少,有待扩大研究范围,进行大范围二多中心前瞻性研究;②膀胱癌的复发率较高,FISH 联合NMP22在预测膀胱癌复发中的价值还有待进一步分析;③FISH检测的价格相对较高,联合

NMP22可能进一步加重患者的经济负担,还应探讨更加经济二准确的检测方法三

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(收稿时间:2016-07-04一修回时间:2016-09-09)

四46四解放军医药杂志2016年12月第28卷第12期Med&Pharm J Chin PLA,Vol.28,No.12,Dec.2016万方数据

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