《天然药物化学实验讲义》

《天然药物化学实验讲义》

实验须知

实验一 薄层板的制备、活度测定及应用 实验二 粉防已生物碱的提取、分离与鉴定

实验三 掌握掌叶防已碱的提取及硫酸延胡索乙素的制备 实验四 虎杖中游离羟基蒽醌成分的提取和分离 实验五 芦丁的提取、分离与鉴定

实验六 秦皮中七叶苷、七叶内酯的提取、分离和鉴定 实验七 薯蓣皂苷元的提取和鉴别 实验八 中草药成分鉴别法

附录一 常用试剂及配制方法

附录二 常用有机溶媒的性质及回收方法

实验须知

天然药物化学实验教学是天然药物化学课程的重要组成部分，是使学生进一步理论联系实际，掌握天然药物有效成分提取、分离和检定的基本操作技能，提高学生分析和解决问题能力。养成严密科学态度和良好工作作风必不可少的教学环节。为此，提出下列实验须知：

1．遵守实验室制度，维护实验室安全，不违章操作，严防爆炸、着火、中毒、触电、漏水等事故的发生。若发生事故应立即报告指导教师。

2．实验前作好预习，明确实验内容，了解实验的基本原理和方法，安排好当天计划，争取准时结束。实验过程应养成及时记录的习惯。凡是观察到的现象和结果及有关的重量、体积、温度或其他数据，应立即如实记录，实验完毕后，认真总结，写好报告，提取纯化所得单体产物包好，贴上标签（日期、样品名称、纯度、mp、bp、TLC、重量）交给老师。

3．实验室中保持安静，不许大声喧嚷，不许抽烟、不迟到、不随便离开，实验台面应保持清洁，使用过的仪器及时清洗干净，存放在实验柜内，废弃的固体和滤纸等丢入废物缸内，绝不能丢入水槽、下水道和窗外，以免堵塞和影响环境卫生。

4．公用仪器及药品用完后立即返还原处，破损仪器应填写破损报告单，注明原因。节约用水、用电、药用试剂。严格药品用量。

5．保持实验室内整洁，学生采取轮流值日，每次实验完毕，负责整理公用仪器，将实验台、地面打扫干净，倒清废物缸，检查水、电和门窗是否关闭。

实验一 薄层板的制备、活度测定及应用

一、目的要求

1．掌握薄层板的制备及薄层层析的操作方法 2．掌握吸附剂活度测定的原理及方法 3．应用薄层层析法检测识中草药化学成分 二、薄层板的制备

1．不加粘合剂的薄层涂布法 （1）氧化铝薄层

将吸附剂置于薄层涂布器中，调节涂布器的高度，向前推动，即得均匀薄层。本实验主要用下述简易操作涂布薄层，取表面光滑，直径统一的玻璃一支，依据所制备薄层的宽度、厚度要求，在玻璃棒两端套上厚度为0.3~1mm的塑料圈或金属环，并在玻璃棒一端一定距离处套上较厚的塑料圈或金属环，以使玻璃棒向前推动时能保持平行方向，操作时，将氧化铝粉均均地铺在玻璃板上，匀速向前推动。

（2）纤维素薄层

一般取纤维素粉1份加水约5份，在烧杯中混合均匀后，倒在玻璃板上，轻轻振动，使涂布均匀，水平放置，待水分蒸发至近干，于100±2℃干燥30~60分钟即得。

（3）聚酰胺薄层

取锦纶丝（无色干净废丝即可）用乙醇加热浸泡2~3次，除去腊质等。称取洗净的锦纶丝1克，加85%甲酸ml，在水浴上加热使溶，再加70%乙醇6ml。继续加热使完全溶解成透明胶状溶液。将此溶液适量倒在水平放置的，用清洁液洗净的玻璃片上，并自然向周围推匀，厚度约0.3mm，薄层太厚时，干后会裂开。将铺好的薄层水平放在盛温水的盘上，使盘中的水蒸汽能熏湿薄层，盘子加玻璃板盖严密，薄板放置约1小时完全固化变不透明白色，再放数小时后，泡在流水中洗去甲酸，先在空气中晾干，后在烘箱中0℃恒温加热活化15分钟，冷后置干燥器中贮存备用。

2．加粘合剂薄层的涂布法

（1）硅胶G薄层 取硅胶G或硅胶GF一份，置烧杯中加水约5份混合均匀，放置片刻，随即用药匙取一定量，分别倒在一定大小的玻璃片上（或倒入涂布器中，推动涂布），均匀涂布成0.25~0.5mm厚度，轻轻振动玻璃板，使薄层面平整均匀，在水平位置放置，待薄层发白近干，于烘箱中100℃活化0.5~1小时，冷后贮于干燥器内备用。活化温度和时间可依需要调整，一般检识水溶性成分或一些极性大的成分时，所用薄层板只在空气中自然干燥，不经活化即可贮存备用。

（2）硅胶（H）羧甲基纤维钠（CMC-Na）薄层 取羧甲基纤维素0.2g，溶于25ml水中，在水浴上加热搅拌使完全溶解，倒入烧杯中，加薄层层析用硅胶（颗粒度10~40μm的约6~8g）。激光照排系统混成均匀的稀糊，按照硅胶G薄层涂布法制备薄层，或取0.8%羧甲基纤维纳10ml，倒入广口瓶（高约10~12cm）中，然后逐步加入薄层层析用硅胶3.3克，不断振摇成均匀的稀糊，把两块载玻片面对面结合在一起，这样每片只有一面与硅胶糊接触，使薄片浸入硅胶稀糊中，然后慢慢取出，分开二块薄片，将未粘附硅胶糊的那一面水平放在一张清洁的纸上，让其自然阴干，100℃下烘30分钟。冷后于干燥器内备用。未消耗的硅胶稀糊可贮存在广口瓶内，以供再用。

氧化铝薄层，氧化铝羧甲基纤维钠薄层的制备方法同上，一般所需要氧化铝比硅胶稍多。

目前国内外市场有预先制好的薄层板，底板用玻璃、塑料、铝片等。可按需要用玻璃

刀划割，也有用剪刀剪成所要的大小，使用方便，价格贵些。

3．特殊薄层的制备

根据分离工作的特殊需要，可制成以下几种特制薄层。 （1）酸、碱薄层和pH缓冲薄层

为了改变吸附剂的酸碱性，以改进分离效果，可在吸附剂中加入稀酸溶液（如0.1~0.5N草酸溶液）代替水制成酸性氧化铅薄层使用，硅胶微呈酸性，可在铺层时用稀碱溶液（如0.1~0.5N氢氧化钠溶液）代替水制成碱性的硅胶薄层。当用醋酸钠、磷酸盐等不同pH的缓冲液代替水铺层，制成一定pH缓冲的薄层。

羧甲基纤维素钠的溶液一般用0.5~1%浓度，宜预先配制后静置，取其上层澄清溶液应用，则所制备的薄层表面较为细腻平滑。常用0.8%浓度。CMC-Na系中粘度。300~500厘泊（粘度单位）。CMC-Na系碳水化合物，调制时应在水浴上进行。活化温度不应过高，防止碳化。

（2）络合薄层

硝酸银薄层的制法，可在吸附剂中加入5~25%硝酸银水溶液代替水制成均匀糊状，再按常法铺成薄层，制成薄层避光阴干，于105℃活化半小时后避光贮存，制成的薄层以不变成灰色为好，在三天内应用。也可先把硝酸银用少量水溶解，再用甲醇稀释成10%溶液，把预先制好的硅胶G薄层浸入此溶液中约1分钟，取出避光阴干，按上法活化，贮存。

三、吸附剂的活度测定 1．氧化铝活度的测定

一般可用4~5种偶氮染料以薄层层析法进行测定。

染料试剂的配制：取偶氮苯（Azobenzene）50mg，对甲氧基偶氮苯（P-Methoxyuzobenzene）,苏丹黄（Sudan I, Benzeneazo-β-naphthol），苏丹红（Sudan Ⅲ Tetrazobenzol-β-naphthol），对氨基偶氮苯（P-Aminoazobenzene）各20mg，分别溶于50ml重蒸馏的四氯化碳（经氢氧化钠干燥）中。

常法制备不含粘合剂氧化铝薄层，以铅笔尖或毛细管尖在薄层板一端2~3 cm处间隔1cm左右轻轻点上5个可以看清的小点，各吸取约0.02ml染料试剂分别点滴于原点上，以

四氯化碳为展开剂，展开时薄层板与容器底部交角为10~40°之间，展开后测出各斑点的Rf值，从表1确定氧化铝的活度（一般高活性氧化铝Ⅰ~Ⅲ级活度使用本法时，结果往往偏低）。

另取不含粘合剂氧化铝薄层板一块，置于水蒸汽饱和容器内，2~3小时后取出，按上述方法测定活度。观察有无变化。

表1 氧化铝活度与偶氮染料外值关系

氧化铝活度级Rf值

偶氮染料

二级

偶氮苯 对甲氧基偶氮

0.16

苯 苏丹黄 苏丹红 对氨基偶氮苯

2．硅胶活度的测定

一般选用三种染料的薄层层析法进行测定。

欧洲药典1969年记载用0.01%二甲基黄（Dimethy-yellow. P-Dimethylaminoazobenzene）。苏丹红（Sudan Ⅲ），靛酚蓝（Indophenol blue 4-Tapnthoquinone-4-dimethyl aminoaniline）的苯溶液各10μl点滴于硅胶G或硅胶H薄层上，以苯为展开剂，展开10cm（约20分钟），三种染料应明显分离，靛酚蓝斑点接近于起始线。二甲基黄斑点在薄层的当中。苏丹红斑点与二甲基黄斑点之间，则认为薄层板活性符合要求。

国内青岛海洋化工厂出售薄层层析用的硅胶在吸附剂名称之后加几个字标明的意思是：硅胶G（G是Gypsum石膏的缩写。表示加了石膏），硅胶H（H表示不加石膏），硅胶GF254（F254表示加石膏和波长254显绿色荧光的硅酸锌锰）。硅胶GF365（表示加石膏和波长365nm显黄色荧光的硫化锌镉）。氧化铝则类推。

三级 0.72

四级 0.85

五级 0.95

0.59

0.45 0.69 0.89

0.02 0.00 0.00

0.25 0.10 0.05

0.87 0.35 0.08

0.98 0.50 0.19

中药延胡索（元胡，Corydalis yanhusuo W.T. Wang的块根）中含延胡索乙素的量很少，而其脱氢化合物巴马汀在某些植物中含量却很高。在中国华南一带的防已科植物黄藤（Fibreursa recisa paerre）的根茎中含巴马汀，再经氢化反应，制备延胡索乙素。

黄藤曾列入《本草纲目》，李时珍谓“藤生生岭南，状若防已，但人常服此藤，纵饮食有毒，亦自然不发”。现代民间作为清热消炎药。常用于外伤感染、扁桃体炎、咽喉炎、结膜炎、热痢及黄疸等。

一、实验的目的要求：

1．掌握季铵生物碱的一种提取方法。

2．掌握生物碱的一般理化性质及其结构与性质的关系。 3．了解黄藤生物碱的结构与性质的关系。 4．熟悉生物碱沉淀反应的条件和方法。 5．掌握制备生物碱结晶性盐的方法和精制。 6．掌握四氢巴马汀的制备方法。 二、黄藤中已知成分的理化性质：

黄藤根茎及根中所含成分主为巴马汀。尚含少量药根碱、黄藤素甲、黄藤素乙、内脂及甾醇。又谓在根茎、根及树皮中含小檗碱。

1． 掌叶防已碱（巴马汀，Palmatine）

CH3OCH3O21NOHOCH3OCH3

本品系季铵生物碱，溶于水、乙醇，几乎不溶于氯仿、乙醚、苯等溶剂，掌叶防已碱盐酸盐即氯化巴马汀（palmation Chloride）C21H22O4N ·Cl·3H2O为黄色针状结晶，熔点205℃（分解）。其理化性质与盐酸小檗碱类似。巴马汀氢碘酸盐（palmatine icdide）C21H22O4N·I·2H2O为橙黄色针状结晶，熔点241℃（分解）。 2．药根碱（雅托碱·Jatrorrhizine）

本品系具酚羟基季铵盐，其理化性质与巴马汀类似，但较易溶于苛性碱液中，其盐酸在水中的溶解度亦比盐酸巴马汀为大，可籍此性质予以分离。药根碱盐酸盐（Jatrorrhizine Chloride）C20H20O4N·Cl·H2O为铜色针状结晶，溶点204~206℃，其苦味酸盐（Jatrorrizine picrate）C20H20O4N·C6H2O7N2为橙黄色柱状结晶，溶点217~220℃（分解）。

HONOHCH3O1OCH3OCH3

3．小檗碱（黄连素Berberine）

1本品系季铵生物碱，其游离碱为黄色长针状结晶，C20H18O4N·OH·52H2O，溶点145℃，

在100℃干燥，失去结晶水转为棕黄色。小檗碱能缓缓溶于水（1：20），乙醇（1：100），较易溶于热水、热乙醇、微溶于丙酮、氯仿、苯、几乎不溶于石油醚中，小檗碱与氯仿、丙酮、苯均能形成加成物。小檗碱盐酸盐（Berberine Chloride）C20H16O4N·Cl2H2O，熔点205℃（分解），微溶于冷水，较易溶于沸水，其硝酸盐及氢碘酸盐，极难溶于水（冷水约1：2000）。小檗碱的中性硫酸盐、磷酸盐、醋酸盐在水中溶解度较大，小檗碱的盐类在水中的溶解度：

ooNOHOCH3OCH3

盐酸小檗碱 1：500

硫酸小檗碱 1：30（酸性盐1：100） 枸橼酸小檗碱 1：125 磷酸小檗碱 1：15

4．四氢巴马汀（Tetrahydropalmatine）:

延胡索乙素为消旋四氢巴马汀，系叔胺碱，其游离碱C21H25O4N溶点146~148℃，不溶于水，能溶于热乙醇（在冷乙醇中溶解度较小），易溶于氯仿、苯、乙醚中，延胡索乙素的

酸性硫酸盐为无色针状结晶，溶点245~246℃，在冷水中溶解度较小，在热水中较大，其中性硫酸盐为长柱状结晶，熔点220℃，在水中溶解度较酸性硫酸盐为大，其盐酸盐难溶于水。

CH3O NCH3OOCH3OCH3

左旋四氢巴马汀即颅痛定（Rotundine）熔点141~142℃[α]D16-257.5℃（C=1.1氯仿）。本品在华千金藤（Stephania sinica Diels）及圆叶千金藤（S. rotundalour）的块根（山乌龟）中含量较多。

5．黄藤素甲

本品为制备氯化巴马汀的乙醇母液中的少量成分，为季铵碱盐的盐酸盐C26H29O7N·HCl·H2O熔点196~198℃。[α]D+273.3°（C=1，乙醇），其还原物为白色针状结晶，熔点134~186℃[α]D+146.6℃（C=1，酸）。

6．黄藤素乙

本品系粗制巴马汀氢化、碱化分去四氯巴马汀后；母液中的微量物质，溶于氯仿。以氯仿一乙醇重结晶得黄色结晶，熔点192~193℃，[α]D+233.3℃（C=1，氯仿）。

7．黄藤内酯

本品得自粗氯化巴马汀重结晶进的不溶于水物质中，反复以酒精、丙酮重结晶，得光亮棱状结晶，C27H23O9，熔点273℃，[α]D+36.60 ℃(C=1，乙醇)。

8．黄藤甾醇

本品得制备氯化巴马汀的乙醇母液中，分出的少量油层经10%KOH皂化得到的白色针晶，熔点136~137℃，[α]D+24.51 ℃(C=1，氯仿)。

三、巴马汀提取及延胡索素制备的方法

巴马汀为季铵生物碱，溶于水和极性大的有机溶剂（如甲醇、乙醇等）所以可用甲醇、乙醇或水进行提取。然后通过盐析，降低其在水中的溶解度而沉淀，与其它杂质分离。巴马

1515151515

汀是有机碱，尽管它带正电荷，但和水的亲和力仍小于NaCl，NaCl和水的强亲和力，降低了巴马汀在水中的溶解度，使它被“挤”出。

巴马汀盐酸在冷水中溶解度小（比盐酸小檗碱略大）可以利用此性质进行分离。 方法：（一） 1.流程

（浸出）黄藤粗粉 1%HAc 浸出液NaOH NaCl（中和，盐析）巴马汀80%乙醇热溶后加盐酸 （精制） 2.

OCH3OCH3氢化HCLNCH3OOCH3氯化巴马汀OCH3OCH3游离NH4OHCH3OOCH3四氢巴马汀成盐NH2SO4CH3OOCH3延胡索乙素中性硫酸盐N1/2 H2SO4Zn.H2SO4.100CH3OOCH3四氢巴马汀酸性硫酸盐OCH3OCH3NHHSO4OCH3OCH3

2．工艺

（1）浸出：取黄藤粗粉100g，用1%醋酸冷浸（以浸没原料为度，约500ml）1~2天，尼龙布过滤，药渣再加15醋酸冷浸一天，合并滤液（留取1ml作生物碱定性反应）。

（2）盐析、中和：滤液用40%NaOH液调节至pH9同时加入7%精制食盐，即有黄色不溶物析出，80℃保温，使沉淀凝聚，静置，倾出上层清液，用菊形滤纸过滤，得巴马汀游

离碱粗品，烘干。

（3）精制：将粗巴马汀，加80%乙醇100ml，加热回流使溶，约十分钟，乘热抽滤，残渣再加少量乙醇同法处理一次，抽滤最后用滴管取乙醇淋洗布氏漏斗上不溶物，合并滤液并向滤液中滴加6N盐酸至PH2放置，即有金黄色针状结晶析出，抽滤，再用乙醇重结晶一次，方法，将氯化巴马汀粗晶置三角烧瓶内，用滴管加入95%乙醇使结晶恰溶解（在水浴上加热），抽滤得澄清液，加塞放置析晶。若滤液在抽滤时已析出结晶，可将它在水溶上加热结晶全溶再加瓶塞放置，这样析出的晶形好。若滤液体积太大，可溶缩至瓶壁边沿略显固体时加塞析晶。母液适当浓缩，又可析出一部分氯化巴马汀。

（4）还原：取氯化巴马汀精制品1g。置50~100ml园底烧瓶中加蒸馏水10ml，浓硫酸0.5ml，锌粉0.7g（工业生产应分批加入锌粉），直火加热保持沸腾，反应4~5小时（反应过程加溶液颜色逐渐变淡直至无色），反应完毕，趁热倾出上层清液，再用蒸馏水少许（1~2ml）稍加热洗涤反应瓶及锌渣1~2次，合并溶液放冷即有延胡索乙素酸性硫酸盐析出。抽滤，取结晶置25ml锥形瓶中，用70%乙醇10ml加热溶解。趁热抽滤，再用少量乙醇（1~2ml）洗涤容器，向热溶液（约60℃）中滴加氨水至PH9，立即析出鳞片状结晶，抽滤，用蒸馏水洗（此处所得结晶加水能否溶解？加氯仿能否溶解？）干燥得延胡素乙素游离碱。烘干。

（5）成盐：称取延胡索乙素游离碱0.5克。置于25毫升锥形瓶（或小烧瓶）中加90%乙醇4毫升，在水浴上加热使溶解，用粗毛细管滴加5%硫酸乙醇液至刚果红试纸呈淡蓝色（PH约5）放冷析晶。将微黄柱状结晶，抽滤干50℃以下干燥，即延胡索乙素中性硫酸盐。可用水重结晶一次，干燥后测熔点。溶点 ℃，得率 。

以醋酸水小样提取，一般得率1~2%，用乙醇回流浸取得率3~4%，取黄藤粗粉100g，用95%乙醇回流浸取三、四次合并乙醇至约120ml，即可按（3）精制项下操作，加盐酸得氯化巴马汀。

3．提取工艺说明

（1）黄藤中含有多糖类物质溶于水，往往影响水浸液盐析及中和后的过滤，故宜在静置后先倾泻去大部分澄清液再用布袋过滤收集沉淀，原料药材亦不宜粉碎太细。

（2）氯化巴马汀为金色针状结晶，并有强烈的黄色萤光。四氯巴马汀为先无色片状结

四、薯蓣皂苷元的鉴定 1．熔点测定：204～209℃ 2．薄层层析鉴定：

应只呈现一个与标准Rf值一致的色斑。 样品：白色结晶的无水醇液 标准品：薯蓣皂苷元无水醇液

1）吸附剂：AI2O3软板（中性100～200目，活性Ⅲ级） 展开剂：苯一甲醇（9：1） 2）吸附剂：硅胶H-CMC硬板 展开剂：石油醚-乙酸乙酯（7：3）

显色剂：10%磷钼酸乙醇溶液。喷雾后加热10～20分钟 3）化学反应：

①Liebermann-Burchard反应 ②CHCI3—浓H2SO4试验

③五氯化锑反应（Kahlenberg反应）：与五氯化锑的氯仿溶液呈紫蓝色。 4）制备衍生物：

乙酰化物的制法：取样品100mg溶于3ml吡啶中，加入20ml醋酐，煮沸半小时至一小时后，将反应物倒入冰水中（冬季操作使用冷水即可）。待析出白色晶体后，抽滤，析出物丙酮重结晶即得。mp196～193℃。

5．紫外吸收光谱的测定：

取样品5mg，加入浓H2SO4 10ml，在40℃水浴上加热1小时，放冷，测定。薯蓣皂苷元应有以下最大吸收峰：

λmax 271nm 415nm 514nm 10g? 3.99 4.06 3.64

实验八 中草药化学成份的鉴别法

一、生物碱的鉴别 1．检品溶液的制备：

取粉碎的植物样品约2g，加蒸馏水20~30ml，并滴加数滴盐酸，使呈酸性。在60℃水浴上加热15分钟，过滤，滤液供作以下试验。

2．生物碱类成分的鉴别：

生物碱类成分（除有少数例外）均与多种生物碱沉淀试剂在酸性溶液（水液或稀醇液）中产生沉淀反应。操作如下：

（1）取上备酸水浸液四份（每份1 ml左右即可）,分别滴加碘-碘化钾﹑碘化汞钾试剂﹑碘化铋钾试剂﹑硅钨酸试剂。若四者均有或大多有沉淀反应，表明该样品可能含有生物碱，再进行下项试验，进一步识别。

（2）取上备其余酸水浸液，加Na2CO3溶液呈碱性，置分液漏斗中，加入乙醚约10ml振摇，静置后分出醚层，再用乙醚3ml，如前萃取，合并醚液。将乙醚液置分液漏斗中，加酸水液10ml振摇，静置分层，分出酸水液，再以酸水液5ml如前提取，合并酸水液，如此酸提液四份，分别作以下沉淀反应。

a．碘化汞钾试剂（Mayer试剂）：酸水提液滴加碘化汞钾试剂，产生白色沉淀。 b．碘化铋钾试剂（Dragendorff试剂）：酸水提液滴加碘化铋钾试剂，产生桔红色或红棕色沉淀。

c．碘-碘化钾试剂（Wagner试剂）：酸水提液滴加碘-碘化钾试剂，产生棕色沉淀。 d．硅钨酸试剂：酸水提取液滴加硅钨酸试剂产生淡黄色或灰白色沉淀。

此酸水提液与以上四种试剂均（或大多）产生沉淀反应，即预示本样品含有生物碱。

（3）备注：以上（1）、（2）沉淀反应结果：沉淀的多少以“+++”，“++”，“+”表示，无沉淀产生则以“—”表示。若（1）项试验全呈负反应，可另选几种生物碱沉淀试剂（可参考有关资料）进行试验，若仍为负反应，则可否定样品中有生物碱的存在，不必再进行（2）项试验。

二、苷类的鉴别 （一）苷的一般鉴别反应 1．检品溶液的制备：

中草药水浸液：取中草药碎块或粉末2g，加蒸馏水约20ml 70℃±水浴，浸渍10分钟，过滤，滤液供鉴别用。

中草药醇浸液：取中草药碎块或粉末少许于试管中，加乙醇10ml，在温水浴上浸渍10分钟，过滤，滤液供鉴别用。

2．鉴别试验：

（1）?-萘酚试验（Molish）反应 取醇浸液1ml，加10%?-萘酚醇液1滴，摇匀，沿管壁缓慢加入浓H2SO4 10滴，不振摇，观察两液介面间是否出现紫红色杯（此反应检识糖、苷类化合物，反应较灵敏。若有微量滤纸纤维或中草药粉末存在于溶液中，都能产生上述反应，故在过滤时应加以注意）。

（2）水解反应：

取水浸液3ml于试管中，加10%HCl 1ml在沸水浴上加热20分钟，观察是否有絮状沉淀产生？

（3）碱性酒石酸铜（斐林试剂Fehling’s test solution）试验

取水浸液2ml，加入新配制的斐林试剂（甲+乙等量混合）1ml，在沸水浴上加热数分钟，如产生红色的氧化亚铜沉淀，则行过滤，滤液中加10%HCl调成酸性，置水浴上加热10分钟。进行水解，如有絮状沉淀则滤去。然后用10%NaOH中和，再加入斐林试剂1ml，仍置沸水浴上加热5分钟，观察是否有黄色，砖红或棕色沉淀产生？（此反应试多糖，苷类）从反应结果说明供试中草药中是否含有苷？（此试验法亦可采用同体积同浓度的中草药浸液两份，一份先经酸水解过滤碱化后，另一份再同时进行如上的还原反应，对比生成的氧化亚铜

量，两份是否有差异来判断，具体方法见系统预试实验）。

注：中草药对苷的一般鉴别是正反应，还可进一步作个别苷类的鉴定。具体方法如后。 （二）蒽苷的鉴别 1．检品溶液的制备：

取大黄粉末2克，加乙醇20ml，在沸水浴上回流浸提10分钟，过滤供鉴别用。 2．鉴别试验：

（1）与碱成盐显色反应（Borntrager反应）：取1ml乙醇提取液，加入1ml 10% NaOH溶液，如产生红色反应，加入少量30%过氧化氢液，加热后红色不褪，加酸使呈酸性时，则红色消褪再碱化又出现红色。

注：或取大黄粉末少许，置小试管中，加水1~2ml，加浓H2SO4 2—3滴，置水浴中加热10分钟，冷却，加乙醚1—2ml振摇。用吸管吸取醚液（黄色）于另一洁净试管中，加入NaOH试液1ml振摇，则醚层应褪为无色，碱层（下层）为红色，示有蒽醌类成分存在，如供试的中草药在以上试验中碱水层仅现黄色，可分出碱水溶液，置试管中，加30%H2O2溶液1~2滴，在沸水浴中加热数分钟，混液如能转为橙红色，说明中草药中可能有蒽酚类成分存在。

（2）升华试验：取大黄粉末少许，置载玻片上，玻片两端各放短木棍一小段，然后另取一洁净载玻片，放置于小棍上，注意勿触及下面粉末。然后移置在三足架的铁纱网上小心加热（勿使粉末炭化）至玻片上有升华物凝结为止，取下盖片，使升华物面向上，放置于显微镜下观察，可见多数黄色针晶或羽毛状晶体（蒽醌衍生物）。此晶体遇碱液呈红色。

（3）园形滤纸层析： 样品：大黄醇浸液

显色：1）于自然光下观察色带 2）于紫外光下观察荧光环

3）氨熏，观察是否出现红色环，再置uv下观察荧光环

4）喷0.5%MgAC2甲醇液，于90℃烘5分钟，是否出现橙红或紫红色环。 （三）黄酮苷的鉴别

1．检品溶液的制备：

取槐花米约1克压碎于试管中加乙醇10~20ml在水浴上加热20分钟。过滤，滤液供以下试验。

2．鉴别试验：

①取醇浸液2ml，加浓盐酸2~3滴及镁粉少量，放置（或于水浴中微热），产生红色反应。

②取醇浸液1ml，滴加pbAC2溶液数滴，产生黄色沉淀。 ③纸片法：

将醇浸液滴于滤纸上，分别进行以下试验：

①先在紫外灯下观察荧光，然后喷1%AlCl3试剂，再观察荧光是否加强。 ②氨熏后出现黄色，棕黄色荧光斑点。

与氨接触而显黄色，或者原呈黄色，但与氨接触后黄色加深，滤纸片离开氨蒸气数分钟，黄色或加深后的黄色又消褪。

③喷以3tCl3乙醇溶液，出现绿、兰或棕色斑点。 （四）强心苷的鉴别 1．检品溶液的制备：

取夹竹桃叶碎块粉末3g，于100ml锥形瓶中加70%乙醇40ml，水浴上浸煮5分钟，放冷，过滤，滤液（或经处理后——方法参照注二）供鉴别用。

[注1]：强心苷的试验都是在较强的碱性条件下进行，如果样品中含有蒽醌，也具有红色反应，防碍检查，因此在检查前需先检查有无蒽醌类成分，若有则应先将其除去，即将乙醇浸液在水浴上蒸发，残渣加CHCl3热溶后过滤，CHCl3液用1%NaOH液振摇，去除蒽醌后，CHCl3液供鉴别用。

[注2]：夹竹桃叶或毛地黄叶绿素，常使醇提液带较深的绿色，影响反应的进行。故需将叶绿素除去，具体方法如下：

乙醇浸提液在水浴上挥去大部分乙醇（不让乙醇挥尽），再加水适量，使含醇量约20%左右，稍热后即放冷，过滤，滤液即可供试验用，或将滤液在水浴上浓缩至糖浆状，加入

95%乙醇10ml溶解再供试验用。

2．鉴别试验：

（1）三氯化铁冰醋酸反应（Keller-Kiliani反应）：取醇提液或经处理后的CHCl3或醇液1ml，水浴上蒸干，残渣溶于冰醋酸2ml中，加入1tCl3乙醇液1滴，混合均匀，倾入干燥小试管中，再沿管壁缓慢加入等体积浓硫酸，静置，二液交界处显棕色（苷元），渐变为浅绿，兰色，最后上面醋酸层全呈兰色或兰绿色（?-去氧糖）。

（2）碱性3.5-二硝基苯甲酸反应（Kedde反应）：取1ml醇浸提液，加入碱性3.5-二硝苯甲酸试剂3~4滴，产和红色或红紫色反应。

（3）亚硝酰铁氰化钠反应（Legal反应）：取1ml醇浸提液或经处理后的CHCl3或醇液在水浴上蒸干，用1ml吡淀溶解残渣，加入0.3%亚硝酰铁氰化钠溶液4~5滴，混匀，再加入NaOH饱和乙醇液1—2滴，是否呈现红色（若结果不明显可另一取一份供试液如上操作，最后加NaOH饱和乙醇液0—5ml，观察二液交界面有无红色）。

（4）碱性苦味酸（Baljet反应）

取样品醇液1ml，加入碱性苦味酸试剂（苦味酸饱和水液与5%NaOH水液等量混合）数滴，呈现橙或橙红色。

（五）皂苷的鉴别 1．检品溶液的制备：

1）取皂角碎块1g于大试管（或小烧杯）中，加蒸馏水15ml，于30~90°水浴上浸渍15分钟后过滤，滤液供鉴别用。

2）取薯蓣碎块0.5g加上法同样制备得薯蓣水浸液。

3）取薯蓣碎块0.5g于大试管或小锥形瓶中加95%乙醇10ml于水浴上温浸15分钟，滤液供鉴别。

2．鉴别试验：

（1）溶血试验：取滤纸片一小块，于小心处滴加皂角浸液一滴，待干后于同处再滴加一滴，如是反复操作至滴加数滴，干燥后无喷雾血球试液（取牛血、羊血或兔血一份，用玻棒或棉签搅和，除去凝集的血蛋白，加pH7.4磷酸盐缓冲液一份稀释即得），数分钟后观察

在红色的背底中是否出现无红色的黄色（或透明）斑点（中心处皂解浸液原点）。（本反应亦可在试管中进行，血球试液中草药浸液中的皂苷溶解后，血球液由浑浊变为澄明。此外还可在载玻片上进行，并在显微镜下观察血球破裂溶解前后的状况）。

（2）泡沫试验：薯蓣浸液，皂角浸液各2ml，分别置于试管中。用力振摇一分钟后放置，在10分钟内观察二管是否都有持久性泡沫产生？

（3）醋酐浓硫酸试验（Liebermann-Burchard反应），皂角浸液5ml，于蒸发皿中在水浴上蒸干，加入1ml醋酐使其溶解，滴于干燥比色盘中，从边沿缓缓滴加浓硫酸1滴，观察颜色变化。

另取薯蓣浸液5ml，置于蒸发皿中，在水浴上蒸干，加入1ml醋酐溶液，并倾入比色盘中，（试管）沿管壁加入几滴浓硫酸，观察界面间是否有紫红色环产生？

（4）氯仿—浓硫酸试验（Salkowski反应）：取薯蓣醇浸液2ml，在水浴上蒸干，有氯仿1ml溶解，转入干燥小试管中，沿壁小心加浓硫酸1ml，氯仿层显红或兰色，硫酸层有绿色荧光，示含甾体皂苷。

（六）香豆精苷的鉴别 1．检品溶液的制备：

取秦皮2克，加入乙醇20ml，在水浴上回流10分钟，趁热过滤，滤液供鉴别用。 2．鉴别试验：

（1）内酯化合物的开环与闭环反应：取2ml乙醇浸出液，加1—2ml 1% NaOH，于沸水浴中煮沸3分钟，冷却后加新配制的重氮化试剂1~2滴，显红色。

（2）肟异羟酯酸铁试验：取香豆素少许，加酒精1ml溶解加6滴盐酸羟胺的饱和乙醇液混匀后加入6滴KOH的饱和乙醇液，使其显强碱性再转入试管中加热10分钟左右（有气泡产生），冷却加5%盐酸使呈弱酸性（Ph6左右），倾入比色盘或蒸发皿中，沿器壁滴10tCl3溶液，约半分钟后紫色出现或加深（后消失）。（此反应试酯、内酯、香豆精及其苷类。但用中草药浸液试验反应结果不太明显）。

（七）氰苷的鉴别

取苦杏仁4~5粒，研碎，置50ml锥形瓶中加入3ml。

5%硫酸溶液，充分混合，塞好，进行以下（1）、（2）反应。

（1）苦味酸钠试验：取滤纸条先滴加饱和苦味酸液侵润，稍干后，再滴加10%碳酸钠1~2滴润湿，干后，悬于上述锥形瓶中，在水浴上加热10分钟，滤纸渐变为橙色或砖红色。

（2）取滤纸条先滴加3~4滴愈创木树酯醇溶液润湿，干后，再滴加1%硫酸钠液3~4滴润湿后，悬于同一锥形瓶中，放置，滤纸条渐变为鲜兰色（放置过入色渐褪）。

（3）亚铁氰化铁反应（普鲁士兰反应）：另取苦仁一粒研碎，放入试管中，加水1~2滴润湿（切勿过量），立即用已被10%NaOH试剂1滴湿润的滤纸条悬于管口置50℃水浴上约10分钟，将滤纸取出，于滤纸上加10tSO4液1滴，加10%HCl1~2滴及1tCl3，试液1滴即显兰色。

四、挥发油的定性鉴别 1．外观性状：

（1）取各种挥发油（松节油、薄荷油、丁香油、陈皮油及桂皮油）观察其色泽，是否有特殊香气，及辛辣烧灼味感。

（2）挥发性：取滤纸屑一小块，滴加薄荷油一滴，放置2小时或微热后观察滤纸上有无清晰的油迹（与菜油作对照实验）。

（3）pH检查：（检游离酸或酚类）。

取样品一滴加乙醇5滴，以预先用蒸馏水湿润的广泛pH试纸进行检查，如显酸性，示有游离的酸或酚类化合物，剩下的样品乙醇液供下面（7）（8）试验用。

（4）FeCl3反应（检酚类）：

取样品一滴，溶于1ml乙醇中，加入1%得FeCL3醇液1~2滴，如显蓝紫或绿色，示有酚类。

（5）苯肼试验（检酮、醛类）

取2，4—二硝苯肼试液0.5~1ml，加1滴样品的无醛醇溶液，用力振摇，如有酮醛化合物，应析出黄一橙红色沉淀，如无反应，可放置15min后再观察之。

（6）荧光素试验法：

将样品乙醇液滴在滤纸上，喷酒0.05%荧光素水溶液，然后趁湿将纸片暴露在

5%Br2/Col4蒸汽中，含有双键的萜类（如挥发油）呈黄色；背景很快转变为浅红色。

（7）香荚醛——浓硫酸试验：

取挥发油乙醇液一滴于滤纸上，滴以新配制的0.5%香荚醛的浓硫酸乙酸液，呈黄色、棕色、红色或兰色反应。

五、鞣质类化合物的鉴别 1．检品溶液的制备：

取五倍子（含可水解鞣质），儿茶（含缩合鞣质），没食子酸（鞣质水解产生伪鞣质）少量（约0.1克）分别置大试管中，加蒸馏水约10ml，加热煮沸，过滤，滤液作以下试验：

2．鞣质的一般反应（鞣质与伪鞣技的区别鉴定）

（1）感观试验：取制备的鞣质和伪鞣质溶液，尝其味，并以石蕊试纸检查溶液是否呈酸性反应。

（2）三氯化铁反应：取制备的鞣质溶液（五倍子溶液或儿茶溶液）及伪鞣溶液（食子酸溶液）各1~2ml ，分别加入三氯化铁试液,鞣质产生绿色或兰黑色反应或沉淀;伪鞣质产生兰色反应。

（3）沉淀蛋白反应：取鞣技溶液及伪鞣质溶液各1~2ml，分别入明胶溶液数滴，鞣技立刻产生沉淀反应。

（4）生物碱反应：取鞣质溶液及伪鞣质溶液各1~2ml，分别滴加0.1%咖啡碱水溶液，鞣质液产生沉淀反应，伪鞣质不产生沉淀反应。

3．可水解鞣和缩合鞣质的区别鉴定

（1）鞣红反应：取五倍子浸液（含可水解鞣质），儿茶浸液（含缩合鞣质）各2ml，分别加盐酸0.5ml，加热煮沸30分钟左右放冷。可水解鞣质不发生沉淀，缩合鞣质有红色沉淀产生。

（2）三氯化铁反应：取五倍子浸液及儿茶浸流各1~2ml，分别加入三氯化铁试液数滴，可水解鞣质显兰色或黑兰色反应，缩合鞣质显黑绿色反应。

（3）溴水反应：取五倍子浸液用儿浸液各1~2ml，分别加入溴水数滴，可水解鞋帽质不产生沉淀反应，缩合鞣质产生沉淀。

（4）石灰水反应：取五倍子浸液及儿茶浸液各1~2ml，分别加入新制石灰水数滴，可水解鞣质显青灰色沉淀，缩合鞣质显棕色沉淀。

（5）醋酸溶液中与醋酸铅反应：取五倍子浸液及儿茶浸液各1~2ml，分别加醋酸液数滴，摇匀后再分别滴加醋酸铅溶液数滴，可水解鞣质产生絮状沉淀，缩合鞣质无沉淀产生。

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