primerstar 说明书

primerstar酶

PrimeSTAR® HS

DNA Polymerase with GC Buffer

使 用 说 明 书

TaKaRa Code：DR044A

●包装量： 250 U

●制品说明

PrimeSTAR® HS DNA Polymerase with GC Buffer适用于高保真扩增具有复杂二级结构的DNA模板（GC rich、重复序列等）。PrimeSTAR® HS DNA Polymerase具有极强的3’→5’Exonuclease活性，显示出超群的校正功能，同时还具有优于Taq DNA Polymerase的高扩增效率。本制品对cDNA克隆等要求高保真的PCR反应能够发挥强大威力,并能对高GC含量模板进行高效扩增。使用本制品扩增得到的PCR产物几乎都为平滑末端，经磷酸化后可直接克隆于具有平滑末端的载体中。

● 制品内容 PrimeSTAR® HS DNA Polymerase（2.5 U/ μl） 100 μl 2×PrimeSTAR® GC Buffer (Mg2+plus)* 1.7 ml×3 dNTP Mixture（2.5 mM each） 800 μl* Mg2+

浓度为2 mM。

●保 存

-20℃。

●活性定义

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为

1个活性单位（U）。

●纯 度

1）10 U的本酶和0.6 μg的λDNA-Hind III在

74℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

2）10 U的本酶和0.6 μg的Supercoiled

pBR322 DNA在74℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

●用 途

PCR

法高保真扩增DNA片段。

●PCR反应性能

1） 以λDNA为模板，可以很好地扩增8、10、

12、15 kbp的DNA片段。

2） 以人基因组DNA为模板，可以很好地扩增

APO E基因520 bp（GC含量74.8%）的

DNA片段。

●反应条件 1. 按下列组份配制PCR反应液。 2×PrimeSTAR® GC Buffer

25 μl

dNTP Mixture（2.5 mM each） 4 μ l

Primer 1 0.2-0.3 μM（final conc.） Primer 2 0.2-0.3 μM（final conc.） Template*

<200 ng

PrimeSTAR® HS DNA Polymerase（2.5 U/μl） 0.5 μl

dH2O

up to 50 μl*【50 μl PCR反应体系中模板DNA推荐使用量】

人基因组DNA 5 ng～200 ng(<200 ng)

大肠杆菌基因组DNA 100 pg～100 ngλDNA 10 pg～10 ng质粒DNA 10 pg～1 ngcDNA Library 1～200 ng2. PCR反应条件*。 98℃ 10 sec

68℃ 1 min/kbp 30 Cycles

or

98℃ 10 sec

60℃ 5 sec 30 Cycles

72℃ 1 min/kbp

* ① 通常进行2 Step PCR反应，当2 Step PCR

反应得不到良好反应结果时，可以试用3 Step PCR反应进行实验。 ② 本酶具有高退火效率，在进行3 Step的PCR条件设定时，可以缩短退火时间。

primerstar酶

●实验例

使用Taq DNA Polymeras 、PrimeSTAR® HS DNA Polymeras、PrimeSTAR® HS DNA Polymerase with GC Buffer，按照各自的反应条件，分别扩增了人APO E基因（520 bp，GC含量74.8%）和Tth HB8基因（3，005 bp，GC含量73.2%），进行了各种DNA聚合酶的反应性能比较，结果如下：

【APO E 520 bp DNA 片段的扩增结果】

Taq DNA pol. PrimeSTAR® HS PrimeSTAR®HS

【结论】

以上两基因的扩增结果显示，对于GC含量高的模板，PrimeSTAR® HS DNA Polymerase with GC Buffer的扩增效果优于其它DNA 聚合酶。

●注意事项

PCR的反应液请在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法（Cool Start Method）可增强PCR扩增的特异性，减少PCR过程中的非特异性反应，能得到良好的PCR结 with GC Buffer

果。 M M M M M

520 bp

M: 100 bp DNA Ladder 1: 1 ng Human Genomic DNA的PCR扩增产物 2: 10 ng Human Genomic DNA

的PCR扩增产物 3: 100 ng Human Genomic DNA 的PCR扩增产物

【Tth HB8 3,005 bp DNA 片段的扩增结果】 Taq DNA PrimeSTAR® HS PrimeSTAR®HS

3,005 bp

M:

λ-Hind III digest 1: 100 pg

Tth HB8 Genomic DNA的PCR扩增产物 2: 1 ng 3: 10 ng Tth HB8 Genomic DNA的PCR扩增产物 Tth HB8 Genomic DNA的PCR扩增产物

V2010.02

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/5iwj.html