仪器分析实验报告

实验一 紫外－可见分光光度计的性能检验 一、实验目的

1.掌握紫外－可见分光光度计性能的检验方法

2.学会UV-1100型紫外－可见分光光度计的使用方法 二、实验原理

分光光度计的性能的好坏，直接影响到测定结果的准确程度。因此，要对仪器进行性能检查，以保证测定结果的准确性。 三、仪器和试剂

UV－1100型紫外－可见分光光度仪 石英比色皿（一对） 擦镜纸

K2Cr2O7溶液 KMnO4溶液 蒸馏水

四、实验内容及操作步骤

1. 比色皿的配对性 将蒸馏水注入到比色皿中，以其中一个比色皿作空白，在 440 nm波长处分别测定其他各比色皿中的透光率。

2.波长精度的检查 用KMnO4溶液的最大吸收波长525nm为标准，在待测仪器上测绘KMnO4溶液的吸收曲线，若测得的最大吸收波长在525?1nm以内，则仪器的波长精度符合使用要求。 3. 重复性 以0.02mol/L的H2SO4溶液的透光率为100%，用同一K2Cr2O7溶液连续测定7次，求出极差，如小于0.5%，则重复性符合要求。 4.吸收值的准确度考察 取K2Cr2O7溶液，在以下波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，如下表所示，其相对偏差在?1%以内，则吸收值的准确度符合要求。

波长/cm 吸收系数E1m

235

（最小）

257

（最大）

313

（最小） 47.0~50.3

350

（最大） 105.5~108.5

123.0～126.0 142.8~146.2

五、思考题

1. 同种比色皿透光度的差异对测定有何影响？

2. 检查分光光度计的重复性对测定有什么实际意义？

实验二、吸收曲线的测绘及吸收系数的测定 一、实验目的

1. 掌握测绘吸收曲线的方法

2. 学会测定吸收系数 二、实验原理 若溶剂固定不变，化合物吸收曲线所出现的λmax、λmin或λ (S)为一定值，且他们的数目也一定，从而为鉴别化合物提供了有力的证据。 百分吸收系数是指当溶液浓度为1%，液层厚度为1cm时，指定波长的吸光度。 即 E1cm?1%A C?1三、仪器和试剂 UV－1100型紫外－可见分光光度计 石英比色皿（一对） 100ml 烧杯1 个 擦镜纸 95%乙醇（A.R） 丹皮酚对照品 四、实验内容及操作步骤 丹皮酚对照品母液的配制：称取丹皮酚对照品10mg，用95％乙醇溶解，定容至10ml，摇匀。吸取5ml于100ml量瓶内，用95%乙醇定容，作为母液备用，此溶液中丹皮酚的含量为0.005%。 1. 吸收曲线的测绘 吸取母液1ml于10ml量瓶内，用95％乙醇定容。此时，丹皮酚含量为0.0005%。将此溶液与空白溶液（95％乙醇）分别用两个相同的比色皿盛装后，放置在仪器的比色架上，按仪器使用方法进行光谱扫描，得到吸收曲线图。 2．吸收系数的测定 利用上述溶液，在274nm波长处测定其吸光度，计算百分吸收系数。

实验三、分光光度法测定槐花中总黄酮的含量 一、实验目的

1.掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法 2.巩固紫外－可见分光光度计的操作方法 二、实验原理

黄酮类化合物分子结构中多含有羰基和羟基等结构，这些结构可与金属盐类试剂如铝盐、铅盐

等生成有色配合物。

铝盐比色法是指用三氯化铝或硝酸铝、亚硝酸钠同黄酮类化合物生成稳定的有色配合物，可用于定量分析。 三、仪器和试剂

UV－1100型紫外－可见分光光度仪 石英比色皿（一对） 5% NaNO2溶液 10% Al(NO3)3溶液 NaOH试液 芦丁对照品 槐花药材

其余试剂均为分析纯 四、实验内容及操作步骤

1. 对照品溶液的制备 精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品50mg，置25ml量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。（每1ml中含无水芦丁0.2mg）。

2. 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置25ml量瓶中，各加水至5ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，在500nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

3. 样品测定 取本品粗粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流至提取液无色，放冷，弃去乙醚液。再加甲醇90ml，加热回流至提取液无色，移至100ml量瓶中，用甲醇少量洗涤容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取3ml，至25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5ml”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量（μg），计算，即得。 槐花中含总黄酮以无水芦丁（C27H30O16）计，不得少于8.0%。 五、注意事项

1、对照品和样品应同时显色

2、显色剂加入的顺序、加入量和显色时间要正确

六、思考题

1.分光光度法有哪些影响因素？ 2.试述标准曲线法的优点。

实验四、薄层板的制备 一、实验目的

掌握薄层板的制板方法 二、仪器和试剂 天平（0.1mg） 研钵 玻璃板 10 cm×20cm

CMC-Na水溶液 蒸馏水

95％乙醇（A.R）

薄层层析用硅胶G（青岛海洋化工厂） 三、实验内容及操作步骤

1. 洗板 选取板面平整的玻璃板，洗净后放置在薄层板放置架上阴干备用。（要求：薄板应光滑、平整、不符水珠。）

2．匀浆 将吸附剂1份（3.0g）和水3份在研钵中向同一方向研磨混合均匀。

3．铺制 将已调制好的吸附剂匀浆倒至玻璃板板的一端，用研棒将匀浆引到玻板的各个边缘，轻轻震动，使吸附剂均匀铺开成一薄层。置水平台上阴干。

4．活化 将阴干的薄层板至于110℃烘箱中活化30分钟，置于有干燥器中备用。

要求：制备好的薄层板应检查其均匀度,即在反射光及透射光的检视下其表面应均匀、光滑、平整、无麻点、无气泡、无破损及无污染。 四、注意事项

1.玻璃板的规格有多种10*20cm、20*20cm等，可根据实验需要选择不同规格的玻璃板。 2. CMC-Na水溶液做为薄层板制备的粘合剂，《中国药典》2005年版规定其浓度在2‰～5 ‰，其浓度大小决定了所制备薄层板的硬度，本次实验粘合剂浓度为3 ‰ 。

3.除硅胶GF254外，薄层用硅胶还有硅胶G、硅胶H、硅胶GF365、硅胶GH254、 硅胶GH365等，不同种类的硅胶所制备出的薄层板性能不同。本次试验所用的硅胶GF254是指一种含有煅石膏的硅胶并在其硅胶中加入了一种在254nm下显强荧光背景的荧光剂，主要用于分离、检视在紫外和可见光下物无吸收的成分。

五、思考题

1．薄层板的铺制过程中应注意哪些问题？

实验五 薄层色谱定性分析（五味子的定性鉴别） 一、实验目的

1. 掌握薄层色谱的定性分析方法 2. 熟悉薄层板的点样方法 二、实验原理

中药五味子中，五味子甲素为其主要有效成分之一，为了更好的进行定性鉴别，选用五味子甲素对照品和五味子对照药材进行对照，根据相同的组分在相同的条件下，应该有相同的颜色和比移值来作为定性鉴别的依据。

三、仪器与试剂 毛细管

薄层板 10 cm×20cm 所用试剂均为分析纯 五味子粉末

四、实验内容及操作步骤

取五味子粉末1g，加三氯甲烷20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品液。另取五味子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每ml含1mg的对照品溶液。吸取上述三种溶液各2μl，点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 五、注意要点

1.五味子有南、北之分。《中国药典》2005年版（一部）所收载的五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(TurcZ) Bail的干燥成熟种子。习称“北五味子”。

2.本次实验操作分为点样、展开、检视与记录数据四个过程。具体操作要点如下：

2.1点样：在干燥、清洁的环境中用毛细管分别吸取对照品溶液、对照药材溶液和样品溶液于同一硅胶GF254薄层板上，点样基线距离底边10~15mm，点样圆点不大于3mm，接触点样时勿损伤薄层板表面。点间距离不少于8mm。

2.2展开：浸入展开剂的深度为距底边5mm为宜。上行展开10cm左右，达到展距后取出薄层板、晾干、待检测。（展开之前应注意预平衡：在双槽展开箱的一侧槽内加入适量的展开剂，密闭，一般保持15～30 min，待容积蒸汽平衡后，应迅速将薄层板放入展开箱中，立即密闭，展开。） 2.3检视与记录数据：将展开、晾干的薄层板置于254mm紫外灯下检视，观察供试品溶液所显示的主斑点的颜色和位置（Rf值）与对照品溶液、对照药材溶液是否一致。当供试品溶液主斑点与对照品、对照药材能对应时，即可认为该药材为药典收载五味子。

六、思考题

1．如何克服薄层展开过程中的边缘效应？引起边缘效应的因素有哪些？

实验六、高效液相色谱仪的使用 一、实验目的 1. 掌握高效液相色谱仪的使用方法 2.了解高效液相色谱仪的结构

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