化学发光技术及相关论文及常用发光剂

主题：化学发光http://www.39kf.com/my/tag_1_20809a21457a23398a21270/ 化学发光免疫诊断技术：免疫诊断的又一里程碑

临床免疫诊断技术的发展从开始放射免疫诊断技术（RIA）、到上世纪70年代兴起的酶联免疫诊断技术（ELISA）、再到当前的化学发光免疫诊断技术（CLIA），无非都是应免疫学技术的迅速发展对精度的要求越来越高而产生。

传统的放射免疫诊断技术（RIA）灵敏度高，特异性强，已广泛应用于生物体液中激素及其代谢产物、药物等物质的定量分析。但由于RIA需要核素标记物，因而不可避免地带来了与核素有关的不利因素。如核素标记物半衰期较短、放射性废物处理、测量仪器昂贵等。

近年来，研究者们通过探索非放射性免疫诊断技术，利用化学发光的基础，先后将固相酶联免疫法与化学发光法结合起来，形成化学发光免疫诊断技术（CLIA）。

CLIA对检测细菌、病毒、抗体和激素等方面都显示了高的灵敏度和特异性。CLIA的基本原理与RIA相似，两者的区别在于CLIA是用化学发光剂作为标记物以代替核素标记物。当标记上的化学发光分子被氧化时，释放出大量光子，通过其光强度的测定从而达到定量分析的目的。

据了解，CLIA同其他免疫测定一样，可分为均相系统和非均相系统两大类型。

最初，CLIA是由Halmann等人提出并用于测定灵杆菌菌体抗原的。“可以说CLIA是从微生物的快速检测中起步的。发展到今天，在检测各种细菌、病毒、抗体和肠毒素等方面有了相当广泛的应用。”王法龙说。

而CLIA在激素检测中也开始得到了应用，比如用均相CLIA测定尿中的总雌激素，以ABEI作化学发光标记物的精确度可与通常的RIA方法相媲美。其结果与常规荧光法的结果相关性良好。

此外，在快速检测病毒和细菌感染及有关蛋白，尤其是将固相CLIA应用于病毒性肝炎病原型上也取得了令人满意的效果。

日期：2010年7月30日 - 来自[学术活动]栏目 ELISA与化学发光法测尿微量白蛋白临床评价

【摘要】 目的 评价ELISA法测定尿微量白蛋白的临床适用性。 方法 分别用ELISA法和化学发光法检测115份患者晨尿标本中微量白蛋白浓度。 结果 ELISA法和化学发光法检测尿微量白蛋白结果的差别无统计学意义(P>0.05)，两者具有良好的相关性（r=0.994）。 结论 ELISA法检测尿微量白蛋白结果与化学发光法结果一致，而ELISA法费用低，简捷 ，适合医院的临床需要，值得推广应用。

【关键词】 尿微量白蛋白；ELISA法；化学发光法

Evaluation of dinical examination of serum MA by ELISA and chemiluminescence.

ZHAN Bao-e, LI Wei-xiong, LIANG Guang-jia.

（Shenzhen Municipal Traditional Chinese Medicine Hospital, Shenzhen 518033, Guangdong, P. R.China)

Abstract: Objective To evaluate the clinical value of ELISA and chemiluminescence for determination of urinary microalbuminuria(MAU). Methods Urine samples of 115 patients were determined by ELISA and chemiluminescence respectively for the urinary MA concertration. Results The result showed that there was no statistical difference between the urinary MAU levels measured by ELISA and Chemiluminescence(P>0.05),and they were positively correlated with each other（r=0.994） . Conclusion Comparing with chemiluminescence in determing the urinary MAU concertration ,ELISA is more cheap, simple and suitable for clinical application.

Key words: Microalbuminuria(MAU)； ELISA； Chemiluminescence

尿微量白蛋白（MAU）是指尿中白蛋白含量超出健康人参考范围，但不能用常规的方法检测出这种微量的变化。为了使这一检测指标标准化，国际上采用白蛋白分泌率表示尿中白蛋白的排出量。健康人MAU在<20～30mg/24h(或<20～30μg/min)的范围内;MAU在20～300μg/24h时称其为MAU;MAU>300mg/24h时称其为大量白蛋白尿。MAU排出量增加是疾病早期的改变，对疾病的早期诊断，早期治疗有重要的参考价值和临床意义[1]。大量的临床研究表明MAU是预测糖尿病、高血压、心血管疾病血管损伤的敏感指标。目前国际上十分重视MAU的测定，认为这项指标对早期治疗原发病、分析病程进展、评价相关危险因素具有重要意义[2]。本文分别用ELISA法和化学发光法测定尿微量白蛋白浓度，对其结果进行比较，并比较其优缺点，从而评价ELISA法的临床适用性。

1 材料与方法

1.1 对象 为2007年1～3月份来我院就诊的115位患者，年龄在32～73岁之间平均（50.8±7.1）岁。都是临床初步诊断疑为肾病、糖尿病、风湿病及心血管病等等不同类型的患者。

1.2 标本采集及处理 取每位患者的晨尿4～5ml于冰箱4～8℃保存，收集至115份标本之后，1周之内同时采用2种方法测定。

1.3 试剂与仪器 美国DPC公司生产的IMMULITE型全自动化学发光分析仪；ELX—800酶标仪（美国BIO-TEK）；洗板机（BIO-RAD，MODEL1575）。

化学发光法试剂为：美国DPC公司生产的YZB/USA 2153-40《白蛋白试剂盒》； ELISA法 ：北京科卫临床诊断试剂有限公司生产的《尿微量白蛋白定量检测试剂盒》。

1.4 方法

1.4.1 化学发光法：严格按照美国DPC公司生产的《白蛋白试剂盒》操作手册进行。

1.4.2 ELISA 法：严格按照北京科卫临床诊断试剂有限公司生产的《尿微量白蛋白定

量检测试剂盒》的操作手册进行。

1.4.3 测定分析：用上述两种方法对上述115份患者尿标本微量白蛋白浓度进行测量，分别在ELX—800酶标仪上和全自动化学发光分析仪上直接读取结果。

1．5 统计学检验：采用SPSS10.0统计软件，检测数据表示用x±s,组间数据比较用t检验，变量间的变化采用相关性分析。

2 结果

为了评价ELISA法测定尿微量白蛋白的准确性,我们采用双盲的方法与化学发光法进行比较.收集115例病人尿样分别使用ELISA方法和化学发光法进行测定, 化学发光法测定的平均值为10.39 mg/L,ELISA法测定的平均值为10.56mg/L，统计学线性回归分析显示相关系数r值为0.994。二者有较好的相关性.且P＞0.05,即可以认为用ELISA测定的尿微量蛋白结果与化学发光测定结果没有明显差异。

3 讨论

白蛋白是血浆白蛋白,由肝脏产生[3]，分子量为66KD，半径约为3.6nm，在血浆环境中带负电荷，不易通过肾小球基底膜的孔径屏障和电荷屏障，而原尿中的白蛋白在肾小管几乎全部被重吸收,所以每日排出量仅10～30mg，常规干化学定量测定尿蛋白为阴性,故临床习惯称正常尿中无蛋白[4]。当肾脏发生早期损害时，由于肾小球毛细管渗透性和血管壁成分的改变，白蛋白可通过肾小球基底膜渗透到尿液中，尿中白蛋白排泄明显高于正常，其浓度通常在20~200mg/L之间，于是形成了微量白蛋白尿[5]。通常用常规方法难以检出，而当病变发展到尿常规蛋白测定结果为阳性时，肾脏的损伤往往已达到不可恢复的阶段[6]。近年来许多研究表明尿微量白蛋白不仅是糖尿病肾病的预测指标，也是心血管疾病的独立危险因素[7]，所以检测尿微量白蛋白有重要的临床价值。本文分别用ELISA法和化学发光法测定尿微量白蛋白浓度，对其结果进行比较，并比较其优缺点，从而评价ELISA法的临床适用性。

微量白蛋白尿的临床应用广泛，微量白蛋白尿是反映肾脏疾病和损伤的一个非常灵敏的指标,在预示糖尿病、肾病方面已使用多年。近年有资料显示,微量白蛋白尿也是非糖尿病患者心血管疾病发病的一个危险因子,受到广泛重视。

目前，已出现多种检测尿中微量白蛋白的方法，如化学发光法、放射免疫法、试条半定量法、免疫比浊法等。因此，本文主要探讨ELISA法检测尿微量白蛋白的优缺点。化学发光法虽具有高灵敏度、高准确度、高精密度、宽线性、反应快速,影响因素少,结果准确等优点，但化学发光法的缺点是仪器、试剂成本高,给患者带来的经济负担相对较重。而ELISA法设备简单,易于开展,收费低廉，可用临床普查，还具有简便易行，不污染环境等优点。本文检测结果与化学发光法同样准确，差异无统计学意义（P＞0.05）,相关性良好（r=0.994）,所以 ELISA法测定尿微量白蛋白具有经济、实用的特点[8],因此ELISA法更适用于临床，应得到普遍推广。

【参考文献】

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［2］ Weir MR.Microalbuminuria in type2diabetics:an important，overlooked card iovascular risk factor［J］.JClin Hypertens (Greenwich),2004，6:134~141.

［3］ 陶玉滨,崔金凤,孟贺，等.尿微量白蛋白在高血压肾损伤早期诊断中的价值［J］.中国误诊学杂志,2006,6（1)：69~70.

［4］ 边善堂，张霞，赵占文.尿微量白蛋白测定在２型糖尿病的应用［J］.实用医技杂志，2006，13（6）：904~904.

［5］ 徐文媛，许卫东.尿微量白蛋白在2型糖尿病性肾病检测中的意义［J］.中国热带医学，2007，7（11）：2069.

［6］ 程苏琴，朱美财.尿微量白蛋白在糖尿病肾损伤早期诊断中的价值［J］.中华检验医学杂志，2006，28（7）：740~741.

［7］ Shang-ging L,Jian K, Cheng-jun L,et al.Differences in expression of retinal proteins between diabetic and normal rats［J］.Gastroenterology,2007,13(14):2118~2124.

［8］ 鲍利民,齐若梅.ELISA法检测尿微量白蛋白的临床应用与评价［J］.中国卫生检验杂志,2006,16(2)：227~228.

作者单位：

日期：2010年1月13日 - 来自[2008年第8卷第12期]栏目 化学发光免疫与放射免疫测定甲状腺激素的结果

【摘要】 目的 比较化学发光免疫(Chemiluminescence Immunoassay，CLIA)与放射免疫分析法(Radioimmunoassay, RIA)测定血清甲状腺激素的结果。 方法 选择2008年2～3月黄石市第二医院门诊健康体检者30名、甲状腺功能亢进（甲亢）病人43例、甲状腺功能减退（甲减）病人11例。分别采用CLIA与RIA法检测血清游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）、促甲状腺激素（TSH）。并对两法进行比较。结果 ①从总体而言，CLIA与RIA检测甲状腺激素相关性很好 （r>0.96）；②两法检测FT4有差异，RIA法检测结果高于CLIA法。结论 两种分析技术检测甲状腺激素都具有较高准确性。

【关键词】 化学发光免疫；放射免疫；甲状腺激素；相关性

Comparison of results of detection of thyroid hormoes with chemiluminescence immnoassay and raidioimmunoassay.

XIE Man-bing, LIU Jun-feng.

Huangshi Municipal Second People’s Hospital, Huangshi 435002, Hubei, P. R. China

Abstract：Objective To compare the serum concentrations of thyroid hormones determined by chemiluminescence immunoassay (CLIA) and Radioimmunoassay (RIA). Methods From February to March in 2008, 43 patients with hyperthyroidism and 11 patients with hypothyroidism and 30 health subjects were detected. The levels of serum free Triiodothyronine (FT3) and free Thyroxine (FT4) with thyroid-stimulating hormone (TSH) were measured by CLIA and RIA methods respectively. And the correlation of both methods was compared. Results Gener ally the levels of serum concentrations of FT3, FT4 and TSH were significantly correlated as detected by both methods and r=0.968, 0.973 and 0.997, respectively. On the other hand, the level of FT4 detected by RIA was higher than that by CLIA. Conclusion CLIA and RIA can both be used as the diagnostic tool for acccurate detection thyroid hormones.

Key words：Chemiluminescence immunoassay; Radioimmmunoassay; Thyroid hormone； Correlation

放射免疫技术是目前较成熟及稳定的一种检测手段，具有灵敏度高、特异性强、抗体和抗原易于碘化标记，应用范围宽等特点；但使用放射性元素会有污染物处理问题，损害操作人员的身体健康。1977年，Arakawa等基于放射免疫分析的基本原理，将酶的化学发光与免疫反应结合起来，发展了化学发光免疫分析方法［1］。它是将发光物质或酶标记在抗原或抗体上，免疫反应结束后，加入氧化剂或酶底物而发光，通过测量发光强度，根据标准曲线测定待测物的浓度。CLIA的主要优点是灵敏度高、线性范围宽、标记物的有效期长、无放射性危害、可实现全自动化等［2］。随着CLIA在临床的广泛应用，多数临床实验室将检测甲状腺激素的方法从RIA改为CLIA，其测定的正常参考值也随之改变。本文对我院2008年3～4月间采用CLIA法与RIA法检测甲状腺功能结果进行比较，现将结果报告如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

1.1.1 对照组

30名健康体检者，其中男性11名，女性19名，平均年龄(41.3±14.7)岁，年龄范围在14～68岁，所有受试者均无甲状腺疾病和其他自身免疫性疾病史，无甲状腺肿大及结节，其甲状腺各项功能检查均正常。

1.1.2 疾病组

经临床诊断和甲状腺功能检查，患有内分泌疾病患者54例，其中甲亢组43例；甲减组（包括亚甲减、慢性自身性甲状腺炎）11例。所有患者平均年龄为(40.8±15.1)岁，年龄范围在16～72岁。

1.2 仪器和方法

1.2.1 仪器

美国Beckman Access 2化学发光免疫分析仪（ID：504448）；合肥科大创新GC400γ放射免疫计数器。

1.2.2 试剂

RIA试剂由北方生物制品研究所提供，批号：200803，200804。其中高灵敏度TSH采用免疫放射（IRMA）法。CLIA试剂由Beckman提供，FT3试剂批号：718796，定标批号：789904；FT4试剂批号：719258，定标批号：721963；TSH试剂批号：718598，定标批号：718977。

1.3 方法

所有受试者清晨空腹坐姿抽取静脉血5ml，分离血清, 4℃保存待测。CLIA和RIA试剂的批内和批间CV［3,4］及正常参考值见表1。表1 两种方法的批内CV和批间CV及正常参考值方法批内（略）

1.4 统计学处理

采用SPSS for windows 11.5软件进行统计分析，正态分布数据以(x±s)表示，组间比较采用t检验，P<0.05表示有显著性差异；数据间比较采用配对t检验，Origin6.1进行相关性分析。

2 结果

2.1 两种方法检测甲状腺激素结果分析

表2 结果显示，不同项目采用CLIA和RIA方法检验结果有所差异。其中FT4更为明显，P值分别为0.001、0.014、0.000、0.000，说明两法检测FT4时具有显著性差异；而在甲亢组比较时，CLIA高灵敏度TSH与免疫放射法间也具有显著性差异(t=13.77，P=0.000)。表2 两种方法检测甲状腺激素结果分析（略）注：FT3/FT4单位：pmol/L；TSH单位：mIU/L

2.2 两种方法的相关性分析比较

从总体检测结果比较，FT3、FT4、TSH间两方法相关性非常好（P<0.0001），其相关性及线性方程Y=0.918X+0.857,r=0.968,P<0.0001;Y=0.863X+2.081,r=0.973,P<0.001;Y=1.01X-0.06,r=0.997,P<0.0001。

3 讨论

化学发光目前已广泛应用于生物体系样品检测，包括蛋白质、激素、药物及核酸等［5］。CLIA法具有比RIA和IRMA法更高的分析性能［6,7］，测定血清甲状腺激素对甲亢、甲减的诊断有较高的可靠性、真实性和临床价值。 本文对比检测结果表明，化学发光和放射免疫在检测甲状腺激素方面有高度的一致性和相关性。对总体而言，FT3和TSH二者的相关性为0.968和0.997；从不同分组可以看出，

两法同样表现出较高的相关性（r>0.874）。而FT4则显示两种方法间尽管也具有很高的相关性(r=0.973)，但其在甲减组显示出差异有统计学意义（P=0.014，r=0.673），RIA法检测FT4的结果高于CLIA，这可能与本文甲减病例数少有关，有待进一步观察。

全自动化学发光免疫系统除了有操作简单、快速和没有同位素污染优点以外，可以有效地消除样本的本底干扰和样本对光信号的散射，同时化学发光法试剂盒稳定性高，适宜大批量样品的检测，其高灵敏TSH对于临床甲亢的诊断比RIA法更具有准确性。同时，CLIA试剂有效期可达六月至一年，比RIA更具优越性。本文结果显示，CLIA与RIA两种分析技术同样准确可信，可互相补充,共同发展，均可为临床诊断提供准确可信的数据。

【参考文献】 ［1］Arakawa H，Maeda M, Tsuji A．Enzyme immunoassay of cortisol by cheniluminescence reaction of luminal pemxidase［J］．Bunseki Kagaku，1977，26：322～326.

［2］赵利霞，李振甲，魏彦林,等.化学发光免疫分析［J］.世界科技研究与发展,2004，26（4）：24～33.

［3］Xavier FA, Joan BC, Francesca C, et al. Internal quality control and ISO 15189［J］. Accred Qual Assur, 2007.

［4］International Union of Pure and Applied Chemistry, International Federation of Clinical Chemistry (2000) Properties and units in the clinical laboratory sciences: Part X. Properties and units in general clinical chemistry［J］. Pure Appl Chem, 2000，72：747～972.

［5］Wu AHB. A selected history and future of immunoassay development and applications in clinical chemistry［J］. Clinica Chimica Acta,2006，369(2)：119～124.

［6］Iervasi A， Zucchelli GC, Turchi S, et al. Analytical and clinical performance of an automated chemiluminescent immunoassay for direct renin measurement: comparison with PRA and aldosterone assays［J］. Immuno-analyse & Biologie spécialisée, 2005, 20：257～262.

［7］Zhang YX, Zhang ZJ, Yang F. A sensitive immunoassay for determination of hepatitis B surface antigen and antibody in human serum using capillary electrophoresis with chemiluminescence detection［J］. Journal of Chromatography B, 2007, 857：100～107.

作者单位：黄石市第二医院检验科,湖北 黄石 435002.

日期：2010年1月13日 - 来自[2008年第8卷第10期]栏目 化学发光免疫法与放射免疫法检测血清PSA的比较

【摘要】 目的 探讨化学发光免疫法（CLIA）较放射免疫法（RIA）的优越性。 方法 利用CLIA法和RIA法平行测定标准品、质控品及75例临床血清标本的前列腺特异抗原（PSA）含量及相关试验；进行线性、相关性、精密度、回收率实验结果分析评价。 结果 两种方法的

相关性良好（R=0.995，P> 0.O5），回收率均在95%以上，但在线性试验中，CLIA法优越于RIA法。 结论 CLIA法在方法学上对临床微量物质的检测是令人满意的，但是其检测费用高。

【关键词】 化学发光免疫法； 放射免疫法 ；前列腺特异抗原

Comparative observation on the detection of PSA by chemoilluniscence and radioimmunoassay.

SUN Zhen-ya, ZHENG Ding-rong, YANG Qing-xun, et al.

（Baoan District Xixiang People's Hospital of Shenzhen City, Shenzhen 518102, Guangdong, P. R. China）

多年来，放射免疫法（ RIA）是临床检测微量物质的重要手段，近年来，化学发光免疫法（CLIA）顺应了时代的发展要求在标记免疫测定技术上居领先地位［1］。为进一步了解化学发光免疫法的特点，本文应用CLIA与RIA对比检测75份临床血清标本的PSA含量及相关试验对数据进行统计分析和比较，现报告如下。

1 材料和方法

1.1 标本来源 随机抽取75份临床送检血清标本，包括正常和异常，检测结果的范围涵盖了 PSA医学决定水平，异常标本中超过仪器检测范围的结果不予统计。

1.2 仪器与试剂 CLIA法采用美国Beckman公司生产的ACCESS化学发光分析仪；RIA法采用γ-计数仪为上海核福光电仪器有限公司的SN-682型产品；离心采用机北京TOMY SEIKO公司生产的RD-20Ⅳ型低温离心机分离沉淀。试剂:（1） CLIA法所用试剂为美国Beckman公司生产的原装试剂；RIA法所用试剂使用上海原子核所提供的一步直接法PSA放免试剂盒。（2）定值血清由美国Beckman公司提供，生产批号（PSA:107407）， PSA试剂盒有S0、S1、S2、S3、S4、S5六个标准系列浓度。

1.3 方法与统计 按仪器操作手册及实验室相关要求做线性、相关性、回收率、精密度测试。采用SPSS 13.0 for Woindows 软件包处理获得试验数据。

2 结果

2.1 线性实验将标准液按不同的浓度稀释后做线性实验。结果显示RIA法和CLIA法分别在0.008～150ng/ml和1～100ng/ml范围内呈良好的线性关系。

2.2 对比实验用上述两法同时对受检血清标本进行定量分析。结果表明，两种方法无显著差异（P>0.05），相关系数r=0.995，直线回归方程Y=-1.356+0.995X，提示两法呈良好相关性。

2.3 回收实验取不同浓度的混合血清（PSA浓度为2.9，15.5，54.1ng/ml），分别加入不同浓度的定值血清，用RIA法和CLIA法测得的回收率分别为92.2%～106.4%和94.0%～105.5%平均回收率为95.3%和96.3%。

2.4 精密度试验 用上述两法对低、中、高值质控品分别进行精密试验，每份样品连续测定20次，计算x、s，求批内CV值。每日测定1次，连续测定20d，计算x、s，求批间CV值。结果表明，CLIA的重复性较RIA更好。见表1。

表1 两种方法的精密度对比（略）

3 讨论

近年来，非放射性标记免疫分析技术的研究和应用发展甚速，尤以CLIA和时间分辨荧光免疫分析，已实现检测程序和数据处理完全自动化，取代人工操作，是标记免疫分析发展史上新的里程碑［2］。PSA是一种由前列腺上皮细胞分泌、分子量为33000～34000的糖蛋白，由234个氨基酸组成，只有前列腺组织能产生这种抗原，女性血清中无PSA，男性可测到低浓度的PSA。本文选用PSA项目作为两种方法比较的参照物，是因为它们检测时所用抗体均为单克隆抗体，两法所确定的参考值较相近，因此增加了两法可比性。本研究结果表明，CLIA法与RIA法检测PSA差异无显著性（P>0.05），且相关性好（r=0.995），并显示出化学发光免疫法在敏感性、特异性、准确性、精密度、抗干扰等方面均优于RIA法。原因在于CLIA法检测PSA采用的是夹心法，并以磁性微粒子为载体，最大限度地扩大包被面积，使反应尽可能完全；而放射免疫法采用的是竞争法，被测物不能全部参与反应，最大结合时一般在50%左右；全自动化学发光酶免疫检测仪在检测过程中采用全自动精确的加样系统、恒温系统、试剂冷藏系统、超声波清洗、磁场分离系统和中心数据处理系统等，尽可能的减少实验误差，其试剂盒采用多层覆膜设计，加样后自动封闭，保证了试剂的质量；RIA法因手工加样、温度控制、分离程度不一标记的同位素不稳定，放射性标记物的不稳定性导致等因素，增大了系统误差和随机误差，影响了检测的结果［3］。CLIA法所用试剂是以碱性磷酸酶为标记物，发光底物是种金刚基二螺［4，4］二氧已烷的磷酸酯（AMPPD），能持续发光且发光强度稳定；试剂易保存且有效期长，克服了放射免疫法试剂受同位素半衰期的影响，有效期短及同位素放射性污染等不足，具有安全无毒的优点［4］。另外，CLIA法能直接对血清标本进行分析，且随到随测，短时间内可出检测报告，较RIA法大大缩短了时间，充分满足临床诊断的需要，尤其对需长期检测血清PSA水平的患者更具优势。在我国现实经济条件下，对RIA要肯定其临床应用价值，加之成本较低方法简易可靠，仍然是临床常规检测手段之一，因此，这两种方法在一定时期内，将互相补充，共同发展。

【参考文献】 ［1］ 戴宏华.化学发光免疫法与放射免疫法检测FT4的比较［J］. 齐齐哈尔医学院学报，2005，26（1）：20～21.

［2］ 刘秀琴，何军芳，刘长征.化学发光免疫法和放射免疫法对甲状腺激素检测的比较分析［J］.标记免疫分析与临床，1999，6（3）：170～172.

［3］ 张东矗， 王薇薇.化学发光酶免疫法与放射免疫法测定血清睾酮的方法学评价［J］.检验医学，2004，19（1）：32～35.

［4］ 罗炜，王慧.化学发光免疫法与放射免疫法检测血清中AFP的比较［J］.上海医学检验杂志，2000，15（3）：149～150.

作者单位：深圳市宝安区西乡人民医院，广东 深圳 518102

日期：2010年1月13日 - 来自[2007年第7卷第9期]栏目 溶血对化学发光法检测AFP、CEA结果影响的探讨

[摘 要] 目的: 探讨标本溶血对化学发光法检测甲胎蛋白(A FP)、癌胚抗原(CEA ) 的影响。方法: 测定非溶血标

本及人工方法造成的中度、重度溶血标本的A FP、CEA 结果, 观察结果受溶血影响的程度。结果: 中度溶血对化学发光法测A FP 无影响(P > 0. 05) , 对CEA 有影响(P < 0. 05) , 重度溶血标本A FP、CEA 结果与非溶血标本比较差异有非常显著性(P < 0. 01)。结论: 中度溶血标本对化学发光法测CEA 有影响, 重度溶血对A FP、CEA 结果均有显著影响,建议工作中采用新鲜无溶血标本。

[关键词] 溶血; 化学发光;A FP; CEA

溶血对化学发光法检测AFP、CEA 结果影响的探讨(PDF全文)

日期：2009年2月21日 - 来自[检验医学]栏目

肿瘤坏死因子β诱导淋巴细胞化学发光及其增殖的研究 肿瘤坏死因子β诱导淋巴细胞化学发光及其增殖的研究

中国免疫学杂志 1999年第12期第15卷 肿瘤免疫学

作者：俞越汉 丁鸣 马志章 王君晖 钱凯先 丁仁瑞

单位：浙江大学生命科学院免疫工程实验室，杭州310012

关键词：重组人肿瘤坏死因子β；淋巴细胞；化学发光；顺磁共振

摘 要 目的:探讨活性氧参与rhTNFβ诱导淋巴细胞活化作用的机理。方法：采用化学发光(CL)和顺磁共振法(ESR)研究rhTNFβ诱导人外周血淋巴细胞产生活性氧(OR)的动态变化及其增殖作用。结果：①用10～2 000 U/ml的rhTNFβ处理1×106 ml-1淋巴细胞均可诱发Ly-CL,其中以100 U/ml rhTNFβ处理18～20 min的CL峰值(RLI)为最高，所诱发的OR主要为OH·；②以15～62 U/ml的rhTNFβ处理淋巴细胞72 h,可明显地产生活化效应，这与TNFβ诱发淋巴细胞早期产生Ly-CL的强度相一致。结论：适当剂量的rhTNFβ可诱导人外周血淋巴细胞产生OR并促进其增殖。

中国图书分类号 R392.12

Study on the chemiluminescence and proliferation of

lymphocyte induced by rhTNFβ

YU Yue-Han, DING Ming, MA Zhi-Zhang et al.

College of Life Science, Hangzhou University,Hangzhou 310012

Abstract Objective:Study on the mechanism of lymphocyte's activation induced by rhTNFβ with the participation of active oxygen redicals (OR).Methods：It was using chemiluminescence(CL) and electron spin resonance(ESR) techniques. Results：1.The lymphocytes(1×106 ml-1)treated with 10～2 000 U/ml rhTNFβ can induce CL.The highest peak value of CL(RLI)was obtained at 100 U/ml rhTNFβ for 18～20 min.The induced OR was mainly OH·2.After the lymphocyte was treated with 15～62 U/ml rhTNFβ for 72 h,the proliferation effect was obviously observed.This effect was in agree with the CL intensity produced earlier.Conclusion：A suitable dose of rhTNFβ can induce OR production of lymphocyte and promote its proliferation.

Key words rhTNFβ Lymphocyte Chemiluminescence Electron spin resonance(ESR)

肿瘤坏死因子β(Tumor Necrosis Factorβ,TNFβ)又称淋巴毒素(Lymphotoxin,LT)是由活化淋巴细胞所产生［1］ ,它具有抗肿瘤、抗病毒、诱导成纤维细胞、B细胞和胸腺细胞的增殖、分化以及调节免疫功能等广泛的生物学效应［2］ 。而淋巴细胞化学发光(Lymphocyte Chemiluminescence,Ly-CL)则为淋巴细胞活化早期事件之一［3］ 。据此，本文采用淋巴细胞化学发光(Ly-CL)和顺磁共振法(Electron Spin Resonance,ESR)研究TNFβ诱导人外周淋巴细胞产生活性氧自由基(Oxygen Radicals,OR)释放水平的动态变化及其与淋巴细胞增殖的相关性，为探讨活性氧参与TNFβ诱导淋巴细胞活化的作用机理提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 外周血淋巴细胞制备 按常规方法进行，细胞存活率＞97％，粒细胞比例＜3％。

1.2 药品和试剂 RPMI-1640(Gibco)按常规配制成完全1640，2-ME(Fluka),DMPO(Sigma)，Luminol(Sigma)按司传平方法配置工作液［3］，MTT(Sigma),黄嘌呤(Xanthine,X，Sigma),黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase,XOD，Sigma)，rhTNFβ(由本实验室制备，电泳纯,细胞毒比活性为5×106 U/mG·P)［4］，其余试剂均为国产。

1.3 淋巴细胞化学发光(LY-CL)的测定

1.3.1 仪器 BPCL超微弱智能发光测量仪(中科院生物物理所)。测量参数：测量时间10 s,标准光源计数1 000 s-1，测量电压1 100 V。测定结果由发光仪10 s计数自动记录，发光值(Relative Light Indensity, RLI)以加TNFβ后出现的Ly-CL值(RLI)的最高峰为峰值，达到峰值的时间为峰时，以对照组的RLI为本底，各处理组的峰值减去本底为纯峰值，并连续测定发光的动力学。

1.3.2 TNFβ诱导淋巴细胞化学发光的检测 取1.0×106 ml-1淋巴细胞或不同密度的

淋巴细胞1 ml，加luminol工作液0.2 ml，测其本底后，再分别加入不同浓度的TNFβ或在不同密度的淋巴细胞中加入同一浓度(100 U/ml)TNFβ，并即刻测定其发光值。以此研究不同浓度的TNFβ对同一密度淋巴细胞以及同一浓度的TNFβ对不同密度淋巴细胞诱发Ly-CL(RLI)的影响。

1.4 顺磁共振法检测活性氧［5］

1.4.1 FeSO4 -H2O-DMPO捕捉羟自由基的体系(Fenton反应体系) 依次加入3%H2O2 1 200 μl， 0.1 mmol/L FeSO4 600 μl，0.2 mol/L DMPO 200 μl，混匀后2 min，用石英毛细管吸少量溶液后密封，置ESR谐振室测试。

1.4.2 黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶-DMPO捕捉超氧阴离子的体系 取0.3 mol/L黄嘌呤1 200 μl,0.1 mmol/L EDTA 50 μl，0.2 mol/L DMPO 200 μl和1 U/ml黄嘌呤氧化酶500 μl混匀后2 min，取样置ESR谐振室测试。

1.5 TNFβ诱导人外周淋巴细胞的增殖作用 用1640完全培养液调整淋巴细胞，使其在96孔板中每孔细胞密度为1×105 /100 μl和不同浓度的TNFβ/100 μl，置37℃，5％CO2 、饱和湿度条件下培养72 h，实验结束前加10 μl(5 mg/ml)MTT，继续培养4 h，加DMSO 150 μl/孔置振荡器上振荡5 min，用酶标仪测每孔OD570值。

2 结果

2.1 TNFβ诱导淋巴细胞化学发光的动态变化 根据检测,淋巴细胞自身的化学发光值为2 085 RLI。当加入TNFβ后，即可诱导发出较强的化学发光(CL)，不同浓度TNFβ所诱发的Ly-CL及其动态变化有一定差异(图1)。经50 min的间断测定表明，各不同浓度组的峰值出现于18～20 min之间，随后即逐渐衰减，至50 min时已趋平稳。比较各不同浓度组Ly-CL的峰值则以100U/ml组为最高,达到22 997 RLI。值得注意的是500～2 000 U/ml TNFβ的高剂量组，其诱发的RLI，均随剂量的增高而下降。

图1 不同浓度TNFβ诱导人外周血淋巴细胞(1.0×106 ml-1)化学发光的动态变化

Fig.1 The kinetic curves of chemiluminescence indentsity from human PBEC stimulated by TNFβ

2.2 淋巴细胞密度与TNFβ诱导Ly-CL的相关性

表1表明，TNFβ诱导Ly-CL的强度与细胞密度相关。当TNFβ剂量为100 U/ml，淋巴细胞密度为0.2×106～2.0×106 ml-1时，RLI与细胞密度呈线性关系。但随细胞量的进一步提高(＞2.0×106 ml-1)则不再呈现线性关系。

表1 TNFβ(100 U/ml)刺激不同密度淋巴细胞的发光效应

Tab.1 Influence of different contents of lymphocytes on the Chemiluminescence stimulated by TNFβ(100 U/ml)

Contention of Background CL peak value Peak-time Lymphocyte(×106 ml-1) (RLI) (RLI) (Min) 0.1 434±26 10 349±1 1451) 7 0.5 1 210±84 4 4740±1 4461) 9 1.0 2 085±151 8 1950±3 6301) 11 2.0 3 930±243 12 5483±4 6931) 12 5.0 5 321±412 15 4940±9 3801) 14

Note: 1)P＜0.01,compared with control TNFβ: 100 U/ml

2.3 顺磁共振检测的初步结果 分别在FeSO4-H2O2 -DMPO捕捉OH· 和X-XOD- DMPO捕捉

2.4 TNFβ诱导淋巴细胞的增殖 TNFβ的浓度在15～62 U/ml范围内，其促进外周血淋巴细胞的增殖效应随着TNFβ浓度的增高而增强；但当浓度进一步增高(＞62 U/ml)，这种促增殖效应逐渐减弱，而当浓度达到 1000U/ml时，则表现为抑制作用(图2)。

图2 TNFβ对外周血淋巴细胞的增殖影响

Fig.2 Effect of TNFβ on human peripheral blood lymphocytes proliferation

3 讨论

淋巴细胞化学发光(Ly-CL)是淋巴细胞活化的一种表现［6,7］ ，其本质是淋巴细胞受抗原或有丝分裂原刺激后生成活性氧的反应［8,9］ 。我们的研究显示TNFβ可诱导人外周淋巴细胞产生化学发光，其强度(峰值)在10～100 U/ml的TNFβ诱导下与其浓度呈正相关，但在500～2 000 U/ml时，则随TNFβ的浓度增高而下降。值得注意的是，TNFβ诱导淋巴细胞化学发光的峰时比ConA/PHA诱导为长，在18～20 min左右，而后者仅2～3 min。当TNFβ的浓度不变，Ly-CL强度与淋巴细胞密度呈线性关系，但当密度＞2.0×106 ml-1时，则Ly-CL无明显增加。对此现象值得进一步作比较研究。

以DMPO为自旋捕捉剂对经TNFβ诱导的淋巴细胞样品进行检测，获得明显的自由基信号，4条主要吸收峰与DMPO捕捉的标准OH· ESR波谱相一致，说明本实验DMPO捕捉到的是淋巴细胞所释放的OH·。这一结果提示，TNFβ激发淋巴细胞产生化学发光的本质是释放羟自由基。它参与淋巴细胞的活化，并认为OR的生成是淋巴细胞活化的一种阳性信号［10］ 。

研究不同浓度TNFβ对淋巴细胞的诱导增殖作用，发现在15～62 U/ml范围时，可有效地活化淋巴细胞，这与淋巴细胞早期诱发Ly-CL的强度相一致。但当浓度＞62 U/ml以上，

淋巴细胞的增殖即渐趋降低，这与100 U/ml浓度的TNFβ诱发Ly-CL的最高峰值不完全一致；而当浓度＞500 U/ml则表现出抑制效应。就TNFβ而论,对淋巴细胞这种调节作用将为TNFβ应用于临床提供了实验依据，对其作用机理尚待进一步阐明。

资金项目：国家自然科学基金资助项目(批准号：39670815)，浙江省自然科学基金资助项目(批准号：397050)

作者简介：俞越汉，男，36岁，硕士；马志章，女，57岁，教授，主要从事肿瘤免疫研究

参考文献

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10 Fidelus R K. The generation of oxygen radicals: A positive signal for lymphocyte activation. Cell Immunol,1988;113:175

第二节 化学发光底物 在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物称为化学发光剂或发光底物。在发光免疫技术中常用的化学发光底物有以下几类。 1．氨基苯二酰肼类主要是鲁米诺及异鲁米诺衍生物，是最常用的一类化学发光剂。鲁米诺（luminol，5＇-氨基-2，3-二氢-1，4-酞嗪二酮）的分子结构及化学反应式如下：

鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物，也可用作过氧化物酶的底物。异鲁米诺衍生物ASEI和ABMI等也是常用的标记物。 2．吖啶酯（acridiniumester，AE）类这类发光剂不需催化剂的存在，在有过氧化氢的稀碱溶液中即能发光。反应式如下：

图18-1 电化学发光原理

上式反应迅速，在1～5s内即可完成；具有背景低、信比高的优点，其检测极限可达5×10-9mol，发光量与AE浓度呈良好的线性反应，是一类的标记物。

3．电化学发光（electrochemiluminescence，ECL）反应在电极表面进行。发光底物为三联吡啶钌[Ru(bpy)32+]，另一反应物为三丙胺（TPA）。在阳电极表面，以上两化学物质可同时失去电子发生氧化反应（图18-1）。二价的Ru(bpy)32+被氧化成三价Ru(bpy)33+，TPA被氧化成阳离子自由基TPA+●，后者失去一个质子（H+），成为自由基TPA●，这是一个强还原剂，可将一个电子递给三价的Ru(bpy)32+*，而TPA自身被氧化成TPA氧化产物。激发态的Ru(bpy)32+*在衰减时发射一个波长为620nm的光子，重新生成基态的Ru(bpy)32+。这一过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，使信号得以增强。

日期：2006年1月16日 - 来自[免疫学和免疫学检验]栏目

磁微粒子化学发光法测定AFP、CEA的应用

【摘要】 目的 研究磁微粒子化学发光酶免疫法检测的可靠性及方法学评价。 方法 利用磁微粒子化学发光法检测血清AFP、CEA，并进行精密度、灵敏度、特异性、回收率方面的探讨。 结果 化学发光法测定AFP的线性范围0.30～1380μg/L，CEA的线性范围0.51～1067μg/L。测定AFP的批内精密度CV值为1.16%～3.53%，批间为1.49%～4.67%;CEA的批内精密度CV值为0.87%～4.47%，批间为1.92%～4.71%。AFP的最低检测限度0.30μg/L;CEA的最低检测限度0.51μg/L。AFP的回收率97.7%～99.0%;CEA的回收率98.4%～101.65%。黄疸、脂血、溶血对AFP、CEA的测定无明显影响。 结论 磁微粒子化学发光酶免疫法在病人结果可报告范围宽、精密度好、灵敏度高、特异性高、抗干扰能力强。

近十年来通过不断改进和发展，使化学发光免疫分析成为非放射性标记免疫分析中最有前途的方法之一。测定时间短，无放射污染等特点，广泛应用在临床和科研 ［1］ 。甲胎蛋白（AFP）和癌胚抗原（CEA）是最常用的肿瘤标志物之一。它们的测定有助于肿瘤病人的诊断、治疗及术后疗效观察。BECKMAN COULTER公司生产的ACCESS型免疫分析仪，即全自动微粒子化学发光免疫分析系统。我们用此法对血清中的AFP和CEA的测定，作了精密度、分析灵敏度、回收试验及干扰试验等实验，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 仪器 美国BECKMAN COULTER公司生产的ACCESS型全自动化学发光免疫分析仪。

1.2 试剂 AFP和CEA试剂盒由BECKMAN COULTER公司提供配套试剂。

1.3 方法 按仪器操作手册，用配套试剂盒测定定值、样品。数值在标定值允许的范围内，继续做精密度、灵敏度、回收试验和干扰试验等相关实验。 2 结果

2.1 精密度 采取批内和批间差异来确定。分别取AFP和CEA高、中、低浓度各三份混合血清标本，其中一半重复测定20次，计算均值、方差，及批内CV值。另外一半分成20份，装入塑料离心管置于-20℃冰箱，每天1次连续测定20天，计算均值、方差及批间CV值。结果见表1。

表1 AFP和CEA批内、批间变异值（略）

2.2 分析灵敏度 分别对AFP和CEA空白零标准作批内20次检测，分别记录发光强度并作统计，再计算检测低限（LLD） ［2］ 。公式:LLD=均值BLK+2SBLK。结果AFP低限为0.30μg/L，CEA为0.51μg/L。

2.3 回收试验 取不同浓度的混合血清（AFP为4.34、23.85、138.21;CEA为1.89、15.23、58.65）分别加入不同浓度定值血清的AFP和CEA。分别测定AFP和CEA的含量，用公式:（测定值-混合血清值）/定值血清值×100%计算回收率，结果AFP的低、中、高标本平均回收率分别为97.7%、98.5%、99.0%。CEA的低、中、高平均回收率分别为101.6%、98.4%、99.5%。

2.4 干扰试验 （1）黄疸的影响，在不同程度的黄疸血清中加入AFP、CEA标准液，观察其对测定结果的影响。结果在胆红质浓度高达168μmol/L情况下，对化学发光法测定AFP、CEA无明显影响。（2）溶血的影响，在不同浓度的血红蛋白5g/L、10g/L、20g/L、4

0g/L中，分别加入AFP、CEA标准液，观察测定结果，不受影响。（3）乳糜的影响，通过对乳糜血清脱脂前后AFP、CEA测定，观察脂血对化学发光法测定AFP、CEA的影响。结果在甘油三酯浓度高达29.05mmol/L情况下，对化学发光法测定无明显影响。 2.5 线性试验 将AFP测定值在1000～2000ng/L范围内五份血清混合，反复测定4次，取其均值作为原倍血清测定值即理论值。将此混合血清做5点倍比稀释，随机排列测 定顺序，各复测4次，以原倍血清测定值为标准按稀释倍数算得理论值，并进行回归分析。Y=0.0612X+0.9999R=0.9999，AFP:0.30～1380μg/L范围内线性良好。同理求出CEA的线性回归方程Y=1.8290X+0.9952CEA:0.51～1067μg/L范围内线性良好。 3 讨论 本方法研究AFP、CEA检测结果表明，ACCESS型全自动微粒子化学发光免役分析系统采用经典的免役学原理，具有高度特异性，不受黄疸、脂血、溶血等因素影响。且以磁性微粒子为载体，最大限度扩大包被面积，以碱性磷酸酶标记抗原、抗体，采用最灵敏的发光底物AMPP，磁性微粒子包被技术的应用大大提高检测的灵敏度，使化学发光法的线性范围更宽 ［3］ ;光电倍增管接受发光强度信号（发光稳定后，记录11次/s，取9次均值为结果）;超声波清洁系统，防止交叉污染（〈1PPM），使得检测结果更为稳定可靠。 ACCESS型全自动微粒子化学发光法试剂有效期相对较长，具有稳定和无毒的优点，随到随做，快速方便。彻底解决了放射免疫检测的污染问题以及方法烦琐。并且在不断开发新的灵敏、快速、简便、测定线性范围宽、应用范围广的全自动仪器分析试剂盒，将进一步推广化学发光免疫分析在临床和科研中广泛应用。 已加入样品血清或血浆的反应杯，应及时检测，最好在2～4h内测完，因为常温放置时间过长，水分蒸发导致检测结果偏高5%～30%，如果不能及时测定，请把标本转移到有紧密塞子的贮存管中。并确认转移的标本不含纤维蛋白或有形细胞成分;对于没有使用分离胶的血浆，应避免把紧贴于红细胞上方的白细胞/血小板层中的有形成分转移到贮存管中，否则影响检测结果准确性。当AFP>1380μg/L;CEA>1067μg/L时，仪器只报告大于多少，超出线性范围，样品需稀释后再测定，以保证测定结果的可靠性。 参考文献

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2 Diamadis E P，Yu H，Melegos DN.Ultrasensitive prostrate-specific antigen assay and their clinical appli-cation.Clin Chen，1995，42（6）:853.

3 王自正.现代医学标记免疫学.北京:人民军医出版社，2000，17-26. 作者单位:200431上海仁和医院检验科

日期：2005年6月14日 - 来自[检验与临床]栏目

流动注射化学发光测定硫酸奈替米星

【摘要】 目的 建立简便、快速、灵敏的新方法，用以测定硫酸奈替米星。方法 以硫酸奈替米星对鲁米诺-H 2 O 2 化学发光反应的催化作用为基础，结合流动注射技术快速测定硫酸奈替米星。结果 线性范围:0.1～10.0ng/ml;检测限:0.03ng/ml（3σ），RSD<2.5%（n=5）。结论 该方法选择性好，灵敏度高，可用标准加入法，分别测定尿样和血样中硫酸奈替米星的含量。

关键词 硫酸奈替米星 化学发光 流动注射 尿样 血样

Determination of netilmicin sulfate by flow injection combined with chemiluminescence

Yue Qiaoli，Song Zhenghua

Department of Chemistry，Northwest University，710069.

【Abstract】 Objective To establish a new and sensitive method for the rapid determination of netilmicin sulˉfate.Methods Netilmicin sulfate was determined by chemiluminescence（CL）combined with flow injection（FI）technology，which was based on the enhanced effect of netilmicin sulfate on the CL reaction between luminol and H 2 O 2 .Results The increment of the CL intensity was proportional with the

concentration of netilmicin sulfate in the linear range from0.1to10.0ng/ml（r=0.9991），and the detection limit was0.03ng/ml（3σ）.At a flow rate of2.0ml/min，the complete determination of netilmicin sulfate，including sampling and washing，could be accomplished within0.5min with the relative standard deviation（RSD）of no more than2.5%.Conclusion The FI-CL method showed good sensitivity and selectivity giving a throughput of120h -1 ，and the validity of the proposed method has been proved by means of the recovery test of the standard addition of netilmicin sulfate in human urine and serum with a satisfactory result. Key words netilmicin sulfate chemiluminescence flow injection urine serum

硫酸奈替米星为白色或类白色的粉末，为半合成氨基糖苷类抗生素，适于治疗敏感革兰阴性杆菌所致严重感染，如:败血症、中枢神经系统感染、尿路生殖系统感染、呼吸道感染等 ［1］ 。测定方法有:微生物分析法 ［2，3］ 、液相色谱法 ［4～7］等。然而，采用化学发光测定硫酸奈替米星的方法至今未见报道。本文以硫酸奈替米星对鲁米诺-H 2 O 2 体系的增敏作用为基础，建立了灵敏、快速测定纳克水平硫酸奈替米星的新方法。 1 实验部分

1.1 试剂 硫酸奈替米星（1.84mg/ml），陕西省药检所提供。H 2 O 2 （30.0%）稀释到0.1M为储备液，鲁米诺储备液1.0×10 -3 M，所用试剂均为分析纯，高纯水用Milli-Q Plus装置制造。

1.2 实验装置与操作步骤 FI-CL流通体系装置如图1所示。蠕动泵以2.0ml/min流速输送各管路溶液。100μl鲁米诺-H 2 O 2 混合液由六通阀注入再与样品进入混合管，然后，在化学发光池中与NaOH相汇，产生光信号。发光强度用R-456光电倍增管检测，最大发光信号由XWT-206型记录仪记录。发光信号的增加值ΔI与硫酸奈替米星浓度成正比。 2 结果与讨论

2.1 氧化剂的选择 本实验分别对KMnO 4 、H 2 O 2 、K 3 Fe（CN） 6 、K 2 Cr 2 O 7 和KIO 4 等氧化剂在相同条件下进行测试，结果表明:当硫酸奈替米星存在时鲁米诺-H 2 O 2 体系ΔI值最大。所以选H 2 O 2 为合适的氧化剂。

2.2 鲁米诺、H 2 O 2 和NaOH浓度对化学发光强度的影响 分别对不同浓度的鲁米诺、H 2 O 2 和NaOH对发光强度的影响进行测定，得出:鲁米诺、H 2 O 2 和NaOH的浓度为5.0×10 -7 、5.0×10 -5 和0.025M时发光值最大。

2.3 流速和混合管长度对化学发光强度的影响 为了提高信噪比，本文对试剂流速也进行了测试。经实验分析:流速在2.0ml/min时获得信号效果最好，也最节省溶液。混合管长度从1.0cm到8.0cm进行试验，得出5.0cm时化学发光信号最强。

2.4 线性范围 在优化实验条件下，对一系列硫酸奈替米星标准溶液进行试验，在0.1～10ng/ml范围内，硫酸奈替米星的浓度与化学发光强度的增加值存在良好的线性关系，线性方程为ΔI CL =26.609Cx+55.41，线性回归系数r=0.9991，检出限为0.03ng/ml（3σ），对0.1、1.0和10.0ng/ml的标准溶液分别进行5次平行测定，对应的RSD分别为2.40%、1.43%、1.03%。

2.5 干扰实验 1.0ng/ml硫酸奈替米星存在时，用标准加入法对外来物质进行测定（引起的误差小于5.0%）。实验结果表明:Co 2+ 、Fe 3+ 、Fe 2+ 、Mn 2+ 等过度金属离子;草酸、尿素、血色素、淀粉、柠檬酸等有机物不干扰测定。

2.6 样品测定 尿液来自3位志愿者，血清由西北大学校 医院提供。分别取1.0、5.0、10.0、30.0μg和1.0、3.0、7.0、10.0μg的硫酸奈替米星标准溶液，依次加入1.0ml尿液和血清中，适当稀释后进行测定，结果见表1。图1 流动注射-化学发光测定硫酸奈替米星示意图（略） 鲁米诺:5.0×10 -6 M;H 2 O 2 :5×10 -5 M;NaOH:0.025M;流速:2.0ml/min，负高压:-680V 表1 人体尿液和血清中硫酸奈替米星的测定结果 （略） 参考文献

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基金项目:陕西省自然科学基金（批准号:2003B15） 作者单位:710069陕西西安西北大学化学系（ 博士生导师）

日期：2005年5月27日 - 来自[论著]栏目

西安君达化学发光诊断试剂研究取得进展

我国化学发光诊断试剂研究日前取得重大进展。西安君达生物科技有限公司研制的化学发光诊断试剂盒在北京大学人民医院、中日友好医院、中国人民解放军３０１医院经过万余次临床试验，总符合率超过９７％，质量性能达到国际先进水平

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/54w7.html