电泳知识总结

1.电泳是指带电粒子在电场的作用下发生定向迁移（与其本身所带电荷相反的电极移动）的现象。利用电泳现象将多组分物质分离、分析的技术叫做电泳技术。

2.生物大分子在电场中移动的速度由什么决定？

答：样品性质方面：粒子大小，形状，带电荷多少，带电性质；电泳条件方面：介质阻力，电场强度，溶液黏度。 3.

粒子的移动速度(泳动速度V)与电场强度(E)、粒子所带电荷量(Q)成正比，而与粒子半径(r)及溶液粘度(η)成反比。非球形分子（如线状DNA）在电泳过程中受到更大的阻力，即粒子的泳动速度与粒子形状有关。

4.迁移率与下列（ D )因素无关？

A.电荷数量 B.粒子大小 C.溶液黏度 D.电场强度 电泳迁移率（/泳动度/淌度）μ μ = V/E = Q/6πrη

【影响迁移率的因素：

1. 待分离大分子的性质 ：所带的电荷、分子大小和形状，分子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快；

2. 缓冲液pH和离子强度：pH值距pI愈远，Q越大，V越大 ；pH过高或过低?蛋白变性?缓冲液；缓冲液通常要保持一定的离子强度；离子强度过低或过高的不利影响；

3. 电场强度：E高，带电颗粒泳动快。过高，产生焦耳热，样品和Buffer扩散增加，条带增宽；蛋白变性。过低，电泳时间增加，扩散。当需要增大电场强度以缩短电泳时间时，需附有冷却装置；

4. 电渗 ：在 电场中液体对固体支持物的相对移动；当电渗方向与电泳方向一致时，会加快颗粒泳动速度，反之，当两者方向相反时，会减慢颗粒泳动速度；

5. 支持介质：筛孔越小，则颗粒在移动的过程中所受到的阻力也就越大；介质的纯度影响聚焦效果；介质的非特异性吸附会增大电渗。】

5.等电点的定义？蛋白质在等电点时有哪些特点？

答：当溶液的pH为一定数值时，其中的蛋白质正负电荷相等，即净电荷为零，此时的pH值就是该蛋白质等电点pI。蛋白质在等电点时的溶解度最小。

6.下列不是区带电泳的是（ C ）

A.纸电泳 B.醋酸纤维素薄膜电泳 C. 等电聚焦电泳 D.聚丙烯酰胺凝胶电泳

7.等电聚焦与等速电泳的差别？ 答：区带窄，分辨率高。

自由界面电泳：部分分离

8.电渗现象：外加电场作用下，与固体支持物接触的液体层发生移动的现象。

电渗流：电渗现象中液体的整体流动。是毛细管电泳分离的主要驱动力，是毛细管中的溶剂因轴向直流电场作用发生的定向流动。其大小直接影响分析结果的精确度，准确度。

9.（凝胶电泳）为什么要用支持介质？支持介质应具备哪些特性？

答：抗对流；抗扩散。物理化学性质稳定；化学惰性——不干扰大分子的电泳过程；均匀，电内渗小，结果重复性好。

10.两大类支持介质薄膜类和凝胶类的特点？

答：薄膜类化学惰性好，能将对流减到最小；分离主要原理：生物大分子的电荷密度。凝胶类高粘度和摩擦阻力?对流和扩散都小；具有分子筛作用。分离主要原理：电荷密度+分子大小。

11. 在聚丙烯酰胺凝胶方法中，引发剂和加速剂的作用？

答：引发剂：提供原始自由基，通过自由基传递，使Acr成为自由基，启动聚合反应。 加速剂：加快引发剂释放自由基的速度。Bis是交联剂。

12.决定PAG特性的主要因素：单体和交联剂的总浓度；单体和交联剂的比例。

凝胶总浓度一定时，Bis的含量影响凝胶孔径。PAG的分子筛效应取决于凝胶孔径与样品分子大小接近的程度。选择合适的凝胶浓度，完成不同的分离任务。 a:b<10 凝胶脆、硬，呈乳白状； a:b>100 凝胶呈糊状；

a:b≈30 凝胶富有弹性，且完全透明； a<2%和b<0.5% 凝胶不可能聚合。

什么是分子筛效应？

分子量或分子大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径分离胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率，这就是分子筛效应。分子量小，阻力小，移动快；分子量大，阻力大，移动慢。

醋酸纤维素薄膜电泳的特点是什么？

分离速度快、电泳时间短、样品用量少。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。

简述聚丙烯酰胺凝胶电泳特点及应用范围。

特点：具有机械强度好、弹性大、透明、化学稳定性高、无电渗作用、设备简单、样品量小（1μg～100μg）、分辨率高等。

应用范围：可用于蛋白质、核酸等分子大小不同的物质的分离、定性和定量分析。还可结合去垢剂十二烷基硫酸钠（SDS），以测定蛋白质亚基的相对分子质量。

13.聚丙烯酰胺凝胶电泳有什么优点？ （1）可以在天然状态分离生物大分子；

（2）可分析蛋白质和别的生物大分子的混合物； （3）电泳分离后仍然保持生物活性。

14.琼脂糖凝胶的特点：

(1)属于大孔胶。可以分析107的大分子，其电泳分辨率低于PAGE的。琼脂糖浓度决定形成凝胶后的孔径。

(2)物理化学性质稳定，吸附小，分辨率高，重复性好； (3)机械强度较高；

(4)琼脂糖无毒，热可逆，制备简单； (5)利于样品回收；

(6)琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，染色、脱色程序简单快速。

15简述电泳的基本操作。

一，安装膜具；装封胶条，注意封胶条平面朝下，不能有裂口；盖上凹玻璃；将凹玻璃冲外装进槽里；将楔子插进，将底部插紧。 二，配制凝胶溶液

三，灌胶，加到顶部，来回倾斜去气泡 四，样品制备。

五，加样：通过电极缓冲液，小心地将样品加到凝胶凹形样品槽底部。 六，电泳

七，剥胶:电泳结束后，取下凝胶模，卸下胶框，用凝胶铲小心撬开短玻璃板，从凝胶板上切下一角作为加样标记. 八，染色与脱色

16..电泳技术的优点： 快速、准确、重现性好。 （1）电泳性质高度特异性； （2）电泳方法温和性。

17.常见的不正常电泳现象有：涂抹痕迹；条纹拖尾；条带变浅；前段指示剂缺失；条带仅在凝胶顶部；混杂因素等。

等电聚焦电泳：

18.IEFE一种利用具有pH梯度的支持介质分离等点电不同的蛋白质的电泳技术。 等电聚焦就是在电泳介质中放入载体两性电解质，当通以直流电时，两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度，在此体系中，不同的蛋白质即移动到或聚焦于其相当的等电点位置上，也就是说被聚焦于一个狭的区带中，电泳技术中的等电点聚焦也称为聚焦电泳。

19.IEFE的特点？

答：优点：1.分辨率高（精密度可达0.01pH单位）， 灵敏度高（最低检出量达0.1ng）。2.电泳区带相当狭窄。3.重复性好。

缺点：1.要求用无盐溶液，而在无盐溶液中蛋白质可能发生沉淀。2.样品中的成分必须停留在其pI，不适用在pI不溶或发生变性的蛋白质。

20.进行IEFE必须具备3个条件：

①有一个在电泳条件下基本稳定、重复性良好的pH梯度

②有一个抗对流的电泳材料，使已经分离的样品不再重新混合 ③电泳后有适当的方法来鉴定分离的区带 在电泳介质中放入载体两性电解质，当通入直流电时，两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的pH梯度，正极附近是低pH区，负极附近是高pH区。

21.理想的载体两性电解质应具备的特征：

①分子量要小，以便与被分离大分子物质分离； ②化学性质稳定；

③各成分的pI彼此接近，并在其pI值附近有良好的缓冲能力； ④在pI处具有足够的电导，导电性均匀； ⑤两性电解质载体的数目要足够多； ⑥可溶性好；

⑦对280nm的紫外光没有或仅有很低的吸光度，不干扰样品的测定。

简述等电聚焦电泳的限制条件。

答：（1）要求用无盐溶液，而在无盐溶液中蛋白质可能发生沉淀；

（2）样品中的成分必须停留在其pI，不适用在pI不溶或发生变性的蛋白质。

列举几个等电聚焦电泳的应用。

答：（1）分析分离制备蛋白质、多肽：①区分人血清蛋白；②测出异常免疫球蛋白；③基因分型

（2）测定pI可鉴定蛋白质、多肽； （3）双相电泳中，IEFE作为第一相。

理想的载体两性电解质应具备的特征有？

答：（1）分子量要小，以便与被分离大分子物质分离；

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