Biology GenIII Microplate-中文 - 图文

GEN III MicroPlate

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使用说明书

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主要用途

GenIII微孔板使用固定在微孔板上的94个不同的生化试验来对广泛的革兰氏阳性和阴性细菌提供表型概况并进行鉴定1,2。Biolog鉴定系统（Microlog-M，MicroStation，Omnilog?）中的软件通过读取GenIII微孔板上所表现出的表型图谱来对细菌进行鉴定。

概述

? BiologGenIII微孔板可以对微生物进行94种表型测试，其中包括：71种碳源利用测试

（图1，1-9列）以及23种化学敏感性测试（图1，10-12列）。微生物在测试板上所显示出的“表型指纹”被用来在种的水平上鉴定该微生物。

? 所有必要的营养物质以及生化试剂都被预先填充、干化在96个孔中。四唑类氧化还原

染料通过色度的变化来指示微生物对碳源的利用程度以及对化学物质的敏感程度。

? 试验的操作过程非常简单，如图2所示。在平板上按照常规方法划线分离需要鉴定的微

生物，然后将分离的到的纯种用棉签挑到接种液（IF）3中，配成指定细胞浓度的菌悬液。将菌悬液按每孔100μl的量加到GenIII板后孵育，以便微生物代谢后产生表型指纹图谱。所有的孔在刚开始的时候都是无色的。当孵育一段时间之后，那些能被细胞利用碳源的孔中的呼吸作用增强了。增强的呼吸作用导致四唑氧化还原染料被还原，变成紫色。而阴性孔则保持无色，就像没有碳源的阴性对照孔（A1）一样。同样，还有一个阳性对照孔（A10）作为列10-12化学敏感性测试的参考。孵育后，通过显紫色孔所产生的表型指纹同Biolog数据库中的数据进行比较。如果找到匹配的，所分离出来的微生物在种的水平上得到鉴定。

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A1 Negative Control 阴性对照 B1 D-Raffinose 蜜三糖,棉子糖 A2 Dextrin 糊精 B2 α-D-Lactose α-D-乳糖 A3 D-Maltose D-麦芽糖 B3 D-Melibiose 蜜二糖 A4 D-Trehalose D-海藻糖 B4 β-Methyl-D-Glucoside β-甲酰-D-葡糖苷 C4 D-Galactose D-半乳糖 D4 myo-Inositol 肌醇 E4 L-Arginine L-精氨酸 F4 D-Gluconic Acid D-葡糖酸 G4 L-Lactic Acid L-乳酸 H4 β-Hydroxy-D,LButyricAcid β-羟基-D,L丁酸 A5 D-Cellobiose D-纤维二糖 B5 D-Salicin D-水杨苷 A6 Gentiobiose 龙胆二糖 B6 N-Acetyl-D-Glucosamine N-乙酰-D-葡糖胺 C6 D-Fucose D-果糖 D6 D-Glucose- 6-PO4 D-葡糖-6-磷酸 E6 L-Glutamic Acid L-谷氨酸 F6 Glucuronamid e 葡糖醛酰胺 G6 α-Keto-Glutaric Acid α-酮-戊二酸 H6 Acetoacetic Acid 乙酰乙酸 A7 Sucrose 蔗糖 B7 N-Acetyl-β-DMannosamine N-乙酰-β-D-甘露糖胺 C7 L-Fucose L-果糖 D7 D-Fructose-6-PO4 D-果糖-6-磷酸 E7 L-Histidine L-组胺 F7 Mucic Acid 粘酸；粘液酸 A8 D-Turanose D-松二糖 B8 N-Acetyl-D-Galactosamine N-乙酰-D-半乳糖胺 C8 L-Rhamnose L-鼠李糖 D8 D-Aspartic Acid D-天冬氨酸 E8 L-Pyroglutamic Acid L-焦谷氨酸 F8 Quinic Acid 奎宁酸 A9 Stachyose 水苏糖 B9 N-AcetylNeuraminic Acid N-乙酰神经氨酸 C9 Inosine 肌苷 D9 D-Serine D-丝氨酸 E9 L-Serine L-丝氨酸 F9 D-Saccharic Acid 糖质酸 G9 Bromo-Succinic Acid 溴-丁二酸 H9 Formic Acid 甲酸 A10 Positive Control 阳性对照 B10 1% NaCl A11 pH 6 B11 4% NaCl A12 pH 5 B12 8% NaCl C1 α-D-Glucose α-D-葡糖 D1 D-Sorbitol D-山梨醇 E1 Gelatin 明胶 F1 Pectin 果胶 C2 D-Mannose D-甘露糖 D2 D-Mannitol D-甘露醇 E2 Glycyl-L-Proline氨基乙酰-L-脯氨酸 F2 D-Galacturonic Acid D-半乳糖醛酸 G2 Methyl Pyruvate 丙酮酸甲酯 H2 γ-Amino-ButryricAcid γ-氨基-丁酸 C3 D-Fructose D-果糖 D3 D-Arabitol D-阿拉伯醇 E3 L-Alanine L-丙氨酸 F3 L-Galactonic Acid Lactone L-半乳糖醛酸内酯 G3 D-Lactic Acid Methyl Ester D-乳酸甲酯 H3 α-Hydroxy- Butyric Acid α-羟基-丁酸 C5 3-Methyl Glucose 3-甲酰葡糖 D5 Glycerol 甘油 E5 L-Aspartic Acid L-天冬氨酸 F5 D-Glucuronic Acid D-葡糖醛酸 G5 Citric Acid 柠檬酸 C10 1% Sodium Lactate 乳酸钠 D10 Troleandomycin 醋竹桃霉素 E10 Lincomycin 林肯霉素,洁霉素 F10 Vancomycin 万古霉素 C11 Fusidic Acid 梭链孢酸 D11 Rifamycin SV 利福霉素SV E11 Guanidine HCl 盐酸胍 F11 Tetrazolium Violet 四唑紫 G11 Lithium Chloride 氯化锂 H11 Sodium Butyrate 丁酸钠 C12 D-Serine D-丝氨酸 D12 Minocycline 二甲胺四环素 E12 Niaproof 4 硫酸四癸钠 F12 Tetrazolium Blue 四唑蓝 G12 Potassium Tellurite 亚碲酸钾 H12 Sodium Bromate 溴酸钠 G1 p-Hydroxy- Phenylacetic Acid p-羟基-苯乙酸 H1 Tween 40 吐温40 G7 D-Malic Acid D-苹果酸 H7 Propionic Acid 丙酸 G8 L-Malic Acid L-苹果酸 H8 Acetic Acid 乙酸 G10 Nalidixic Acid 萘啶酮酸 H5 α-Keto-Butyric Acid α-酮-丁酸 H10 Aztreonam 氨曲南 图1：微孔板测试布局

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2：检测步骤

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图

试剂及耗材

? MicroPlates微孔板: Catalog No.1030- Biolog GEN III MicroPlates (10/box). ? Agar Culture Media琼脂培养基: Catalog No.71102-BUG Agar with 5% sheep blood

(BUG+B); Catalog No.Bio-M1012- Chocolate Agar; Catalog No.70101- Biolog Dehydrated Growth Agar, 500 gm (BUGAgar).

? Inoculating Fluid接种液: Catalog No.72401- IF-A, Catalog No.72402- IF-B, Catalog No.

72403- IF-C.

? Inoculatorz?无菌一次性接种棉签: Catalog No.3321- Sterile disposable inoculator

swabs (20x50); Catalog No.3323(100x1).

? StreakerzTM木质无菌一次性接种棒: Catalog No.3025- Sterile disposable wooden agar

plate streakers (10x100); CatalogNo.3026 (50x20).

? Transfer Pipets无菌一次性移液管: Catalog No.3019- Sterile disposable 9 inch transfer

pipets.

? Reservoirs无菌一次性V型加样槽: Catalog No.3102- Sterile disposable reservoirs. ? Multichannel Pipettes多道移液器: Catalog No.3711- 8 channel electronic pipettor. ? Pipet Tips无菌移液器吸头: Catalog No. 3201- Sterile racked pipet tips for Ovation

multichannel pipettor; CatalogNo. 3001- Matrix multichannel pipettor tips.

? Turbidimeter浊度计: Catalog No.3531- 110 volt model, Catalog No.3532 -220 volt

model, CatalogNo.3585 - 240 volt model.

? Turbidity Standards标准比浊管: Catalog No.3441 - 85% T; Catalog No.3440 - 65% T.

选择恰当的规程（接种液及细胞浓度）

所有的规程都可按相同的方法操作，只需跟居不同情况选择不同的接种液及细胞接种浓度。

? 规程A用于大多数的菌株。

? 规程B 适用于少部分强还原性的菌株和产芽孢的菌株（主要是气单孢菌Aeromonas，弧菌

Vibrio，革兰氏阳性芽孢杆菌中的一些菌株）。这些菌株在使用接种液A时可能使A-1孔产生假阳性。如果发生这种情况，仅需使用规程B重新实验。

? 规程C1用于缓慢生长的菌，通常是在BUG+B生长24小时形成的菌落非常小（直径小于

1mm）的细菌（图2.d）。这些主要是微好氧、嗜CO2的革兰氏阳性球菌及微小杆菌（详见表1）。

? 规程C2用于苛刻生长、嗜CO2、对氧气很敏感的细菌，在BUG+B上生长非常缓慢或根本不

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