CagA_H_pylori对肝癌_省略_SMAD4和SMAD7表达的影响_刘丽

2015年1月第35卷第1期

文章编号：1001-6325（2015）01-0101-02

基础医学与临床Basic＆ClinicalMedicineJanuary2015Vol．35No．1

CagA+H．pylori对肝癌HepG2

SMAD4和SMAD7表达的影响细胞增殖及TβＲI、

刘

11，2*

，黄衍强3，周喜汉2，尹毅霞2，覃月秋2丽，黄赞松

（1.广西医科大学研究生学院2011级12班，广西南宁530021；

右江民族医学院2.消化疾病研究所附属医院消化内科；3.微生物免疫学教研室，广西百色533000）

中图分类号：Ｒ575文献标志码：A

1.6

目的基因扩增：按superrealpremixplus（SYBＲGreen）

－△△CT

DOI:10.16352/j.issn.1001-6325.2015.01.024

肝癌病因复杂，有研究发现幽门螺杆菌（Helicobacterpy-lori，H．pylori）与肝癌相关，机制未明。CagA是H．pylori的毒

+

力因子，CagAH．pylori与肝癌可能有联系。TGF-β（trans-

荧光定量预混试剂增强版试剂盒（TianGen公司）说明书操作。计算公式：扩增倍数=2

。引物序列（表1）。

forminggrowthfactorbeta，TGF-β）/Smads信号通路任何环节异常，均会造成肿瘤始动。TGF-β信号传导依靠TβＲ及

+Smads，本实验主要探讨CagAH．pylori对肝癌细胞的作用及+

SMAD4和SMAD7表达的影响，对TβＲI、为研究CagAH．py-

表1引物序列

Table1Primersequence

lengthof

geneCagA

primer

forward5'-ATAATGCTAAATAGACAACTTGAGCGA-3'reverse5'-TTAGAATAATCAACAAACATCACGCCAT-3'

TβＲI

forward5'-GCAGTAAGACATGATTCAGCCACAG-3'reverse5'-CAATGGAACATCGTCGAGCAA-3'

SMAD4forward5'-GCCCAGGATCAGTAGGTGGAATAG-3'

reverse5'-CCTGAGTATGCATAAGCGACGAAG-3'

SMAD7forward5'-TTCCTCCGCTGAAACAGGG-3'

reverse5'-CCTCCCAGTATGCCACCAC-3'

actinβ-forward5'-AAAAGCCACCCCACTTCTCT-3'reverse5'-GACCAAAAGCCTTCATACATCTCA-3'

22111695190amplification（bp）297

lori在肝癌发病机制中的作用提供实验依据。

1

1.1

材料与方法

细胞：人肝癌HepG2细胞（中科院上海细胞库）培养于

含10%胎牛血清（Gibico公司）的改良型1640培养基（Hy-37℃、5%CO2培clone公司）（简称培养液），置饱和湿度、养箱中培养。1.2

H．pylori：参照文献［1］鉴定CagAH．pylori，培养后收

6

+

集，紫外分光光度仪检测浓度，将菌液调整为1.0×10CFU（菌colonyformationunit）/mL后连续5次10倍稀释，落形成单位，

1.0×105、1.0×104、1.0×103、1.0×102和1.0×101CFU/mL。1.3

MTT法检测细胞增殖情况：用MTT法检测CagA+

1.7

H．pylori作用24h对细胞增殖的影响，计算公式：增殖率（PI）=（实验组A值－对照组A值）/对照组A值×100%（表2）。1.4CagA+H．pylori与细胞孵育：细胞调整为1×106个/mL，接37℃、5%CO2培养箱中培养24h种到培养瓶，置饱和湿度、后换无血清的培养液同步化处理24h，各瓶加上述不同浓度CagA+H．pylori，每个浓度重复3次，作用24h。阴性对照组

+

加等量培养液。不加CagAH．pylori，

统计学分析：计量资料以均值±标准差（±s）表示，采

用SPSS17.0统计软件进行分析。两组均数比较采用t检验，wayANOVA）。多组均数间比较采用单因素之差分析（one-

2

2.1

结果

CagA+H.pylori对HepG2细胞的作用：CagA+H．pylori

12

在浓度1.0×10和1.0×10CFU/mL时促进细胞增殖，浓3

1.0×104、1.0×105和1.0×106CFU/mL时度为1.0×10、

1.5ＲNA提取及反转录反应：用Trizol试剂提取总ＲNA。

抑制细胞增殖，菌液浓度越高，抑制作用越明显（表2）。2.2

TβＲI、SMAD4和SMAD7mＲNA在HepG2细胞中表达

+12

水平：CagAH．pylori浓度在1.0×10和1.0×10CFU/mL

按PrimeScriptＲTreagentKitWithgDNAEraser（perfectrealtime）反转录试剂盒（TaKaＲa公司）说明书制备cDNA。收稿日期：2014-02-07

*

修回日期：2014-05-30

基金项目：广西自然科学基金（0542119）；广西医疗卫生重点科研课题基金（200887）；广西教育厅重点课题（201202ZD078）通信作者（correspondingauthor）：huangzansong@hotmail．com

102

基础医学与临床Basic＆ClinicalMedicine2015.35（1）

表2各组HepG2细胞增殖率比较

Table2Thecomparisonofeachgroupproliferation

rateonHepG2cells

group（CFU/mL）controlgroup1.0×1011.0×1021.0×1031.0×1041.0×1051.0×106

＊

SMAD4和SMAD7mＲNA相对定量表3TβＲI、

Table3TherelativequantificationofTβＲI，SMAD4，

SMAD7mＲNA

group（CFU/mL）controlgroup1.0×1011.0×1021.0×1031.0×1041.0×1051.0×106

TβＲI1.00±0.000.48±0.080.59±0.111.77±0.233.82±0.305.33±0.426.89±0.63

SMAD41.00±0.000.54±0.090.61±0.131.99±0.314.96±0.225.76±0.407.53±0.32

SMAD71.00±0.004.88±0.312.45±0.290.79±0.060.56±0.070.41±0.090.23±0.07

proliferationrate%6.00±0.2410.77±0.12*8.17±0.31*－9.29±0.29*－26.25±0.41*－43.50±0.22*－60.25±0.33*

P＜0.05comparedwithcontrolgroup．

肝癌细胞生长

SMAD4表达，促进SMAD7表达，浓度为1.0×时抑制TβＲI、

103、1.0×104、1.0×105和1.0×106CFU/mL时TβＲI、SMAD4表达增加，SMAD7表达下调，菌液浓度越高，作用越明显（表3）。

［3］

。本实验证实CagA+H．pylori浓度在101和

102CFU/mL时促进肝癌HepG2细胞增殖，抑制TβＲI、

3SMAD4表达，104、105和促进SMAD7表达，浓度为10、

106CFU/mL时抑制细胞增殖，TβＲI、SMAD4表达增加，

［2］+SMAD7表达下调，研究发现低浓度的CagAH．pylori能促+

100细胞生长，进胆管细胞癌KKU-而高浓度CagAH．pylori+

但目前尚未见CagAH．pylori感染肝癌抑制细胞生长，

3讨论

+

肝研究表明CagAH．pylori可诱导原癌基因表达升高，

+

细胞动力学异常。CagAH．pylori能干扰细胞增殖、凋亡，促

HepG2细胞后TβＲI、SMAD4和SMAD7在肝癌细胞表达的

+

实验结果报道。据此我们推断CagAH．pylori可影响肝癌

进细胞产生炎性反应，在肝胆管型肝癌中可能起着重大作用

［2］

。许多肿瘤细胞或组织都有TβＲI在mＲNA或蛋白水

HepG2细胞增殖，表现为低浓度促进细胞增殖，高浓度起抑SMAD4和制细胞增殖作用，机制可能是通过影响TβＲI、SMAD7的表达而起作用，确切的作用及机制需要更多的实验和进一步研究证实。

平上的表达降低、缺失或突变，提示TβＲI是在细胞膜发挥作用的抑癌基因。Smad4在肿瘤发病中表达下降或突变，从而不能发挥调控转录作用。Smad7可竞争结合TβＲI，而抑制TGF-β1/Smads信号传导，研究表明通过下调Smad7可抑制

参考文献：

++［1］黄衍强，欧平，周喜汉，等．CagA及VacA幽门螺杆菌

tosis，andinflammationinbiliarycells［J］．DigDisSci，2011，56：1682-1692．

［3］范宜锋，王文奇，白文坤，等．他莫昔芬对人肝癌HepG2

J］．山东大学学报：医学细胞增殖和Smad7表达的影响［2009，47：58-60．版，

．山东医药，2010，对克拉霉素的耐药性突变分析［J］50：37-39．

［2］BoonyanugomolW，ChomvarinC，BaikSC，etal．Ｒoleof

cagA-positiveHelicobacterpylorioncellproliferation，apop-

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/4u61.html