流式检测上机前细胞处理流程与注意事项
更新时间:2023-04-13 13:41:01 阅读量: 实用文档 文档下载
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流式检测细胞周期与凋亡样品处理流程
1.胰蛋白酶消化法收集细胞,做成单细胞悬液
2.1000r/min离心5min,收集沉淀。
3.沉淀用PBS洗2次,1000r/min离心5min,收集沉淀。
4.细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬,4℃过夜。即可送检。
备注:1.每个细胞样品细胞量需达到106(细胞沉淀要打散,避免细胞聚集),细胞量少可能测不出结果,或结果不太准确。
2.样品可在-20℃保存一个月
流式检测细胞DNA倍体样品处理流程
1.胰蛋白酶消化法收集细胞,做成单细胞悬液
2.1000r/min离心5min,收集沉淀。
3. 沉淀用PBS洗2次,加入相应种属的淋巴细胞或鸡红细胞做为内参,内参与
预检测细胞的比例为1:3
4. 1000r/min离心5min,收集沉淀。
5. 细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬,4℃过夜。即可送检。
备注:1.每个细胞样品细胞量需达到106(细胞沉淀要打散,避免细胞聚集),细胞量少可能测不出结果,或结果不太准确。
2.样品可在-20℃保存一个月
检测胞内蛋白上机前细胞处理流程
1.收集实验处理好的细胞,用PBS洗2次,2%多聚甲醛固定15min。
2.离心弃掉多聚甲醛,再用70%的冰乙醇固定过夜(4℃)。
3.离心弃掉乙醇,PBS洗一遍,加破膜剂0.5%TritonX-100 50ul/106个细胞
15min。
4.直接在0.5%TritonX-100中加一抗室温孵育30min,离心,用PBS洗一次,
加荧光标记二抗(需进口二抗,国内的效价比较低效果不好),总体系为100ul,总体系中应含0.25%(体积分数)的TritonX-100,室温孵育30min。
5.也可以直接加FITC直标的一抗。
6.离心,用PBS洗一次,用2%的多聚甲醛固定,4℃存放待测。
备注:1. 市面上的多聚甲醛多为4%的,可用PBS稀释。如果用两步标记,应做不加一抗,只加二抗的对照管
2. 未染色的新鲜标本贮存方法如下:10%二甲基亚砜,90%小牛血清,5
×106~1×107细胞在-70℃过夜,然后置液氮中可长期保存。
3.免疫染色未经固定的标本在4℃可保存48h。若需存放时间较长、或标本
具有传染性,应该用固定剂固定。常用的固定剂配方是:的多聚甲醛和
PBS或0.8%的生理盐水配成p H7.2的固定液;固定方法是:将经免疫
荧光染色的细胞离心沉淀,再加入固定液混匀,放在4℃温度保存。一
般来说,经固定处理的标本保存1周至1个月,多数样品的阳性细胞群
体比例及荧光强度增色能保持在正常范围之内。
4.每个细胞样品细胞量需达到106,细胞量少可能测不出结果,或结果不
太准确
检测细胞转染率上机前细胞处理流程
1.用胰蛋白酶消化法收集转染后的细胞,用PBS洗2次。
2.直接用2%多聚甲醛固定,4℃存放,待测。
备注:每个细胞样品细胞量需达到106,细胞量少可能测不出结果,或结果不太准确。
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