植物组织培养和植物克隆

实验11 植物组织培养

1．植物组织培养的原理是植物细胞的全能性。

2．植物组织培养的各个步骤应严格执行无菌操作技术，所以在生产时为了防止污染，植物组织一般要先进行消毒，先用70%的酒精浸泡，再用5%的次氯酸钠浸泡，最后用无菌水清洗。各种器皿和培养基等通常用高压蒸汽灭菌法灭菌。

3．与培养微生物的LB培养基相比，植物组织培养的MS培养基中要添加生长素和细胞分裂素类似物。4．在菊花的组织培养过程中，首先将消毒后的菊花茎的切段接种在加有适当配比生长调节剂的MS培养基上，给予一定的温度和光照，使其先脱分化形成愈伤组织，再将其转移至含有较多细胞分裂素类似物——苄基腺嘌呤（简称BA，需用HCl溶解）的培养基上，诱导其长出丛状苗。将它分株后，再移入含有较多生长素类似物——萘乙酸（简称NAA，需用NaOH溶解）的培养基上，使其生根。

5．通过植物组织培养产生的幼苗需要移栽至草炭土或蛭石中，给予适宜的光照、温度和80%以上的湿度等条件，锻炼一段时间，最后再定植到土壤中。

植物的克隆

（1）植物克隆的理论基础是植物细胞的全能性，技术基础是植物组织培养。

（2）在植物组织培养过程中，将离体的植物组织或细胞放在加有适当配比生长调节剂的培养基上进行培养，它会先发生脱分化形成愈伤组织。然后通过调节生长素和细胞分裂素的配比，可以诱导出芽和根，最后发育成完整的植株。或者将它放在摇床上，通过液体悬浮培养获得许多分散的单细胞。这些单细胞属于胚性细胞，具有细胞质丰富、液泡小而细胞核大的特点，它们依次经过细胞团、球形胚、心形胚和胚状体等阶段，最后发育形成许多完整的植株。

（3）通过基因工程(转基因)方法成功导入了目的基因的植物细胞需要通过植物组织培养才能获得具有特定性状的新植株。

（4）由于植物细胞壁的存在，植物组织培养有一定难度。如果在0.5～0.6mol/L的甘露醇溶液（目的是维持较高的渗透压）环境下用纤维素酶和果胶酶混合液处理植物细胞，除去细胞壁，获得球形的原生质体，然后再将其培育成完整的植株，这样将能够提高植物组织培养的成功率。

（5）将除去细胞壁的两个来自不同种植物细胞的原生质体通过一定的技术手段诱导融合，形成杂种细胞，然后再利用原生质体培养技术进行培育，最后将能够得到杂种植株。

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