常用实验试剂配制

1 DEPC水(1‰) 1000ml 水 1ml DEPC

根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。 2 0.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris

1000ml DEPC水 用HCL调ph至7.5，高压备用。

3 4%PFA的配制(ph 7.0) 40g PFA

1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压)

将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。

3 0.2% 甘油/0.1M tris 20ml 甘油 980ml 0.1Mtris

4 20XSSC Nacl 175.3g （ph 7.0） 柠檬酸钠 88.2g DEPC水 1000ml 分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用 5 HEPES 溶液 HEPES 23.8g (ph6.8-8.0) DEPC H2O 100ml

6 50X Denhaldt′s 液

聚蔗糖（Ficoll 400） 0.2g 聚乙烯吡咯烷酮(polyvinypyrrolidone) 0.2g 牛血清蛋白（BSA） 0.2g DEPC 水 20ml 7 预杂交 buffer

Deinoized formanmid 5ml 20X SSC 1.5ml 1M HEPES 0.5ml 50X Denhanldt′s液 1ml

龟精DNA 0.6ml(4ug/ul) DEPC水 1.4ml

龟精DNA 要先95℃10-15min加热变性，随即冰浴。杂交buffer分装后-20℃保存。 8 Washing buffer

(ph7.5) maleic acid 5.8g

NACL 4.4g Tween（吐温） 1.5ml

定容至500ml溶质浓度最后分别为 0.1M maleic acid 0.15M nacl 0.3% Tween 9 Maleic acid buffer

(ph7.5) Maleic acid 5.8g Nacl 4.4g

定容至500ml 溶质的浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl 10 Detection buffer

(ph 9.5) 0.1M Tris-Hcl 7.9g (9.0g)

0.1M Nacl 2.9g

定容至500ml.使溶质的终浓度为0.1M Tris-Hcl ,0.1M nacl. 11 blocking reagent（封闭液）(2-8℃保存)

(bottle 5) 5g maleic acid buffer 50ml 12 blocking solution

封闭液（新鲜配制） 1ml

Maleic acid buffer 10ml 13 抗体（AP）

10000rpm离心5min，吸上清，1：5000稀释，考虑先稀释100倍，用时再 稀释。 ? LB培养基

胰化蛋白胨 酵母提取物 氯化钠 Amp（100ng/ml） 10g 5g 10g 1ml 加去离子水950ml搅拌使之完全溶解，用5mol/L的NaOH调PH值至7.0，定容至1L，高压蒸汽灭菌（15磅，1.034×105Pa）30min，4℃保存。 ? LB琼脂固体培养基 LB 琼脂粉 500mL 7.5g 高压蒸汽灭菌(15磅，1.034×105 Pa) 30 min，冷却至60℃，加入500?L 100mg/mL的氨苄青霉素（Amp），分铺20个平板。 ? 100 mg/mL氨苄青霉素（Amp） Amp ddH2O 用0.2um滤器过滤，-20℃储存。 ? 1M 30 mg/mL卡那霉素（kana） kana ddH2O 30mg 1mL 100mg 1mL 用0.2um滤器过滤，-20℃储存。 琼脂糖凝胶电泳所用试剂 ? 50×TAE(电泳缓冲液)

Tris碱 242g 冰乙酸 57.1 mL 0.5M EDTA（pH 8.0） 100 mL

溶于终体积1000 mL去离子水中，使用时1：50稀释。 ? 10×加样缓冲液

0.25% 溴酚兰 0.25% 二甲苯青 30% 甘油 保存于4℃。

? 10mg/mL EB 溶液

取溴化乙锭（EB）0.2g溶解于20mL去离子水中，混匀。4℃避光保存。使用时终浓度为

0.5μg/mL。

? 1%琼脂糖凝胶

琼脂糖 1g 1×TAE 100 mL

微波炉加热至完全溶解，摇匀，当温度降至60℃时，即可铺制平板。 ? 0.1mol CaCl2溶液：

1.1g无水氯化钙，溶于90ml三蒸水中，定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌置于

灭菌试剂瓶中，4℃保

? 氨苄青霉素（Amp）选择性培养基 LB培养基中加入1.5%的琼脂（15g/L），高压灭菌20min，取出，在无菌条件下，冷却

至50℃左右时（烧手但尚可忍受）加入抗生素或其他必需成分，如为氨苄青霉素（Amp）选择性培养基，则以50mg/ml的氨苄青霉素贮存液按50μg/ml的量加入，即每ml培养基加入1μl氨基苄。 ? 氨苄贮存液

将氨苄青霉素钠溶于三蒸水，配成50mg/ml溶液，以0.22μm滤纸过滤，1ml一份分装，

存于-20℃。 质粒的少量提取 【试剂及配制】 1．溶液Ⅰ

葡萄糖（C6H12O6·H2O） 1.982g 三蒸水 160ml

0.5mol EDTA pH8.0 4ml 1mol Tris-Cl pH8.0 5ml

以三蒸水定容至200ml，高压灭菌，4℃保存 0.5 mol EDTA pH8.0 的配制：

Na2EDTA·H2O 186.1g （如无水，则为175g） 三蒸水 700ml

边磁力搅拌边加入固体NaOH，缓慢少量加入，待充分溶解，pH接近8.0，用酸度计调

节pH8.0 （HCl/NaOH）； 1mol Tris-Cl pH8.0 的配制： Tris 碱 121g 三蒸水 800ml

充分搅拌，用浓盐酸将pH调节至8.0，酸度计测量； 2．溶液Ⅱ

配制50ml的量，现用现配。 10 mol NaOH 1ml 三蒸水 40ml 10% SDS 5ml

用三蒸水定容至50ml 10mol NaOH 的配制：

40g NaOH晶体加三蒸水至100ml； 10% SDS 的配制：

戴口罩，称10g SDS，溶于80ml三蒸水中，68℃助溶，加数滴1mol HCl，调pH7.2，定容至100ml；

1mol HCl 的配制：

于通风橱中，三蒸水91.4ml，浓盐酸8.6ml，混匀； 3．溶液Ⅲ

5mol 乙酸钾 60ml 冰乙酸 11.5ml 三蒸水 28.5ml

高压灭菌，4℃保存； 5mol 乙酸钾配制：200ml 乙酸钾 98.14g 三蒸水 160ml

搅拌溶解，定容至200ml;

4．3ml 乙酸钠（NaAc）pH5.2 配制：500ml

乙酸钠（CH3COONa·H2O） 201.1g 三蒸水 200ml

用冰乙酸调节pH为5.2，三蒸水定容至500ml，高压灭菌，4℃保存。 5．平衡酚

在粗酚中加入0.1% 8-巯基喹啉，然后倒入0.1mol Tris-Cl pH8.0，避光磁力搅拌4h，静置后移去水相，再加0.1mol Tris-Cl pH8.0，搅拌、去除水相，反复进行，直到水相pH>7.8时为止，装棕色瓶，4℃保存。 6．TE 缓冲液 pH8.0

配制最终使：10mmol Tris-Cl pH8.0 1mmol EDTA pH8.0

7．其它试剂：氯仿：乙戊醇（V/V=24：1）、无水乙醇、70%乙醇

? 2× SSC

先配制20× SSC贮存液，用时稀释。 NaCl 175g 3mol

枸椽酸三钠·2H2O 88g 0.3mol

三蒸水加至1000ml，用1mol HCl 调pH7.0

? 4× SSC/50%去离子甲酰胺（V/V）

去离子甲酰胺的配制：500ml 甲酰胺与25g Bio-Rad AG 501-X8(20～50目) 混合，室温避光搅拌4h，过滤，分装为50ml ，-20℃ 存放；

? 100× Denhardt液 聚蔗糖 10g

聚乙烯吡咯烷酮 10g 牛血清白蛋白 10g

消毒三蒸水定容至100ml

? 预杂交液

去离子甲酰胺 5ml 20× SSC 2.5ml

加温至50℃ ，加入硫酸葡聚糖 1g

聚合物溶解后，加入100× Denhardt 500μl 10%SDS 500μl

10mg/ml变性鲱鱼精子DNA 100μl 消毒三蒸水 400μl 充分混合；

? 杂交液

将标记好的探针用沸水浴10min，立即冰酒精冷轧，用预杂交液将探针稀释至0.5～

5ng/μl 。

原位杂交缓冲液的配制：

3%柠檬酸：100ml蒸馏水中加柠檬酸（C6H8O7.H2O） 3g，PH2.0左右

2×SSC---1000ml蒸馏水中加氯化钠17.6g，柠檬酸三钠（C6H5O7Na3.2H2O，分子量294）8.8g

0.5×SSC---300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可（1：3） 0.2×SSC---270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可（1：9） 20%甘油---20ml甘油加80ml蒸馏水即可

0.5M TBS---1000ml蒸馏水加氯化钠30g，TRIS 1.2g 纯乙酸0.4-0.5ml,PH7.2-7.6 0.01M TBS(PH9.0-9.5)配法：1000ml蒸馏水中加NaCL9g, Tris 1.2g 免疫组化缓冲液的配制： 1 0.2M PB

①0.2M NaH2PO4：NaH2PO4.2H2O 31.2g（或NaH2PO4.H2O 27.6g） 加重蒸水1000ml②0.2M Na2HPO4：Na2HPO4.12H2O71.632g（或NaH2PO4.7H2O 53.6g或NaH2PO4.2H2O 35.6g） 加重蒸水1000ml

③0.2M PB：19ml①+81ml②混合即可，pH值约为7.4-7.5 2 0.01M PBS

NaCl8.5-9g, 0.2M PB 50ml,加重蒸水1000ml混匀即可 3 0.5M TBS

①0.5M Tris-HCl缓冲液:

Tris(三羟甲基氨基甲烷) 60.57g 1N HCl 约420ml 重蒸水 至1000ml

先用少量重蒸水300-500ml溶解Tris(三羟甲基氨基甲烷)，加入HCl后，用1N NaOH 或HCl将pH调至7.6，最后加重蒸水至1000ml，此液为储备液，于4℃冰箱中保存，免疫细胞化学中常用的Tris-HCl缓冲液浓度为0.05M，用时取储备液稀释10倍即可。 主要用于配制Tris缓冲生理盐水（TBS）、DAB显色液等 4 Tris缓冲生理盐水（TBS） 0.5M Tris-HCl缓冲液 100ml NaCl 3.5-9g(0.15M) 重蒸水 至1000ml

先以重蒸水少许溶解NaCl，再加Tris-HCl缓冲液，最后加重蒸水1000ml，最终浓度为0.05M。

电泳缓冲液、染料和凝胶加样液的配置

电泳缓冲液、染料和凝胶加样液的配置 电泳缓冲液 50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液

成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 2mol/L Tris碱 1mol/L 乙酸

100 mmol/L EDTA 水 242g

57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L） 200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 补足1L 5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液

成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris碱 445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水 54g 27.5g 硼酸

20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 补足1L 染料

1％溴酚蓝（bromophenol blue）

加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。 1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）

溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。 10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）

小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。 凝胶上样液（gel loading solutions） 6×碱性凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.3 N 氢氧化钠 6 mmol/L EDTA

18％聚蔗糖（400型） 0.15％溴甲酚绿 0.25％二甲苯青FF

水 300ul 10N 氢氧化钠

120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.8g 15mg 25mg

补足到10ml 6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA

15％聚蔗糖（400型） 水 1.5ml 1％溴酚蓝 1.5ml 1％二甲苯青FF

100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.5g

补足到10ml 6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.25％溴酚蓝

0.25％二甲苯青FF 15％聚蔗糖（400型） 水 2.5ml 1％溴酚蓝 2.5ml 1％二甲苯青FF 1.5g

补足到10ml 6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）

成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 50％甘油

水 1.5ml 1％溴酚蓝 1.5ml 1％二甲苯青FF

100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 3ml 3.9ml 6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40％聚蔗糖

水 1.5ml 1％溴酚蓝 1.5ml 1％二甲苯青FF

100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 4g

补足到10ml 10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.2％溴酚蓝

0.2％二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA

0.1％SDS 50％甘油 水 20mg 20mg

4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ul 10％ SDS 5ml

补足到10ml

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