粗蛋白的测定 凯氏定氮法

粗蛋白含量的测定(凯氏定氮仪测定)

蛋白质含量测定（凯氏定氮法）

1 原理

蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。

2 试剂及其配制

硫酸钾（分析纯）、五水硫酸铜（分析纯）、浓硫酸（分析纯）、40%NaoH溶液（400g/L）、蒸馏水

0.1N盐酸标准溶液：量取9mL盐酸加适量水稀释至1000mL。

4%硼酸：取40g硼酸加水适量溶解后，定容至1000mL容量瓶中。

指示剂:甲基红0.1g，溴甲酚绿0.1g，混合定容至100ml 95%乙醇中，在滴定中加2~3滴于硼酸中。

3 仪器

消化炉、半自动凯氏定氮仪、天平（0.1mg、0.1g）

4 分析步骤

4.1 称1g(精确至0.1mmg)左右样品于消化管中；

4.2 加7g硫酸钾和0.8g五水硫酸铜；

4.3 加12mL浓硫酸，慢慢地摇动，将样品用酸浸湿；

4.4 将涤气装置接在支架中的消化管上，将水抽气泵水龙头全开；

4.5 将装有涤气装置的消化管连支架放入消化器中；

4.6 5min后调小抽气泵水流，使酸恰好吸入涤气罩头；

4.7 继续消化直至全部样品变为透明的蓝绿色澄清液体，根据样品种类，消化时间大约在30～60min之间（将温度升到420℃时开始计时）；

4.8消化完毕，将装有涤气装置的消化管连支架一起从消化器中取出冷却15-20min；

4.9 在每个消化管中加入25mL蒸馏水；

4.10 将30mL接受液加入锥形瓶再加2滴甲基红-溴酚绿指示剂，放入蒸馏器升起持瓶台后，使馏出液出口浸入接受液；

4.11 将消化管放入蒸馏器，关上安全门；

4.12 加60mL 40% NaoH加入消化管后进行蒸馏；

4.13 接受瓶中的溶液呈绿色，表示有碱-氨存在。

4.14用标准盐酸溶液滴定馏出液至蓝/灰色为滴定终点，记录盐酸溶液用

粗蛋白含量的测定(凯氏定氮仪测定)

量，同时做试剂空白试验。除不加样品外，从消化开始操作完全相同，记录空白试验消耗盐酸标准溶液的体积。

5 结果计算

粗蛋白（干基%）=N×（V1-V2）×0.1×14.007×F/m(1-M%)

式中：N—HCl标准溶液的浓度，mol/L

V1—滴定样品吸收液时消耗盐酸标准体积，mL

V2—滴定空白吸收液时消耗盐酸标准体积，mL

m—样品质量，g

M—试样水分百分率%

F—氮转换为蛋白质的系数

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/3ek1.html