实验三 培养基的配制与灭菌

实验四一、实验目的

培养基的制备与灭菌

1、了解培养基的配制原理，掌握制备培养基的过程。

2.掌握高压蒸汽灭菌及干热灭菌的方法及注意事项

二、实验原理： 培养基是用人工方法，将多种 物质按微生物生长所需而调制成的一种营养基 质，用来分离和培养微生物。培养基可分为天 然培养基、合成培养基和半合成培养基三类。 根据是否含有凝固剂又可分为液体培养基、固 体培养基(1.8-2.0%)、半固体培养基(0.30.5%),

凝固剂一般是琼脂(洋菜),也有用硅胶与明 胶。一般来说，培养基包括有水份、碳源、 氮源、无机盐类以及生长因素等五大类营养 成份。此外还得有适宜的pH值，一定的渗透 压(即浓度)以及氧化还原电位等。 三、实验材料：三角瓶、试管、烧杯、分装 器、玻棒、天平、药匙、pH试纸，搪瓷杯、 量筒、纱布、棉花、橡皮筋、牛皮纸、角匙、 称量纸、各种生化试剂等 。

1、葡萄糖发酵培养基 蛋白胨 10g NaCl 5g 葡萄糖 10g 水1000mL 1.6%溴甲酚 紫水 pH 7.4-7.6 将蛋白胨、NaCl、葡萄糖加入水中，加热调pH至7.4-7.6, 加入1.6%溴甲酚紫水溶液。分装试管内倒置一杜氏小管， 塞上硅胶塞，灭菌。 2、乳糖发酵培养基 蛋白胨 20g 乳糖 10g 水1000mL 1.6%溴甲酚紫水溶液 1mL pH 7.4-7.6 将 蛋 白 胨 、 乳 糖 加 入 水 中 ， 加 热 调 pH 至 7.4-7.6 , 加 入 1.6%溴甲酚紫水溶液。分装试管内倒置一杜氏小管，塞上 硅胶塞，灭菌。 3、M.R.与V.P.试验培养基 蛋白胨 5g 葡萄糖 5g K2HPO4 5g 水1000mL 分装试管，塞上硅胶塞，灭菌。

4、明胶培养基 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g pH 7.0-7.2 分装试管，塞上硅胶塞，灭菌。 5、硝酸盐培养基 明胶 150g 水1000mL

蛋白胨 10g NaNO3 1g 水1000mL pH 7.6分装试管，塞上硅胶塞，灭菌。 6、产生H2S试验的培养基

牛肉膏 3g 酵母浸膏 3g 蛋白胨 10g FeSO4 0.2g NaCl 5g 硫代硫酸钠 0.3g 琼脂12g 水1000mL pH 7.4分装试管，塞上硅胶塞，灭菌。

7、吲哚试验培养基

牛肉膏 5g 蛋白胨 10g NaCl 5g分装试管，塞上硅胶塞，灭菌。 8、柠檬酸盐培养基

水1000mL pH 7.2

柠檬酸钠 5g NaCl 5g MgSO4 2g K2HPO4 1g (NH4)2HPO4 1g 琼脂20g 1%溴百里酚兰液 8mL 水1000mL pH 6.8 调pH后，加入1%溴百里酚兰液，分装试管，塞上硅胶 塞，灭菌。9、淀粉培养基

牛肉膏 3g 蛋白胨 5g NaCl 5g 15g 水1000mL pH 7.2分装三角瓶，塞上硅胶塞，灭菌。

可溶性淀粉 2g 琼脂

四、方法步骤1、培养基的配制：称药 溶解 加指示剂 分装 塞棉花 高压蒸汽灭菌 2、高压蒸汽灭菌具体操作步骤： 调pH 装入竹篓

1.加入足够量的水于灭菌锅中(至水位线)。2.摆入上述包装好的待灭菌培养基，但不 能摆得太挤，以免影响蒸汽通过和灭菌

效果。 3.加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气(若 为手提式应对角螺旋均匀旋紧)。

4.打开排气阀，通入热源，自开始产生蒸汽至 蒸汽猛烈的喷出而无空气时关紧放气阀。 5.升温升压：继续加热，至压力计读数达 0.1Mpa(121.5°)后保持30分钟。6.到时间后停止加热，待压力下降至常压后， 慢慢打开排汽口，然后打开锅盖， 出灭菌物。注意 取 在压力未降至0时，切勿打开锅盖，否则突然降压， 会招致玻璃器皿破损或培养基沸腾，沾湿棉塞冲出管 外 7.取出灭菌物后，若试管应在琼脂未凝固之时将 试管摆成斜面。应用此法灭菌是否彻底的一个关键是 在压力上升之前必须将锅内的冷空气完全驱尽，否则 压力表指针所指的压力不能代表锅中的真正温度。

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