SOP标准操作程序-BUN

SOP标准操作程序

BUN尿素氮（货号：OSR6134，OSR6234）

实验原理：

尿素氮测量用于诊断和治疗某些肾脏疾病和代谢紊乱。

尿素氮大约占血液中非蛋白氮的75%。它通过肝脏中的氨进行合成，是蛋白质脱氨作用的产物。通过肾小球从血液中过滤尿素到尿中，是消除体内多余氮的主要方法。

血液尿素氮（BUN）水平是肾功能以及肾前状态和肾后状态的度量标准，肾前因素引起的BUN的升高包括心脏代偿失调，缺水或增加的蛋白质分解代谢。水平增加的肾脏因素有急性肾小球肾炎，慢性肾炎，多囊肾，肾纤维化和肾小管坏死。任何类型的泌尿道的梗塞受阻是BUN水平升高的肾后因素1。肾小球清除尿素和肌酸酐，但是，尿素随后部分地被肾小管重吸收，然而肌酸酐却不会。因此，血清尿素氮和血清肌酸酐测定经常同时用于肾功能的不同诊断中。

方法

奥林巴斯AU640尿素氮的测定是基于Talk和Schubert的改良酶法2，在这种方法中，在尿素酶催化下尿素被水解成氨和二氧化碳。在L-谷氨酸脱氢酶（GLDH）的催化下，氨和

，，

α-酮戊二酸转化为谷氨酸。同时，相当于一个摩尔的还原的NADH被氧化345。 一分子尿素在酶催化下，使两分子的NADH被氧化。由于NADH的减少，在340/380nm吸光度变化率与标本中BUN浓度成正比。

脲素酶

尿素+H2O -------------﹥2NH4++CO32-

GLDH

NH4++α-酮戊二酸+NADH-------------﹥L-谷氨酸+NAD++H2O

标本：

病人准备：对于血清，无特殊要求。建议留取24小时尿样。

类型：无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。建议留取24小时尿样，在分析前用去离子水1:10进行稀释。

标本稳定性：如果分析被推迟，标本应冷冻。在室温（15～25℃）下可稳定24个小时，2～8℃下可稳定几天，冰冻起来可稳定23个月1。

尿样在分析前应保存在4～8℃下。尿样可保存在pH值小于4的条件下6。

仪器与材料:

仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪

材料：奥林巴斯AU640尿素氮（BUN） 参与反应成份的最终浓度：

TRIS 缓冲液 100 mmol/L NADH ≥0.26mmol/L 磷酸盐 10mmol/L

EDTA 2.65mmol/L а-酮戊二酸 ≥ 9.8mmol/L 脲素酶（Jack Bean） ≥17.76KU/L ADP ≥2.6mmol/L GLDH（Beef liver） ≥0.16KU/L 其中含有保护剂。

注意：1. 此试剂为体外诊断用。

2. 不要入口，吞下有害。

3. 保护剂为叠氮钠，与下水管中的铜反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠

氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。 试验用试管的直径在12～16mm。

定标液：奥林巴斯定标液（Cat. No. DR0040）

试剂准备：奥林巴斯AU640的BUN是即开即用的。无需特殊准备。 执行参数（性能参数）：以下数据是根据奥林巴斯AU640BUN试剂已经建立的程序。

精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的典型方法9，AU640批内不精密度小于3%，总不精密度小于5%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。

方法学比较：

常规：奥林巴斯AU640 BUN（方法1）与其它奥林巴斯分析仪器（方法2），共同做184个病人标本。相关系数达到0.9991，回归方程如下： AU640常规：BUN方法1=（BUN方法2×1.00）+0.0 病人结果数值分布： 4～96 mg/dL

尿：奥林巴斯AU640 尿的尿素氮方法与其它相似的方法，共同做137个病人标本。相关系数达到0.9991，回归方程如下：

BUN方法1=（BUN方法2×0.985）+4.7 病人结果数值分布： 91～1466 mg/dL

试剂的贮存：1.当保存于2～8℃，不开盖情况下至标签的失效期。

2.开盖后放于仪器的冰箱中可以稳定30天。

变质指示：当BUN试剂有看得见的微生物生长，有浊度或有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

校准：

标准液的准备：奥林巴斯定标液（Cat. No. DR0040）。奥林巴斯定标液是即开即用的，无需特殊准备。

校准程序：每14天需要定标一次。尿素氮定标程序用奥林巴斯定标物，可追踪到全国科学技术学会（NIST）标准参考材料（SRM）909b2。 当有以下情况时需要重新定标：

1． 换试剂批号或出现质控漂移时。 2． 当仪器做完保养后。 3． 重要零件更换时。

质控：在每一批标本中都应把奥林巴斯水平I与II质控血清（DR0061&62）作为未知标本

进行分析。在所有的尿测定中，应建立和利用适当的尿质控，如Bio-Rad 尿化学质控。

操作程序（逐步地）： AU640开机

1.确认两瓶清洗剂有足够的量。 2.打开蒸馏水供应系统的阀门。

3.如果没有设定自动开机，请按分析仪器上的[POWER ON]键。 4.确认打印机为开机并处于联机状态。

5.在[Start Condition]屏幕，输入所需信息，并按F2退出。 6.如果要求输入密码，请输入密码。

7.确认仪器上的在线试剂的位置是否正确、数量（体积）是否充足，不足请添加并在系统状态中的试剂状态检查试剂。

8.在急诊台Wash1的位置的试管中加满一支1N HCL的样品针清洗液。 9. ISE（电极）需要以下步骤定标：

a.在急诊台相应位置放血清/尿高和低值标准液。 b.在系统状态菜单选择ISE状态菜单。 c.选择F5，选定合适的定标条目。

d.定标完成后，确认斜率和因数是否在范围内。

开始分析:

1.把定标、质控、和标本架放在架子传送带上。

2.用鼠标点击屏幕最上方的[START ANALYZER]图标。 3.点击F2退出键，退回到主屏幕。 分析参数 血清：

样品体积 2.5微升 稀释水 0微升 试剂1体积 50微升 稀释水 50微升 试剂2体积 50微升 稀释水 0微升 波长 340/380 方法 Rate 读点 12/18 温度 37℃ 尿（1:10稀释）： 样品体积 3微升 稀释水 0微升 试剂1体积 50微升 稀释水 50微升 试剂2体积 50微升 稀释水 0微升 波长 340/380 方法 Rate 读点 12/18 温度 37℃

完整的实验参数与操作程序可以在AU640用户手册中查到。

计算：

无需手工计算，在37℃每个标本的结果自动以mg/dL打印。

报告结果:

参考范围： 血清10 7-25mg/dL 尿6 7-16g/24小时

参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

不正常结果的处理程序：根据仪器参数的正常值会打印异常标志。 报告格式：

自动地打印37℃mg/dL的报告，如果以血清SI单位（mmol/dL）报告结果，要乘以0.357。如果以尿SI单位（mmol/dL）报告结果，要乘以0.0357

操作过程注意事项：

操作过程的限制性：OlympusAU640 尿素氮的线性范围是2～140 mg/dL，尿的线性范围

是20～1,4 00 mg/dL，样品浓度超过线性上限应稀释重做。在AU640中应用自动重做功能，标本稀释重做后会自动乘以稀释倍数。

超范围的标本也可以在四份生理盐水中加一份血清进行手工稀释，轻轻地混匀，在AU640上当常规标本，结果乘以5。 干扰物质：

研究结果表明BUN受以下物质干扰7：

乳糜 乳糜达到500mg/dL时影响小于3%

溶血 血红蛋白达到500mg/dL时影响小于10% 胆红素 胆红素达到40mg/dL时影响小于10%

Olympus的研究结果是根据现时发表的文献，Olympus美国公司正在进行准确性的研究，对于其它物质的干扰，请参看Young发表的文献8。

参考文献：

Tietz,N.W.(Ed),Fundamentals of Clinical Chemistry,3rd Edition,W.B.Saunders,1987. Talke,H. and Schubert,G.E.,Klinische Wochenschrift,43:174,1965. Manoukian,E. and Fawaz,G.Z.Klin Chem Klin Biochem 7:32,1969. Roch-Ramel,F.,Anal Biochem,21:372,1969.

Reichelt,K.L.,Kvamme,E. and Tveir,B.,Scand J Clin Lab Invest, 16:433,1964.

Kapla,LA and Pesce A.J.,Clinical Chemistry Theory,analysis and correlation,2nd edition,C.V.Mosby,1989.

7. NCCLS,Interference Testing in Clincial Chemistry,EP7-P,1986.

8. Young,D.S.,Effects of Drugs on Clincial Laboratory Tests,4th Edition,AACC Press,1995. 9. NCCLS,Evaluation Protocol EP5-T2,1992.

10. 200 Blood donors from North Texas. Data on file. 1. 2. 3. 4. 5. 6.

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/3bvq.html