天然药化实验

实验一 天然产物化学成分系统预试验

天然产物中所含的化学成分种类很多，在深入研究之前应首先了解其中含有哪些类型的化学成分，如生物碱、皂苷、黄酮类等等。这就需要进行各类化学成分的系统定性预试验。或根据研究的需要进行单项预试法来初步判断。 一、实验目的与要求

掌握未知成分的天然产物是怎样初步提取分离的，熟悉各主要成分的试管试验、沉淀反应和纸层析、薄层层析的方法并根据试验结果判断含有什么类型的化学成分。 二、基本原理

利用各类成分的颜色反应和沉淀反应，对天然产物的提取液进行检查可以初步判断其中的化学成分。由于提取液大多数颜色较深，影响对颜色变化的观察，可以使用薄层层析（TLC）或纸层析（PC）等方法对天然产物的提取液进行初步分离，再进一步检查。 三、实验内容：

利用不同成分在各种溶剂中的溶解度的不同，一般可采用以下3种溶剂分别提取，试验。

1．水浸液：取中草药粗粉5 g加水60 ml，在50~60℃的水浴上加热1小时，过滤，滤液进行下列试验。

检查项目 糖 *1、酚醛缩合反应 *2、菲林试剂 试 剂 名 称 酚类 鞣质 △ 1% FeCl8试剂 △1tCl8试剂 苷类或多糖 *1、酚醛缩合反应 皂苷 生物碱 *

*2、加6NHCl酸化，加热煮沸数分钟，冷后仔细观察有无絮状沉淀 *3、菲林试剂，观察水解前后Cu2O沉淀量有无增加。 * 泡沫试验 *1、碘化铋钾试剂 *2、硅钨酸试剂 在试管进行，△在滤纸或硅胶CMC-Na薄层板上进行，下同。

? 糖鉴定

（1）α-萘酚-硫酸试剂（Molish反应） 检查还原糖。 溶液I：10％α-萘酚乙醇溶液。溶液II：硫酸。

取1ml样品的稀乙醇溶液或水溶液，加入溶液I 2滴～3滴，混匀，沿试管壁缓缓加入少量溶液II，二液面交界处产生紫红色环为阳性反应。 （2）斐林试剂检查还原糖。

溶液I：6．93g结晶硫酸铜溶于100ml水中。溶液II：34．6g酒石酸钾钠、10g氢氧化钠溶于100ml水中。

取1ml样品热水提取液，加入4滴～5滴用时配制的溶液I、II等量混合液，在沸水浴中加热数分钟，产生砖红色沉淀为阳性反应。

如检查多糖和苷，取1ml样品水提液，加入1m110% 盐酸溶液，在沸水浴上加热10min，过滤，再用10％氢氧化钠溶液调至中性，按上述方法检查还原糖。

? 酚类鉴定

（1）三氯化铁试剂 检查酚类化合物、鞣质1％～5％三氯化铁水溶液或乙醇溶液，加盐酸酸化。取1ml样品的乙醇溶液，加入试剂1滴～2滴，显绿、蓝绿或暗紫色为阳性反应。作色谱显色剂用，喷洒后，显绿或兰色斑点为阳性。

2．乙醇提取液

取中草药粗粉5 g，加5~12倍量95%乙醇，在水浴上加热回流提取1小时，过滤，滤液留2 ml作（1）项试验，其余回收乙醇至无醇味，并浓缩成浸膏状，浸膏分为二部分，一部分加少量2% HCL振摇溶过滤。分出酸液，作（2）项式验，附于滤纸上的一部分再以少量乙醇溶解，溶液作（3）项试验；另一部分浸膏以少量乙酸乙酯溶解，溶液置分液漏斗中加适量5% NaOH振摇，使酚性物质及有机酸等转入下层氢氧化钠水溶液中，剩下的乙酸乙酯为中性部分，用蒸馏水洗去碱性即可备用，将乙酸乙酯液2~3 ml，在水浴上蒸干，以1~2 ml乙醇溶解作（4）项试验。

（1）项试验

检 查 项 目 试 剂 名 称 结 果 （2）项试验

检 查 项 目 *酚 类 △1% FeCl3 鞣 质 △1% FeCl3 生 物 碱 1、碘化铋钾试剂 2、硅钨酸试剂 3、苦味酸试剂 **试 剂 名 称 结 果 （3）项试验

检 查 项 目 试 剂 名 称 结 果 （4）项试验

黄 酮 △1、1% AlCl3试剂 *蒽 醌 △1、10% KOH液 △2、0.5% Mg(Ac)2试剂 2、盐酸镁粉反应 检 查 项 目 试 剂 名 称 结 果

3、石油醚提取液

*香豆素与萜类内酯 1、氨基安替比林—铁氰化钾呈色反应 取中草药粗粉1 g，加10 ml石油醚（沸程60~90℃），放置2~3小时，过滤，滤液置表面皿上任其挥发，残留物进行下列试验： 检 查 项 目 试 剂 名 称 结 果

? 黄酮类鉴定

（1）盐酸-镁粉试剂 检查黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）类化合物

取1ml样品的乙醇溶液，加入数毫克镁粉，滴加数滴盐酸，必要时水浴上微热，显红-紫色为阳性反应。 （2）三氯化铝试剂检查有邻二酚羟基或3-羟基、4-酮基或5-羟基、4-酮基的黄酮类化合物 1％三氯化铝乙醇溶液或5％三氯化铝乙醇溶液。

喷洒前、后将薄层板置日光下和紫外光灯下观察，呈黄色或黄绿色荧光为阳性反应，也可在滤纸上或试管中进行。

（3）醋酸镁试剂检查黄酮类，二氢黄酮类化合物，及羟基蒽醌类衍生物 1％醋酸镁甲醇溶液。

在滤纸或薄层板上，点1滴样品醇溶液，挥去醇后，点1滴试剂于样品斑点边缘，加热干燥，于紫外灯下观察，黄酮类显黄色荧光，二氢黄酮类呈天蓝色荧光。显橙红色为大黄素型蒽醌，显紫色为茜草型蒽醌。

? 生物碱鉴定试剂

（1）改良碘化铋钾试剂（生物碱通用显色剂）

溶液I：0.85g次硝酸铋溶于10ml冰醋酸，加水40ml。溶液II：8g碘化钾溶于20ml水中。溶液I和II等量混合，于棕色瓶中可以保存较长时间。目前市场上有碘化铋钾试剂可供直接配制：7.3g碘化铋钾、冰醋酸10ml加水60ml。

取1m1样品的稀酸溶液加1滴～2滴试剂，产生桔红色浑浊或沉淀为阳性反应。如作薄层色谱显色剂，取混合液1m1、醋酸2ml、水10ml混合即得。喷洒后呈桔红色斑点为阳性反应 （2）苦味酸试剂（生物碱通用沉淀试剂） 苦味酸1g溶于100ml水中。

取1ml样品中性溶液，加入试剂1滴～2滴，产生黄色晶形沉淀。 （3）硅钨酸试剂（生物碱通用沉淀试剂）

1g硅钨酸溶于20ml水中，加10％盐酸使成pH2左右。

取1ml样品的稀酸溶液，加入1滴～2滴试剂，产生白色至褐色沉淀为阳性反应。 四、药品试剂：

*甾体或三萜类 1、醋酐－浓硫酸试验 挥发油和油酯 石油醚提取液滴于滤纸片上，观察有无油斑并在加热后能否发挥 中药饮片每组每种8克 ? 生物碱试剂

（1）碘化铋钾(Dragendorff)试剂：出现桔红色或黄色沉淀。

（2）苦味酸(Hager)试剂，样品液需调至中性后加试剂，出现黄色晶形沉淀。

（3）硅钨酸(Bertrand)试剂：出现淡黄色或灰白色沉淀，在薄层板上应时，加热后出现黑色斑点。 ? 酚类、鞣质试剂

1tCl3水或乙醇试剂：墨绿色沉淀 ? 氨基酸、蛋白质试剂 茚三酮(Ninnydrin)试剂 ? 糖、多糖和苷试剂

（1）Molish试剂（液面交界处紫红色环）：α-萘酚试剂 （2）菲林反应(Fehling试剂)（砖红色沉淀） 溶液Ⅰ：69.3克结晶硫酸铜溶于1000毫升水中。

溶液Ⅱ：349克洒石酸钾钠及氢氧化钠100克，溶于1000毫升水中。 皂苷试剂 浓硫酸试剂 黄酮类试剂 盐酸—镁粉试剂 醋酸镁反应 1%三氯化铝乙醇液 香豆素试剂 1%三氯化铁水溶液

Gibb氏反应：4-氨基安替比林-铁氰化钾(Emerson) 4、玻璃仪器：（每2人或3人一组，每组一套） (1) 试管10个，滴管2个，玻棒1支

（2）100ml圆底烧瓶一个，250ml圆底烧瓶一个，25cm球型或蛇型冷凝管一个，有机溶剂蒸馏回收装置1套，50ml烧杯3个，25ml具塞锥形瓶 （3）有孔白瓷板1个 （4）滤纸，乳胶管、药勺

仪器：（1）普通天平（2）分析天平（3）电水浴锅 五、思考题

实验二 芦丁的提取、分离及鉴定

一、目的要求

1．以芦丁为实例学习黄酮类成分的提取分离方法。 2．掌握用黄酮苷水解制取黄酮苷元的方法。 3．了解黄酮类化合物的一般性质。

二、基本原理

槐米系豆科属植物槐树SopHora japonica.L.的花蕾，历来作为止血药，治疗痔疮、子宫出血、吐血、鼻出血，并有清肝泻火，治疗肝热目赤，头痛眩晕的功能。其主要化学成分为芸香苷（芦丁），含量高达12％～20％，芸香苷广泛存在于植物中，现已发现含有芸香苷的植物高达70种以上，尤以槐米和乔麦中含量最高。药理实验证明芸香苷有调节毛细血管渗透作用，临床上用作毛细血管性止血药，常作为高血压症的辅助用药。

槐米中主要成分的物理性质 1．芸香苷（芦丁，rutin）：C27H30O16?3H2O，淡黄色针状结晶，mpl74℃～178℃，无水物为188℃～190℃。溶解度：冷水中1：8000，热水中l：200，冷乙醇中1：300，热乙醇中1：30，冷吡啶中1：12，微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、氯仿、石油醚等溶剂。易溶于碱液，呈黄色，酸化后又析出，可溶于硫酸和盐酸，呈棕黄色，加水稀释又析出。UV?EtOHmaxnm：259，299sh，359。

2．槲皮素（quercetin）：C15H10O7?2H2O，黄色结晶，mp313℃～314℃，无水物为316℃。溶解度：冷乙醇中1：290，沸乙醇中1：23，可溶于甲醇、乙酸乙酯、吡啶、丙酮等溶剂，不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。 UV?EtOHmaxnm：255，269sh，301sh，370。

OHHOO葡萄糖-鼠李糖OHOHO

芸香苷（芦丁，rutin）

1．芸香苷分子中具有酚羟基，显弱酸性，在碱水中成盐增大溶解能力，用碱水为溶剂煮沸提取，提取液加酸酸化后又成为游离的芸香苷而析出。利用芸香苷对冷水和热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。

2．黄酮苷可通过酸水解得到苷元和糖，并可通过薄层色谱法和纸色谱法进行检识。 3．利用黄酮类对紫外光有特定吸收的特征进行结构测定；也可制备乙酰化物进行结构鉴定。

三、实验内容

1自槐花米中提取芦丁： (1)．提取方法：

称取槐花米粗粉20g（压碎），加沸水300m1，加热煮沸30min，四层纱布趁热过滤，残渣同法再操作一次，合并两次滤液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，减压抽滤，用蒸馏水洗涤芸香苷结晶，抽干，得粗制芸香苷，置空气中干燥后，称重。

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