生化基础实验

实 验 讲 义

基础实验

生物科学与工程学院1

生 化

实验一 实验基本操作技能培训

一、 仪器的洗涤与干燥 1. 仪器的洗涤

化学实验中经常使用的玻璃仪器和瓷器，常常由于污物和杂质的存在而得不出正确的 结果。因此，在进行化学实验时，必须把仪器洗涤干净。玻璃仪器的洗涤方法很多，应根据实验的要求、污物的性质、沾污程度来选择。常用的洗涤方法如下：

(1)用水刷洗

用水和毛刷刷洗，再用自来水冲洗几次，可除去附在仪器上的尘土、可溶性和不溶性杂质。注意洗刷时不能用秃顶的毛刷，也不能用力过猛，否则会戳破仪器。

(2)用去污粉、肥皂洗、洗衣粉、洗涤剂洗

去污粉由碳酸钠、白土、细砂等组成，它与肥皂、合成洗涤剂一样，能去除油污和一些有机物。由于去污粉中细砂的摩擦和白土的吸附作用，使得洗涤的效果更好。洗涤时，可用少量水将要洗的仪器润湿，用毛刷蘸取少量去污粉刷洗仪器的内外壁，最后用自来水冲洗。 用去污粉、洗衣粉、洗涤剂洗这些洗涤剂可以洗去油污和有机物质。若油污和有机物质仍然洗不干净，可用热的碱液洗。 (3)用铬酸洗液洗

铬酸洗液是由浓硫酸和重铬酸钾配制而成的，具有很强的氧化性，对有机物和油污的去污能力特别强。使用铬酸洗液时要注意被洗涤的仪器内不宜有水，以免洗液被冲淡或变绿而失效。能用一般洗涤剂洗净的器皿，尽量不要选用洗液洗涤。

(4)用特殊的试剂洗

应根据沾在器壁上污物的性质，采用合适的方法或药品来处理。例如，沾在器壁上的二氧化锰用浓盐酸处理；AgCl沉淀可以用氨水洗涤；硫化物沉淀可选用硝酸加盐酸洗涤等等。

洗涤时应遵循“少量多次”的原则，一般以洗三次为宜。 2．玻璃仪器的干燥

可根据不同的情况，采用下列方法将洗净的仪器干燥： (1)晾干

不急用的仪器在洗净后，可倒置在干净的实验柜内或仪器架上任其自然干燥。 (2)烘干

将洗净的仪器尽量倒干水后放入烘箱内烘干。放入烘箱前要先把水沥干，放置仪器时，仪器的口应朝下。

(3)吹干

用吹风机或气流烘干器把仪器吹干。

3. 基本度量仪器的使用和滴定分析的基本操作 1)量筒

量筒是实验中经常使用的度量液体的仪器之一，常见量筒的容量有10 mL、20 mL、50 mL、100 mL 、500 mL等，可根据需要来选用。量取液体时，应用左手持量筒，并以大拇指指示所需体积的刻度处，右手持试剂瓶，将液体小心倒入量筒。读取刻度时，应让量筒垂直，使视线与量筒内液面的弯月形最低点处于同一水平面上，偏高或偏低都会产生误差。量筒不能作反应器用，也不能装热的液体。 2)滴定管

滴定管是用来进行滴定的器皿，用于测量在滴定中所用溶液的体积。

2

酸碱滴定管

滴定管一般分为两种，一种是酸式滴定管，另一种是碱式滴定管。各有白色、棕色之分。酸式滴定管的下端有玻璃活塞，可盛放酸液或氧化性溶液，不能盛放碱液，因为碱液会腐蚀玻璃，使活塞不能转动。盛放碱液时要用碱式滴定管，它的下端连接一橡皮管，内放一个比橡皮管管径稍大的玻璃珠作为开关以控制溶液的流出，橡皮管下端再连一尖嘴玻璃管，这种滴定管不能盛放会腐蚀橡皮的溶液，例如酸或氧化性溶液等。

滴定管洗涤：在洗涤前，应检查酸式滴定管的玻璃活塞与塞槽是否符合，活塞转动是否灵活。碱式滴定管下端连接一段橡皮管的粗细、长度是否适当，橡皮管的内管径应稍小于玻璃珠的直径，玻璃珠应圆滑，橡皮管应有弹性，否则难于紧固玻璃珠，操作时易上下移动而影响滴定。滴定管在用前必须仔细洗涤，当没有明显污物时，可以直接用自来水冲洗，或用滴定管刷蘸肥皂水刷洗(注意滴定管刷的刷毛必须相当软，刷头的铁丝不能露出，也不能向旁边弯曲，以免刷伤内壁)，然后再用自来水洗去肥皂水。洗刷后的滴定管，应将其直立，使水流尽，若滴定管的内壁透明并不附着液滴，表示已洗净。洗净后，滴定管用蒸馏水淌洗三次，第一次用蒸馏水10 mL，第二次及第三次各用蒸馏水5 mL。每次加入蒸馏水后，边转边向管口倾斜使蒸馏水布满全管，并稍振荡，将管直立，使水流尽。

在用自来水洗涤后，应检查滴定管是否漏水。检查酸式滴定管时，把玻璃活塞关闭，用水充满至“0”刻度线以上，直立约2分钟，仔细观察有无水滴滴下，有无水由活塞隙缝渗出。然后将活塞转180°，再如此直立1～2 分钟后观察有无水滴滴下或从活塞隙缝渗出。如果检查碱式滴定管，只需装水直立2分钟即可。

如果发现漏水或酸式滴定管活塞转动不灵时，把酸式滴定管取下将活塞涂油，碱式滴定管则需换玻璃珠或橡皮管。活塞涂油时，把滴定管平放在桌面上，先取下活塞上的橡皮圈，再取下活塞(拿在手上、放在干净的表面皿或滤纸上均可)，用滤纸把活塞、活塞套、活塞槽内的水吸干，用手指粘少量凡士林擦在活塞两头，沿玻璃塞两端圆周各涂一薄层(如图3-6所示)，但要避免涂得太多，尤其是在孔的近旁，油层要均匀涂满全圈，要尽可能薄些。涂完以后将活塞一直插入塞套中(不要转着插)，插活塞时孔应与滴定管孔平行。然后向一个方向转动活塞，直到内外面观察时全部都透明为止。如果发现旋转不灵活，或出现纹路，表示涂油太多。遇到这些情况，都必须重新涂油。注意在套橡皮圈时，应该将滴定管放在桌上，一手顶住活塞大头，一手套橡皮圈或系橡皮圈，以免将活塞顶出。然后再用前面所介绍的方法检查是否漏水。

按前述方法用自来水冲洗干净以后，分别用蒸馏水和标准溶液各洗涤两到三次。用标准溶液淌洗时，第一次用10 mL，第二次及第三次各用5 mL。每次加入溶液后，也是边转边向管口倾斜使溶液布满全管，直立以后，打开活塞使溶液从管尖口放出。在放出时一定尽可能完全放尽，然后再洗第二次。但要特别注意，在装入标准溶液之前应先将试剂瓶中的标

3

准溶液摇匀，使凝结在试剂瓶内壁的水混入溶液中(这在天气比较热或室温变化较大时更有必要)，混匀后，溶液应从试剂瓶中直接倒进滴定管，而不要经过其他器皿(如烧杯、漏斗、 滴管等)。一定要注意，不要使溶液从试剂瓶移到滴定管的时候，改变它的浓度。 滴定管读数：读取滴定管容积刻度的数值，称为读数。正确地读数是减少容量分析实验误差的重要措施。读数时应遵守下列规则：

(1)读数前应观察，管壁是否挂有水珠，管内的出口尖嘴处有无悬挂液滴，管嘴是否有气泡。

(2)读数时应把滴定管从滴定管架上取下，用右手大拇指和食指捏住管上部无刻度部位，使滴定管自然垂直，然后读数。每次装入溶液或放出溶液后，应等1～2分钟，待附着在管内壁的溶液流下后再读数。

(3)对于无色和浅色溶液，应读取弯月面下缘实线的最低点，视线应与弯月面下缘实线的最低点相切。对于有色溶液，如KMnO4、I2溶液等，视线应与液面两侧的最高点相切。若滴定管的背后有一条蓝线或带，无色溶液就形成了两个弯月面，并且相交于蓝线的中线上，读数时读此交点的刻度。

(4)滴定时，最好每次从0.00 mL开始，或从“0～5 mL”的范围内的任一刻度开始，这样可以减少体积误差。滴定管读数必须准确至0.01 mL。

(5)读取的读数立即记录在实验记录本上。

滴定操作：使用酸式滴定管时，用左手控制活塞，大拇指在管前，食指和中指在管后，三指轻轻捏住塞柄，无名指和小指向手心弯曲，手心内凹，以防活塞被顶出造成漏液(如图3-9所示)。滴定时，右手握锥形瓶上部，将滴定管下端伸入锥形瓶口约l cm，然后边滴加溶液边向同一方向摇动锥形瓶。滴定的速度开始时可稍快，一般为3～4/秒滴左右，但不能滴成水线，应呈“见滴成串”。接近终点时，应逐滴加入，即加一滴摇动后再加，马上到达终点时，应控制半滴加入，即将活塞稍稍转动，使半滴悬于管口，用锥形瓶内壁将其沾下，再用洗瓶吹洗内壁，使附着的溶液全部流下，然后摇动锥形瓶。如此继续滴定至滴定终点为止。

酸式滴定管的操作 碱式滴定管的操作

使用碱式滴定管时(如图3-10所示)，左手捏住乳胶管，拇指在前，食指在后，其余三指辅助夹住出口管，用拇指和食指捏住玻璃珠中上部，向一边挤压玻璃珠外面的乳胶管，使玻璃珠和乳胶管之间形成一个狭缝，溶液即可流出。注意不要用力捏玻璃珠，也不要使玻璃珠上下移动，更不要捏玻璃珠下部的乳胶管，以免进入空气形成气泡，影响读数。

4

滴定通常在锥形瓶中进行，必要时也可以在烧杯中进行(如图3-11所示)。把烧杯放在实验台上，滴定管的高度应以其下端伸入烧杯内约1 cm为宜。滴定管的下端应在烧杯的左后方处，如放在中央，会影响搅拌；如离杯壁过近，滴下的溶液不易搅拌均匀。左手控制滴定管滴加溶液，右手持玻璃棒搅拌溶液。玻璃棒应作圆周搅动，不要碰到杯壁和底部。接近终点加半滴时，可用玻璃棒下端轻轻沾下，再浸入烧杯中搅匀。 3）容量瓶

容量瓶是一个细颈梨形的平底瓶。瓶塞是带有磨口的玻璃在烧杯中滴定 塞，细颈上刻有环形标线，瓶上标有容积(mL)和标定时的温度(一

般为20℃)。在指定的温度下(一般为20℃)，当液体充满到标线时，液体体积恰好与瓶上所标的体积相等。容量瓶有10mL、25mL、50mL、100mL、250mL、1000mL、2000 mL几种规格，并有白、棕两色，棕色的用来配制见光易分解的试剂溶液。

容量瓶不能加热，磨口瓶塞是配套的，不能互相调换。容量瓶用于配制准确的一定体积的溶液。也用于标准的浓溶液稀释。

在使用容量瓶之前，要选择好容量瓶：

(1)要选择与所要求配制的溶液体积相一致的容量瓶。 (2)要选择瓶塞与瓶口相符合、不漏水的容量瓶。

选好容量瓶后，首先仔细检查有无裂痕破损，然后进一步检查瓶口与瓶塞间是否漏水。检查瓶口与瓶塞间是否漏水，可在瓶中放入自来水到标线附近，将瓶塞塞好，左手拿住容量瓶瓶口并用食指按住塞子，右手指尖顶住瓶底边缘，倒立2分钟左右，观察瓶塞周围是否有水渗出，如果没有，把瓶直立，转动瓶塞180°后，再倒立过来试一次。这样做两次检查是必要的，因为有时瓶塞与瓶口不是在任何位置都是密合的。

容量瓶在使用前要充分洗涤干净，无论用什么方法洗，绝对不能用毛刷刷洗内壁。洗涤时，盖好瓶塞，充分振荡，洗完后立即将瓶塞塞好，以免灰尘落入或瓶塞被污染。

用容量瓶配制溶液时，如果是用固体配制准确浓度的溶液(或称标准溶液)，一般是将固体物质称在大小适当的干净烧杯中，往其中加入少量的蒸馏水或适当溶剂使之完全溶解。溶解过程不论放热或吸热，都需待溶液至室温时，才能定量地将溶液转入容量瓶中。转移时，要把溶液顺玻璃棒加入，玻璃棒下端要靠住瓶颈内壁，使溶液顺内壁流入瓶中。注意玻璃棒下端的位置最好在标线稍低一点的地方，不要高到接近瓶口，玻璃棒稍向瓶中心倾斜，烧杯嘴应靠近瓶口并紧靠玻璃棒，使溶液完全顺玻璃棒流入瓶内，待溶液全部流尽后，将烧杯轻轻向上提(烧杯嘴口仍应紧靠玻璃棒)，同时直立，使附着在玻璃棒与烧杯嘴之间的溶液流入烧杯中或容量瓶内，然后先把玻璃棒放入烧杯中，才能把烧杯拿开放在桌上，用洗瓶吹水洗涤烧杯内壁和玻璃棒接触到溶液的部分3次，每次用水应尽量少些为宜，每次洗涤的水溶液应无损地转入容量瓶中。然后慢慢加蒸馏水至接近标线稍低1 cm左右，等1～2分钟，使黏附在瓶颈内壁的水流下后，再用细而长的滴管加蒸馏水恰至标线，这一过程称为定容。用滴管加水时，视线要平视标线，然后将滴管伸入瓶颈使管口尽量接近液面，稍向旁倾斜，使水顺壁流下，注意液面上升，滴管应随时提起，勿使溶液接触滴管，直到弯月面下缘最低点与标线相切为止。定容以后，塞好瓶塞。左手拇指在前，中指、无名指及小指在后拿住瓶颈标 线以上部分，右手托住瓶底。如果容积小于100mL的容量瓶，就不必用右手托住容量瓶瓶底，以免由此造成的温度变化对小体积产生较大的影响。将容量瓶倒转，使气泡上升到顶，再充分振荡，如此反复3～5次，即可摇匀。

容量瓶不能久贮溶液，尤其是碱性溶液会侵蚀瓶塞，使瓶塞无法打开，配制好溶液后，应将溶液倒入清洁干燥的试剂瓶中贮存。容量瓶不能用火直接加热及烘烤。

5

4) 移液管、吸量管

用于准确移取一定体积的溶液的移液管，通常有两种形状，一种移液管中间有膨大部分，称为胖肚移液管(胖肚吸管)，常用的有5mL、10mL、25mL、50mL等几种；另一种是直形的，管上有刻度，称为吸量管(刻度吸管)，常用的有1mL、2 mL、5 mL、10 mL 等多种(如图3-15所示)。

移液管和吸量管 洗涤移液管 移液管的使用 用移液管或吸量管移取溶液前，先将用蒸馏水洗净过的移液管或吸量管用少量被移取的溶液淌洗2～3次，以免被移取溶液的浓度发生改变。为此，可倒少许溶液于一洁净而干燥的小烧杯中，用移液管吸取少量溶液，将管横向转动，使溶液流过管内标线下所有的内壁，然后使管直立将溶液由尖嘴口放出。

吸取溶液时，一般可以用左手拿洗耳球，右手把移液管插入溶液中吸取。当溶液吸至标线以上时，马上用右手食指按住管口，取出并用滤纸擦干下端，并把管尖接触于干净小烧杯壁上。然后转动移液管，稍松食指，使液体平稳下降，直至溶液的弯月面与标线相切，立即按紧食指，将移液管垂直放入接受溶液的容器中，管尖与容器壁接触(如图3-17所示)，放松食指，使溶液自由流出，流完后再等15秒左右，残留于管尖的液体不必吹出(刻“吹”字的移液管例外)，因为在校正移液管时，也未把这部分液体体积计算在内。移液管使用后，应立即洗净并放在移液管架上。 4. 药品的取用方法 1) 液体试剂的取用

从滴瓶或者试管、锥形瓶等中取液体，使试剂滴入试管中(如图3-30所示)，试管应垂直不要倾斜。滴管或移液管尖决不能伸入所用容器中，以免触及器壁而沾污药品；装有试剂的滴管或移液枪不能平放或管口向上斜放，以免试剂倒流腐蚀。倒入试管里液体的量一般不超过其容积的1/3。

正确 不正确

2) 固体试剂的取用

(1)取用试剂前应看清标签。取用时，先打开瓶塞，将瓶塞倒放在实验台上。如果瓶塞一端不是平顶而是扁平的，可用食指和中指将瓶塞夹住(或放在清洁的表面皿上)，决不可将它横置桌面上以免污染。不能用手接触化学试剂，应根据用量取用试剂。取用完毕，一定要

6

把瓶塞盖严，绝不允许将瓶塞张冠李戴。然后把试剂瓶放回原处，以保持实验台整齐干净。 (2)要用清洁、干燥的药匙取试剂。用过的药匙必须洗净擦干后才能再使用。

(3)注意取药不要超过指定用量，多取的不能倒回原瓶，可放在指定的容器中供他人使用。

(4)一般固体试剂可以放在干净的纸或表面皿上称量。具有腐蚀性、强氧化性或易潮解的固体试剂应放在表面皿或玻璃容器内称量。

(5)往试管(特别是湿的试管)中加入固体试剂时，可用药匙或将取出的药品放在对折的纸槽上，伸进试管约2/3处，小心地将药品倒入试管内。加入块状固体试剂时，应将试管倾斜，使其沿着试管壁慢慢滑下，以免碰破试管

二、常用仪器及设备的使用：

1. 移液枪（微量移液器）使用方法：

1)选择适当的微量移液器：不同型号的微量移液器，各有其吸取体积范围，请依取用溶液体积取用适当的微量移液器。 QY100 20ul ~ 100ul QY200 50ul ~ 200ul QY1000 100ul ~ 1000ul

2)设定体积：设定体积时，请勿将体积调整圈转到超过最低或最高的使用范围,以免损坏移液枪。

3)套上微量移液器头，吸取溶液： 吸取溶液时，尖端请先套上微量移液器头 (枪头)，QY1000 使用藍色微量移液器头，QY200 及QY100 使用黄色微量移液器头。 标准操作：

适用的液体：水、缓冲液、稀释的盐溶液和酸碱溶液。 1)按到第一档，垂直进入液面几毫米。

2)缓慢松开控制按钮，否则液体进入吸头过速会导致液体倒吸人移液器内部吸人体积减少。

3)打出液体时贴壁并有一定角度，先按到第一档，稍微停顿1s后，待剩余液体聚集后，再按到第二档将剩余液体全部压出。

适用的液体：黏稠或易挥发液体

在移取黏稠或易挥发的液体时，很容易导致体积误差较大。为了提高移液准确性，可以采取以下方法：

1)移液前先用液体预湿吸头内部，即反复吸打液体几次使吸头预湿，吸液或排出液体时最好多停留几秒。尤其对于移取体积大的液体，建议将吸头预湿后再移取。

2)采用反相移液法：吸液时按到第二档，慢慢松开控制按钮，打液时按到第二档，部分液体残留在吸头内。

3)适当加热液体，使其易于吸取。 使用注意事项：

1) 勿将微量移液器本体浸入溶液中。

2) 吸液时，移液器本身倾斜，导致移液不准确(应该垂直吸液，慢吸慢放)。

3）吸取黏度高之试液，请先将微量移液器头尖端以刀片或剪刀将出口切大，并先行预润后再吸取。

4) 用大量程的移液器移取小体积样品(应该选择合适量程范围的移液器)。 直接按到第二档吸液

5）吸取酸液或具腐蚀性溶液后，请将微量移液器拆解开，各部位零件以蒸馏水冲洗干

7

净，擦干后再正确组合回復原狀。

6) 微量移液器的任何部份切勿用火烧烤，亦不可吸取温度高于70℃的溶液，避免蒸气侵入腐蚀活塞。

7) 套有微量移液器头的微量移液器，无論微量移液器头中是否有溶液，均不可平放，需直立架好。

2. 分析天平及电子天平的使用方法：

1) 事先检查电源电压是否匹配（必要时配置稳压器），接通电源并预热使天平处于备用状态。并检查并调整天平至水平位置。 2) 预热足够时间后打开天平开关，天平则自动进行灵敏度及零点调节，使天平处于零位，否则按去皮键。待稳定标志显示后，可进行正式称量。

3) 称量时将洁净称量瓶或称量纸置于称盘上，关上侧门，轻按一下去皮键，天平将自动校对零点，然后逐渐加入待称物质，直到所需重量为止。记录读数。

4) 将称量瓶或称量纸拿出，转移所称量物质至锥形瓶或烧杯，将称量纸扔到垃圾桶，称量瓶清洗干净。按天平去皮键清零，以备再用。

5）称量结束后，或者关上侧门，切断电源，并做好使用情况登记。 分析天平及电子天平使用注意事项：

1）在使用前调整水平仪气泡至中间位置。 2）电子天平应按说明书的要求进行预热

3）称量时应从侧门取放物质，读数时应关闭箱门以免空气流动引起天平摆动。前门仅在检修或清除残留物质时使用。

4）称量易挥发和具有腐蚀性的物品时，要盛放在密闭的容器中，以免腐蚀和损坏电子天平。

5）操作天平不可过载使用以免损坏天平.目前我们所用天平最大量程为200g.

3. 722S分光光度计使用方法：

1）预热：开机后灯及电子部分需预热平衡，故一般开机20min 后可开始测定。 2）调波长：用旋钮调节，波长显示窗读数时目光垂直观察。 3）调零及调100%T‘进入测试状态。

操作：打开样品槽盖，按100%键，即可自动调整到零位。盖好盖按下“100%T”即可自动调100%。（注：调100% 可能影响0%，调整后请检查0%，如有变化可重调0%一次）。 4）改变样品槽位置让不同样品进入光路。槽有四位置，用拉杆改变，离测试者最近为“0”，依次为“1”、“2”、“3”位置。将空白放入“0”号位置，盖好盖子，按100%键调零，拉动拉杆，可依次读取“1”、“2”、“3”位置各管吸光度值。

5）确定滤光片位置：当测试波长在340~380nm 内作高精度测试可将拨杆推向前，通常不用此滤光片，可将其置于400~1 000nm 处。 6）改变模式

透射率：用于透明液体和固体测量透射测量。

吸光度：用于标准曲线法或绝对吸收法定量分析，在作动力学测试时可使用。 浓度因子：用于在浓度因子法浓度直读时设定浓度因子。

浓度直读：用于标样法浓度直读时，作设定和读出。注：各标尺的转换用MODE 键并由各自指示灯指示。 注意事项：

1）操作应轻缓，不要将样品溶液弄到仪器上

8

2）不要用手拿比色皿的光面 3）比色皿用毕应及时清洗干净

4. METLER DELTA 320 pH计使用方法： 1）打开电源开关，进入测量状态。

2）校正：长按“模式”键，进入“Prog”状态，按“模式”进入b＝2，按 ∧或∨选择b ＝1或b＝3，LCD会逐一显示盖缓冲溶液组内的缓冲溶液pH值，按“模式”确认，按“读数退回正常测量状态。

3）将电极放在一个标准缓冲液中并按“校正”，仪表将显示相应缓冲液pH。

4）用去离子水冲洗电极，将电极放入下一个标准缓冲液中，重复3，进行两点或三点校准，仪器更新零点和斜率，标定完成，按“读数”退回测量状态。

5）用蒸馏水清洗电极头部，用被测溶液再洗一次，把电极浸入被测溶液中，再用玻璃棒搅拌，使溶液均匀，按“读数”键测量，仪器稳定后显示 A，在显示屏上读数即溶液的pH值。

6）测量结束，及时将电极保护套套上。 注意事项：

1）一般情况下，24h内仪器不需再标定。

2）电极保护套内及时补加3M KCl，切忌浸泡在蒸馏水中，防止干涸。

3）仪器pH测量范围为0－14.00，温度范围为-5-105℃，精确度0.01pH、1mV。 4）如果斜率下降、响应速度慢或电极膜干涸，将电极头浸入0.1MHCl中过夜。

5. Sigma SK－30低温高速冷冻离心机操作方法： 操作步骤：

1）装好所需转子：本实验室Sigma离心机配有两个型号的转子：12150－H，容量6×140g,最高转速21000转/min；12154－H，容量24×5g,最高转速26000转/min，离心中，一定要注意，转子和转头要同一型号。用专用扳手拧紧转轴螺母，盖好同型号转子的盖子，拧紧。

2) 设置参数：打开机身背侧电源开关，机身前面面板有数字显示，转动调节旋钮，可在面板上“DREHZAHL”（离心速度，rpm）、“RZB”（相对离心力，×g）“ZEIT”（离心时间）、“TEMP”（离心温度）、“ROTOR”（转子选择）等显示栏之间选择，选择需设定参数，按下调节旋钮，“SET”同时被选择，转动调节旋钮，设定温度、离心速度、时间、转子型号等参数，盖好离心机盖门，等待降温。

3）离心：温度达到所需温度后，打开离心机盖门，拧开盖子，放入已经平衡过的离心样品，拧紧盖子，关闭离心机盖门，启动按钮和开盖按钮亮。按下启动按钮，开始离心。

4）等离心机完全停下，开盖指示灯亮后，打开离心机，取出样品，盖好盖子，关闭离心机。

如果在离心过程中，发现有异常情况，立即按下“停止” 按钮，如不能完全停止，可关闭电源，等待离心机完全停止。 注意事项：

1、本设备最大离心力可达60000 g以上，离心转速范围100 ～ 30000 rpm（依据转头型号确定），设置不能超过最大转速，设定步长1 rpm，温度范围-20℃---+40℃，最大功率1300W。 2、离心前，一定要平衡，对称放置，离心期间，不得离人。

9

实验二 氨基酸纸层析法

一、实验目的

学习纸层析法的基本原理和方法 二、实验原理

氨基酸混合液经纸层析,由于不同的氨基酸有不同的分配系数,移动速度不同,从而达到分离。经显色后,与标准氨基酸图谱比较或与氨基酸的标准Rf值比较,可辨别各种氨基酸。 三、实验仪器（器材）

层析缸、分液漏斗、吹风机、毛细管。 四、实验试剂和材料

试剂：

①扩展剂：正丁醇:88％甲酸:水＝15:3:2（体积比） ②0.2％茚三酮正丁醇显色液： ③几种氨基酸标准溶液（0.5％） ④氨基酸混合液 材料：新华滤纸 五、实验流程

画线（下沿1.5cm）?标记样点（1.5cm一个）?配制扩展剂?取样?点样练习?（选好毛细管）点样?卷纸筒?取扩展剂（放于培养皿）?放滤纸于层析缸,盖好?扩展（3小时）?配染色剂?取滤纸?剪纸、吹干?染色?吹干?量各样品移动距离?结果分析。 六、主要实验环节

1、扩展剂的配制及层析缸饱和：将配好的溶液倒入分液漏斗,等分层后,放掉下部水层,再把展开剂放入培养皿,使液面达培养皿高度的一半,把它放入层析缸进行饱和。 2、记号：取层析纸一张（12×24CM）。在纸的一端距边缘2厘米处用铅笔划一条直线,在此直线上每间隔1.5厘米作一记号,共6个记号。

3、点样：用毛细管将各氨基酸样品分别点在这六个位置上, 干后再点一次。每点在纸上的扩散直径最大不超过3毫米。

4、扩展：用线将滤纸缝成筒状,纸张两边不能接触,不能用手触碰滤纸中部。将盛有扩展剂的培养皿迅速的置于密封的层析缸中,并将滤纸直立于培养皿中（点样的一端在下,扩展剂的液面需低于点样线）到溶剂上升15-20厘米时即取出滤纸,用铅笔描绘出溶剂前沿线,自然干燥或用吹风机热风吹干。

5、显色：用喷雾器均匀的喷上0.2%的茚三酮正丁醇溶液；然后置于烘干箱烘干5分钟就可显现出各个层析斑点 七、结果及分析

绘出氨基酸层析图,标明混合样各成分的名称,计算各个氨基酸的迁移率,并分析说明。 八、注意事项

（1）点样要适量,不宜太多,样点直径不超过0.3厘米。 （2）点样毛细管,一样一支,不要重复使用。 九、思考题

为什么扩展剂要用两种溶剂系统？

实验三 蛋白质的沉淀反应

一、实验目的：熟悉和掌握蛋白质沉淀的相关原理。 二、实验原理：

10

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/31vx.html