生化基础实验

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实 验 讲 义

基础实验

生物科学与工程学院1

生 化

实验一 实验基本操作技能培训

一、 仪器的洗涤与干燥 1. 仪器的洗涤

化学实验中经常使用的玻璃仪器和瓷器,常常由于污物和杂质的存在而得不出正确的 结果。因此,在进行化学实验时,必须把仪器洗涤干净。玻璃仪器的洗涤方法很多,应根据实验的要求、污物的性质、沾污程度来选择。常用的洗涤方法如下:

(1)用水刷洗

用水和毛刷刷洗,再用自来水冲洗几次,可除去附在仪器上的尘土、可溶性和不溶性杂质。注意洗刷时不能用秃顶的毛刷,也不能用力过猛,否则会戳破仪器。

(2)用去污粉、肥皂洗、洗衣粉、洗涤剂洗

去污粉由碳酸钠、白土、细砂等组成,它与肥皂、合成洗涤剂一样,能去除油污和一些有机物。由于去污粉中细砂的摩擦和白土的吸附作用,使得洗涤的效果更好。洗涤时,可用少量水将要洗的仪器润湿,用毛刷蘸取少量去污粉刷洗仪器的内外壁,最后用自来水冲洗。 用去污粉、洗衣粉、洗涤剂洗这些洗涤剂可以洗去油污和有机物质。若油污和有机物质仍然洗不干净,可用热的碱液洗。 (3)用铬酸洗液洗

铬酸洗液是由浓硫酸和重铬酸钾配制而成的,具有很强的氧化性,对有机物和油污的去污能力特别强。使用铬酸洗液时要注意被洗涤的仪器内不宜有水,以免洗液被冲淡或变绿而失效。能用一般洗涤剂洗净的器皿,尽量不要选用洗液洗涤。

(4)用特殊的试剂洗

应根据沾在器壁上污物的性质,采用合适的方法或药品来处理。例如,沾在器壁上的二氧化锰用浓盐酸处理;AgCl沉淀可以用氨水洗涤;硫化物沉淀可选用硝酸加盐酸洗涤等等。

洗涤时应遵循“少量多次”的原则,一般以洗三次为宜。 2.玻璃仪器的干燥

可根据不同的情况,采用下列方法将洗净的仪器干燥: (1)晾干

不急用的仪器在洗净后,可倒置在干净的实验柜内或仪器架上任其自然干燥。 (2)烘干

将洗净的仪器尽量倒干水后放入烘箱内烘干。放入烘箱前要先把水沥干,放置仪器时,仪器的口应朝下。

(3)吹干

用吹风机或气流烘干器把仪器吹干。

3. 基本度量仪器的使用和滴定分析的基本操作 1)量筒

量筒是实验中经常使用的度量液体的仪器之一,常见量筒的容量有10 mL、20 mL、50 mL、100 mL 、500 mL等,可根据需要来选用。量取液体时,应用左手持量筒,并以大拇指指示所需体积的刻度处,右手持试剂瓶,将液体小心倒入量筒。读取刻度时,应让量筒垂直,使视线与量筒内液面的弯月形最低点处于同一水平面上,偏高或偏低都会产生误差。量筒不能作反应器用,也不能装热的液体。 2)滴定管

滴定管是用来进行滴定的器皿,用于测量在滴定中所用溶液的体积。

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酸碱滴定管

滴定管一般分为两种,一种是酸式滴定管,另一种是碱式滴定管。各有白色、棕色之分。酸式滴定管的下端有玻璃活塞,可盛放酸液或氧化性溶液,不能盛放碱液,因为碱液会腐蚀玻璃,使活塞不能转动。盛放碱液时要用碱式滴定管,它的下端连接一橡皮管,内放一个比橡皮管管径稍大的玻璃珠作为开关以控制溶液的流出,橡皮管下端再连一尖嘴玻璃管,这种滴定管不能盛放会腐蚀橡皮的溶液,例如酸或氧化性溶液等。

滴定管洗涤:在洗涤前,应检查酸式滴定管的玻璃活塞与塞槽是否符合,活塞转动是否灵活。碱式滴定管下端连接一段橡皮管的粗细、长度是否适当,橡皮管的内管径应稍小于玻璃珠的直径,玻璃珠应圆滑,橡皮管应有弹性,否则难于紧固玻璃珠,操作时易上下移动而影响滴定。滴定管在用前必须仔细洗涤,当没有明显污物时,可以直接用自来水冲洗,或用滴定管刷蘸肥皂水刷洗(注意滴定管刷的刷毛必须相当软,刷头的铁丝不能露出,也不能向旁边弯曲,以免刷伤内壁),然后再用自来水洗去肥皂水。洗刷后的滴定管,应将其直立,使水流尽,若滴定管的内壁透明并不附着液滴,表示已洗净。洗净后,滴定管用蒸馏水淌洗三次,第一次用蒸馏水10 mL,第二次及第三次各用蒸馏水5 mL。每次加入蒸馏水后,边转边向管口倾斜使蒸馏水布满全管,并稍振荡,将管直立,使水流尽。

在用自来水洗涤后,应检查滴定管是否漏水。检查酸式滴定管时,把玻璃活塞关闭,用水充满至“0”刻度线以上,直立约2分钟,仔细观察有无水滴滴下,有无水由活塞隙缝渗出。然后将活塞转180°,再如此直立1~2 分钟后观察有无水滴滴下或从活塞隙缝渗出。如果检查碱式滴定管,只需装水直立2分钟即可。

如果发现漏水或酸式滴定管活塞转动不灵时,把酸式滴定管取下将活塞涂油,碱式滴定管则需换玻璃珠或橡皮管。活塞涂油时,把滴定管平放在桌面上,先取下活塞上的橡皮圈,再取下活塞(拿在手上、放在干净的表面皿或滤纸上均可),用滤纸把活塞、活塞套、活塞槽内的水吸干,用手指粘少量凡士林擦在活塞两头,沿玻璃塞两端圆周各涂一薄层(如图3-6所示),但要避免涂得太多,尤其是在孔的近旁,油层要均匀涂满全圈,要尽可能薄些。涂完以后将活塞一直插入塞套中(不要转着插),插活塞时孔应与滴定管孔平行。然后向一个方向转动活塞,直到内外面观察时全部都透明为止。如果发现旋转不灵活,或出现纹路,表示涂油太多。遇到这些情况,都必须重新涂油。注意在套橡皮圈时,应该将滴定管放在桌上,一手顶住活塞大头,一手套橡皮圈或系橡皮圈,以免将活塞顶出。然后再用前面所介绍的方法检查是否漏水。

按前述方法用自来水冲洗干净以后,分别用蒸馏水和标准溶液各洗涤两到三次。用标准溶液淌洗时,第一次用10 mL,第二次及第三次各用5 mL。每次加入溶液后,也是边转边向管口倾斜使溶液布满全管,直立以后,打开活塞使溶液从管尖口放出。在放出时一定尽可能完全放尽,然后再洗第二次。但要特别注意,在装入标准溶液之前应先将试剂瓶中的标

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准溶液摇匀,使凝结在试剂瓶内壁的水混入溶液中(这在天气比较热或室温变化较大时更有必要),混匀后,溶液应从试剂瓶中直接倒进滴定管,而不要经过其他器皿(如烧杯、漏斗、 滴管等)。一定要注意,不要使溶液从试剂瓶移到滴定管的时候,改变它的浓度。 滴定管读数:读取滴定管容积刻度的数值,称为读数。正确地读数是减少容量分析实验误差的重要措施。读数时应遵守下列规则:

(1)读数前应观察,管壁是否挂有水珠,管内的出口尖嘴处有无悬挂液滴,管嘴是否有气泡。

(2)读数时应把滴定管从滴定管架上取下,用右手大拇指和食指捏住管上部无刻度部位,使滴定管自然垂直,然后读数。每次装入溶液或放出溶液后,应等1~2分钟,待附着在管内壁的溶液流下后再读数。

(3)对于无色和浅色溶液,应读取弯月面下缘实线的最低点,视线应与弯月面下缘实线的最低点相切。对于有色溶液,如KMnO4、I2溶液等,视线应与液面两侧的最高点相切。若滴定管的背后有一条蓝线或带,无色溶液就形成了两个弯月面,并且相交于蓝线的中线上,读数时读此交点的刻度。

(4)滴定时,最好每次从0.00 mL开始,或从“0~5 mL”的范围内的任一刻度开始,这样可以减少体积误差。滴定管读数必须准确至0.01 mL。

(5)读取的读数立即记录在实验记录本上。

滴定操作:使用酸式滴定管时,用左手控制活塞,大拇指在管前,食指和中指在管后,三指轻轻捏住塞柄,无名指和小指向手心弯曲,手心内凹,以防活塞被顶出造成漏液(如图3-9所示)。滴定时,右手握锥形瓶上部,将滴定管下端伸入锥形瓶口约l cm,然后边滴加溶液边向同一方向摇动锥形瓶。滴定的速度开始时可稍快,一般为3~4/秒滴左右,但不能滴成水线,应呈“见滴成串”。接近终点时,应逐滴加入,即加一滴摇动后再加,马上到达终点时,应控制半滴加入,即将活塞稍稍转动,使半滴悬于管口,用锥形瓶内壁将其沾下,再用洗瓶吹洗内壁,使附着的溶液全部流下,然后摇动锥形瓶。如此继续滴定至滴定终点为止。

酸式滴定管的操作 碱式滴定管的操作

使用碱式滴定管时(如图3-10所示),左手捏住乳胶管,拇指在前,食指在后,其余三指辅助夹住出口管,用拇指和食指捏住玻璃珠中上部,向一边挤压玻璃珠外面的乳胶管,使玻璃珠和乳胶管之间形成一个狭缝,溶液即可流出。注意不要用力捏玻璃珠,也不要使玻璃珠上下移动,更不要捏玻璃珠下部的乳胶管,以免进入空气形成气泡,影响读数。

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滴定通常在锥形瓶中进行,必要时也可以在烧杯中进行(如图3-11所示)。把烧杯放在实验台上,滴定管的高度应以其下端伸入烧杯内约1 cm为宜。滴定管的下端应在烧杯的左后方处,如放在中央,会影响搅拌;如离杯壁过近,滴下的溶液不易搅拌均匀。左手控制滴定管滴加溶液,右手持玻璃棒搅拌溶液。玻璃棒应作圆周搅动,不要碰到杯壁和底部。接近终点加半滴时,可用玻璃棒下端轻轻沾下,再浸入烧杯中搅匀。 3)容量瓶

容量瓶是一个细颈梨形的平底瓶。瓶塞是带有磨口的玻璃在烧杯中滴定 塞,细颈上刻有环形标线,瓶上标有容积(mL)和标定时的温度(一

般为20℃)。在指定的温度下(一般为20℃),当液体充满到标线时,液体体积恰好与瓶上所标的体积相等。容量瓶有10mL、25mL、50mL、100mL、250mL、1000mL、2000 mL几种规格,并有白、棕两色,棕色的用来配制见光易分解的试剂溶液。

容量瓶不能加热,磨口瓶塞是配套的,不能互相调换。容量瓶用于配制准确的一定体积的溶液。也用于标准的浓溶液稀释。

在使用容量瓶之前,要选择好容量瓶:

(1)要选择与所要求配制的溶液体积相一致的容量瓶。 (2)要选择瓶塞与瓶口相符合、不漏水的容量瓶。

选好容量瓶后,首先仔细检查有无裂痕破损,然后进一步检查瓶口与瓶塞间是否漏水。检查瓶口与瓶塞间是否漏水,可在瓶中放入自来水到标线附近,将瓶塞塞好,左手拿住容量瓶瓶口并用食指按住塞子,右手指尖顶住瓶底边缘,倒立2分钟左右,观察瓶塞周围是否有水渗出,如果没有,把瓶直立,转动瓶塞180°后,再倒立过来试一次。这样做两次检查是必要的,因为有时瓶塞与瓶口不是在任何位置都是密合的。

容量瓶在使用前要充分洗涤干净,无论用什么方法洗,绝对不能用毛刷刷洗内壁。洗涤时,盖好瓶塞,充分振荡,洗完后立即将瓶塞塞好,以免灰尘落入或瓶塞被污染。

用容量瓶配制溶液时,如果是用固体配制准确浓度的溶液(或称标准溶液),一般是将固体物质称在大小适当的干净烧杯中,往其中加入少量的蒸馏水或适当溶剂使之完全溶解。溶解过程不论放热或吸热,都需待溶液至室温时,才能定量地将溶液转入容量瓶中。转移时,要把溶液顺玻璃棒加入,玻璃棒下端要靠住瓶颈内壁,使溶液顺内壁流入瓶中。注意玻璃棒下端的位置最好在标线稍低一点的地方,不要高到接近瓶口,玻璃棒稍向瓶中心倾斜,烧杯嘴应靠近瓶口并紧靠玻璃棒,使溶液完全顺玻璃棒流入瓶内,待溶液全部流尽后,将烧杯轻轻向上提(烧杯嘴口仍应紧靠玻璃棒),同时直立,使附着在玻璃棒与烧杯嘴之间的溶液流入烧杯中或容量瓶内,然后先把玻璃棒放入烧杯中,才能把烧杯拿开放在桌上,用洗瓶吹水洗涤烧杯内壁和玻璃棒接触到溶液的部分3次,每次用水应尽量少些为宜,每次洗涤的水溶液应无损地转入容量瓶中。然后慢慢加蒸馏水至接近标线稍低1 cm左右,等1~2分钟,使黏附在瓶颈内壁的水流下后,再用细而长的滴管加蒸馏水恰至标线,这一过程称为定容。用滴管加水时,视线要平视标线,然后将滴管伸入瓶颈使管口尽量接近液面,稍向旁倾斜,使水顺壁流下,注意液面上升,滴管应随时提起,勿使溶液接触滴管,直到弯月面下缘最低点与标线相切为止。定容以后,塞好瓶塞。左手拇指在前,中指、无名指及小指在后拿住瓶颈标 线以上部分,右手托住瓶底。如果容积小于100mL的容量瓶,就不必用右手托住容量瓶瓶底,以免由此造成的温度变化对小体积产生较大的影响。将容量瓶倒转,使气泡上升到顶,再充分振荡,如此反复3~5次,即可摇匀。

容量瓶不能久贮溶液,尤其是碱性溶液会侵蚀瓶塞,使瓶塞无法打开,配制好溶液后,应将溶液倒入清洁干燥的试剂瓶中贮存。容量瓶不能用火直接加热及烘烤。

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4) 移液管、吸量管

用于准确移取一定体积的溶液的移液管,通常有两种形状,一种移液管中间有膨大部分,称为胖肚移液管(胖肚吸管),常用的有5mL、10mL、25mL、50mL等几种;另一种是直形的,管上有刻度,称为吸量管(刻度吸管),常用的有1mL、2 mL、5 mL、10 mL 等多种(如图3-15所示)。

移液管和吸量管 洗涤移液管 移液管的使用 用移液管或吸量管移取溶液前,先将用蒸馏水洗净过的移液管或吸量管用少量被移取的溶液淌洗2~3次,以免被移取溶液的浓度发生改变。为此,可倒少许溶液于一洁净而干燥的小烧杯中,用移液管吸取少量溶液,将管横向转动,使溶液流过管内标线下所有的内壁,然后使管直立将溶液由尖嘴口放出。

吸取溶液时,一般可以用左手拿洗耳球,右手把移液管插入溶液中吸取。当溶液吸至标线以上时,马上用右手食指按住管口,取出并用滤纸擦干下端,并把管尖接触于干净小烧杯壁上。然后转动移液管,稍松食指,使液体平稳下降,直至溶液的弯月面与标线相切,立即按紧食指,将移液管垂直放入接受溶液的容器中,管尖与容器壁接触(如图3-17所示),放松食指,使溶液自由流出,流完后再等15秒左右,残留于管尖的液体不必吹出(刻“吹”字的移液管例外),因为在校正移液管时,也未把这部分液体体积计算在内。移液管使用后,应立即洗净并放在移液管架上。 4. 药品的取用方法 1) 液体试剂的取用

从滴瓶或者试管、锥形瓶等中取液体,使试剂滴入试管中(如图3-30所示),试管应垂直不要倾斜。滴管或移液管尖决不能伸入所用容器中,以免触及器壁而沾污药品;装有试剂的滴管或移液枪不能平放或管口向上斜放,以免试剂倒流腐蚀。倒入试管里液体的量一般不超过其容积的1/3。

正确 不正确

2) 固体试剂的取用

(1)取用试剂前应看清标签。取用时,先打开瓶塞,将瓶塞倒放在实验台上。如果瓶塞一端不是平顶而是扁平的,可用食指和中指将瓶塞夹住(或放在清洁的表面皿上),决不可将它横置桌面上以免污染。不能用手接触化学试剂,应根据用量取用试剂。取用完毕,一定要

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把瓶塞盖严,绝不允许将瓶塞张冠李戴。然后把试剂瓶放回原处,以保持实验台整齐干净。 (2)要用清洁、干燥的药匙取试剂。用过的药匙必须洗净擦干后才能再使用。

(3)注意取药不要超过指定用量,多取的不能倒回原瓶,可放在指定的容器中供他人使用。

(4)一般固体试剂可以放在干净的纸或表面皿上称量。具有腐蚀性、强氧化性或易潮解的固体试剂应放在表面皿或玻璃容器内称量。

(5)往试管(特别是湿的试管)中加入固体试剂时,可用药匙或将取出的药品放在对折的纸槽上,伸进试管约2/3处,小心地将药品倒入试管内。加入块状固体试剂时,应将试管倾斜,使其沿着试管壁慢慢滑下,以免碰破试管

二、常用仪器及设备的使用:

1. 移液枪(微量移液器)使用方法:

1)选择适当的微量移液器:不同型号的微量移液器,各有其吸取体积范围,请依取用溶液体积取用适当的微量移液器。 QY100 20ul ~ 100ul QY200 50ul ~ 200ul QY1000 100ul ~ 1000ul

2)设定体积:设定体积时,请勿将体积调整圈转到超过最低或最高的使用范围,以免损坏移液枪。

3)套上微量移液器头,吸取溶液: 吸取溶液时,尖端请先套上微量移液器头 (枪头),QY1000 使用藍色微量移液器头,QY200 及QY100 使用黄色微量移液器头。 标准操作:

适用的液体:水、缓冲液、稀释的盐溶液和酸碱溶液。 1)按到第一档,垂直进入液面几毫米。

2)缓慢松开控制按钮,否则液体进入吸头过速会导致液体倒吸人移液器内部吸人体积减少。

3)打出液体时贴壁并有一定角度,先按到第一档,稍微停顿1s后,待剩余液体聚集后,再按到第二档将剩余液体全部压出。

适用的液体:黏稠或易挥发液体

在移取黏稠或易挥发的液体时,很容易导致体积误差较大。为了提高移液准确性,可以采取以下方法:

1)移液前先用液体预湿吸头内部,即反复吸打液体几次使吸头预湿,吸液或排出液体时最好多停留几秒。尤其对于移取体积大的液体,建议将吸头预湿后再移取。

2)采用反相移液法:吸液时按到第二档,慢慢松开控制按钮,打液时按到第二档,部分液体残留在吸头内。

3)适当加热液体,使其易于吸取。 使用注意事项:

1) 勿将微量移液器本体浸入溶液中。

2) 吸液时,移液器本身倾斜,导致移液不准确(应该垂直吸液,慢吸慢放)。

3)吸取黏度高之试液,请先将微量移液器头尖端以刀片或剪刀将出口切大,并先行预润后再吸取。

4) 用大量程的移液器移取小体积样品(应该选择合适量程范围的移液器)。 直接按到第二档吸液

5)吸取酸液或具腐蚀性溶液后,请将微量移液器拆解开,各部位零件以蒸馏水冲洗干

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净,擦干后再正确组合回復原狀。

6) 微量移液器的任何部份切勿用火烧烤,亦不可吸取温度高于70℃的溶液,避免蒸气侵入腐蚀活塞。

7) 套有微量移液器头的微量移液器,无論微量移液器头中是否有溶液,均不可平放,需直立架好。

2. 分析天平及电子天平的使用方法:

1) 事先检查电源电压是否匹配(必要时配置稳压器),接通电源并预热使天平处于备用状态。并检查并调整天平至水平位置。 2) 预热足够时间后打开天平开关,天平则自动进行灵敏度及零点调节,使天平处于零位,否则按去皮键。待稳定标志显示后,可进行正式称量。

3) 称量时将洁净称量瓶或称量纸置于称盘上,关上侧门,轻按一下去皮键,天平将自动校对零点,然后逐渐加入待称物质,直到所需重量为止。记录读数。

4) 将称量瓶或称量纸拿出,转移所称量物质至锥形瓶或烧杯,将称量纸扔到垃圾桶,称量瓶清洗干净。按天平去皮键清零,以备再用。

5)称量结束后,或者关上侧门,切断电源,并做好使用情况登记。 分析天平及电子天平使用注意事项:

1)在使用前调整水平仪气泡至中间位置。 2)电子天平应按说明书的要求进行预热

3)称量时应从侧门取放物质,读数时应关闭箱门以免空气流动引起天平摆动。前门仅在检修或清除残留物质时使用。

4)称量易挥发和具有腐蚀性的物品时,要盛放在密闭的容器中,以免腐蚀和损坏电子天平。

5)操作天平不可过载使用以免损坏天平.目前我们所用天平最大量程为200g.

3. 722S分光光度计使用方法:

1)预热:开机后灯及电子部分需预热平衡,故一般开机20min 后可开始测定。 2)调波长:用旋钮调节,波长显示窗读数时目光垂直观察。 3)调零及调100%T‘进入测试状态。

操作:打开样品槽盖,按100%键,即可自动调整到零位。盖好盖按下“100%T”即可自动调100%。(注:调100% 可能影响0%,调整后请检查0%,如有变化可重调0%一次)。 4)改变样品槽位置让不同样品进入光路。槽有四位置,用拉杆改变,离测试者最近为“0”,依次为“1”、“2”、“3”位置。将空白放入“0”号位置,盖好盖子,按100%键调零,拉动拉杆,可依次读取“1”、“2”、“3”位置各管吸光度值。

5)确定滤光片位置:当测试波长在340~380nm 内作高精度测试可将拨杆推向前,通常不用此滤光片,可将其置于400~1 000nm 处。 6)改变模式

透射率:用于透明液体和固体测量透射测量。

吸光度:用于标准曲线法或绝对吸收法定量分析,在作动力学测试时可使用。 浓度因子:用于在浓度因子法浓度直读时设定浓度因子。

浓度直读:用于标样法浓度直读时,作设定和读出。注:各标尺的转换用MODE 键并由各自指示灯指示。 注意事项:

1)操作应轻缓,不要将样品溶液弄到仪器上

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2)不要用手拿比色皿的光面 3)比色皿用毕应及时清洗干净

4. METLER DELTA 320 pH计使用方法: 1)打开电源开关,进入测量状态。

2)校正:长按“模式”键,进入“Prog”状态,按“模式”进入b=2,按 ∧或∨选择b =1或b=3,LCD会逐一显示盖缓冲溶液组内的缓冲溶液pH值,按“模式”确认,按“读数退回正常测量状态。

3)将电极放在一个标准缓冲液中并按“校正”,仪表将显示相应缓冲液pH。

4)用去离子水冲洗电极,将电极放入下一个标准缓冲液中,重复3,进行两点或三点校准,仪器更新零点和斜率,标定完成,按“读数”退回测量状态。

5)用蒸馏水清洗电极头部,用被测溶液再洗一次,把电极浸入被测溶液中,再用玻璃棒搅拌,使溶液均匀,按“读数”键测量,仪器稳定后显示 A,在显示屏上读数即溶液的pH值。

6)测量结束,及时将电极保护套套上。 注意事项:

1)一般情况下,24h内仪器不需再标定。

2)电极保护套内及时补加3M KCl,切忌浸泡在蒸馏水中,防止干涸。

3)仪器pH测量范围为0-14.00,温度范围为-5-105℃,精确度0.01pH、1mV。 4)如果斜率下降、响应速度慢或电极膜干涸,将电极头浸入0.1MHCl中过夜。

5. Sigma SK-30低温高速冷冻离心机操作方法: 操作步骤:

1)装好所需转子:本实验室Sigma离心机配有两个型号的转子:12150-H,容量6×140g,最高转速21000转/min;12154-H,容量24×5g,最高转速26000转/min,离心中,一定要注意,转子和转头要同一型号。用专用扳手拧紧转轴螺母,盖好同型号转子的盖子,拧紧。

2) 设置参数:打开机身背侧电源开关,机身前面面板有数字显示,转动调节旋钮,可在面板上“DREHZAHL”(离心速度,rpm)、“RZB”(相对离心力,×g)“ZEIT”(离心时间)、“TEMP”(离心温度)、“ROTOR”(转子选择)等显示栏之间选择,选择需设定参数,按下调节旋钮,“SET”同时被选择,转动调节旋钮,设定温度、离心速度、时间、转子型号等参数,盖好离心机盖门,等待降温。

3)离心:温度达到所需温度后,打开离心机盖门,拧开盖子,放入已经平衡过的离心样品,拧紧盖子,关闭离心机盖门,启动按钮和开盖按钮亮。按下启动按钮,开始离心。

4)等离心机完全停下,开盖指示灯亮后,打开离心机,取出样品,盖好盖子,关闭离心机。

如果在离心过程中,发现有异常情况,立即按下“停止” 按钮,如不能完全停止,可关闭电源,等待离心机完全停止。 注意事项:

1、本设备最大离心力可达60000 g以上,离心转速范围100 ~ 30000 rpm(依据转头型号确定),设置不能超过最大转速,设定步长1 rpm,温度范围-20℃---+40℃,最大功率1300W。 2、离心前,一定要平衡,对称放置,离心期间,不得离人。

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实验二 氨基酸纸层析法

一、实验目的

学习纸层析法的基本原理和方法 二、实验原理

氨基酸混合液经纸层析,由于不同的氨基酸有不同的分配系数,移动速度不同,从而达到分离。经显色后,与标准氨基酸图谱比较或与氨基酸的标准Rf值比较,可辨别各种氨基酸。 三、实验仪器(器材)

层析缸、分液漏斗、吹风机、毛细管。 四、实验试剂和材料

试剂:

①扩展剂:正丁醇:88%甲酸:水=15:3:2(体积比) ②0.2%茚三酮正丁醇显色液: ③几种氨基酸标准溶液(0.5%) ④氨基酸混合液 材料:新华滤纸 五、实验流程

画线(下沿1.5cm)?标记样点(1.5cm一个)?配制扩展剂?取样?点样练习?(选好毛细管)点样?卷纸筒?取扩展剂(放于培养皿)?放滤纸于层析缸,盖好?扩展(3小时)?配染色剂?取滤纸?剪纸、吹干?染色?吹干?量各样品移动距离?结果分析。 六、主要实验环节

1、扩展剂的配制及层析缸饱和:将配好的溶液倒入分液漏斗,等分层后,放掉下部水层,再把展开剂放入培养皿,使液面达培养皿高度的一半,把它放入层析缸进行饱和。 2、记号:取层析纸一张(12×24CM)。在纸的一端距边缘2厘米处用铅笔划一条直线,在此直线上每间隔1.5厘米作一记号,共6个记号。

3、点样:用毛细管将各氨基酸样品分别点在这六个位置上, 干后再点一次。每点在纸上的扩散直径最大不超过3毫米。

4、扩展:用线将滤纸缝成筒状,纸张两边不能接触,不能用手触碰滤纸中部。将盛有扩展剂的培养皿迅速的置于密封的层析缸中,并将滤纸直立于培养皿中(点样的一端在下,扩展剂的液面需低于点样线)到溶剂上升15-20厘米时即取出滤纸,用铅笔描绘出溶剂前沿线,自然干燥或用吹风机热风吹干。

5、显色:用喷雾器均匀的喷上0.2%的茚三酮正丁醇溶液;然后置于烘干箱烘干5分钟就可显现出各个层析斑点 七、结果及分析

绘出氨基酸层析图,标明混合样各成分的名称,计算各个氨基酸的迁移率,并分析说明。 八、注意事项

(1)点样要适量,不宜太多,样点直径不超过0.3厘米。 (2)点样毛细管,一样一支,不要重复使用。 九、思考题

为什么扩展剂要用两种溶剂系统?

实验三 蛋白质的沉淀反应

一、实验目的:熟悉和掌握蛋白质沉淀的相关原理。 二、实验原理:

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