蛋白质相互作用技术在热带植物病毒研究中的应用

热带作物学报 2 0 1 1,3 2 ( 2 ):3 5 9— 3 6 3C h i n e s e J o u r n a l o f T r o p i c a l C r o p s

蛋白质相互作用技术在热带植物病毒研究中的应用余乃通 .一，王健华，张雨良，林湛松 . -,杨文君 -,一，刘志昕-

裹农昱业蕃部冀热雾带嚣作 物差生 物釜技粟术圭重警点葬开囊放篓实耋验篓海室 佴 南海碍 口 5 7 1 1 0 1

2海南大学环境与植物保护学院海南海口 5 7 0 2 2 8 3海南大学农学院海南海口 5 7 0 2 2 8摘要蛋白质一蛋白质相互作用 ( P ot r e i n - p r o t e i n i n t e r a c t i o n )承载着生物体生命活动的各个过程 .研究热带植物病毒中的蛋白质一蛋白质相互作用，不仅可以从分子水平揭示病毒蛋白质的功能 .还可以揭示病毒在寄主细胞中的侵染机理，从而制定相关策略预防病毒的突然爆发或进行疾病治疗而蛋白质相互作用研究方法已有 5 O多年的历史，如早期的化学交联法；并且该方法的技术在不断地完善和更新，产生了一序列新的技术，包括酵母双

杂交、G S T p u l l— d o w n,免疫共沉淀和串联亲和纯化等多种技术。由于本实验室在热带植物病毒研究中涉及了多种蛋白质相互作用技术，为此，本文总结热带植物病毒研究中常用的蛋白质相互作用技术。 关键词植物病毒：蛋白：相互作用￥ 4 3 2 . 4 1 文献标识码 A 中图分类号

Ap p l i c a t i o n 0 f Pr 0 t e i n— p r 0 t e i n I n t e r a c t i o n Te c h n i q u e s i n t h e I n v e s t i g a t i o n o f Tr o p i c a l P l a n t Vi r u s e s

文字需求请找字伯虎文字创意，Q为17-3125-3445,润 1 Ke y L a b o r a t o r y o f T r o p i c a l C r o p B i o t e c h n o l o g y,Mi n i s t r y o f Ag r i c u h u r e/ l n s t i t u t e f o T r o p

i c o l 色，降低抄袭率UN Z h a n s o n g .Y A N G We n j u n .L I U Z h i x i nBi o s c i e n c e a n d Bi o t e e h n o l o g y,C A T AS,Ha i k o u,Ha i n a n 57 1 1 0 1, Ch i n a

YU Na i t o n g,W ANG J i a n h u a ,Z HANG Yu l i a n g

2 C o l l e g e f o E n v i r o n me n t a n d P l a n t P r o t e c t i o n,Ha i n a n U n i v e r s i t y,Ha i k o u,H a i n a n 5 7 0 2 2 8,C h i a n 3 C o l l e e g f o A g r i e u l t u r e,Ha i n a n U n i v e r s i t y,Ha i k o u,H a i n a n 5 7 0 2 2 8,C h i n aAb s t r a c t P r o t e i n - p r o t e i n i n t e r a c t i o n s c o n t r o l t h e p r o c e s s e s o f l i f e a c t i v i t i e s o f o r g a n i s ms .R e s e a r c h o f p r o t e i n - p r o t e i n i n t e r a c t i o n s i n t r o p i c a l p l a n t v i r u s n o t o n l y r e v e a l s t h e f u n c t i o n o f v i r a l p ot r e i n s i n mo l e c u l r a l e v e l,b u t a l s o r e v e a l s t h e me c h a n i s m o f v i us r i n f e c t e d h o s t e ' e l l s .F i n a l l y,r e l e v a n t s t r a t e g i e s a r e ma d e t o p r e v e n t s u d d e n o u t b r e a k o f v i us r o r t o t r e a t d i s e a s e s .Me t h o d s o f i n v e s t i g a t i o n o f p r o t e i n i n t e r a c t i o n s s u c h a s c h e mi c a l c r o s s l i n k i n g f o r

me r b e g a n mo r e t h a n 5 0 y e a r s a g o .T h e me t h o d s k e e p s i mp ov r i n g a n d u p d a t i n g a n d a s e i r e s o f n e w t e c h n o l o g i e s,i n c l u d i n g y e a s t t wo - h y b id r,G S T p u l l - d o wn,i mmu n o p r e c i p i t a t i o n,t a n d e m a f i f n i t y p u i r ic f a t i o n a n d o t h e r t e c h n o l o g i e s h a v e b e e n o ig r i n a t e d f r o m t h e m.T h i s p a p e r s u mma r i z e d s o me p r o t e i n i n t e r a c t i o n t e c h n o l o g i e s wh i c h a r e c o mmo n l y u s e d i n t op r i c a l p l nt a v i us r i n o u r l a b o r a t o r y .Ke y wo r d s P l a n t v i us r;P r o t e i n;I n t e r a c t i o n

d o i 1 0 . 3 9 6 9/ j . i s s n . 1 0 0 0— 2 5 6 1 . 2 0 1 1 . 0 2 . 0 3 5

第一个植物病毒一烟草花叶病毒 ( T o b a c c o r f l o s a i c v i r u s。T MV)的发现已有一百多年的历史。 植物病毒与细菌或真核细胞相比 .由于病毒颗粒

病毒病是植物的严重病害之一 .对其预防和治疗至关重要但是对病毒的生物学特征及全基因组了解并不足以解释病毒的侵染过程、复制机理、病毒颗粒组装等现象 .而产生这些现象的最终都必须通过蛋白质相互之间的作用机制来解释。蛋白质一 蛋白质之间的相互作用是蛋白质发挥功能的重要途

小、肉眼难以观察等原因，发现比较晚。但是随着显微镜、染色、测序等技术的发明和改进，至今已 报道的植物病毒种类超过了 1 0 0 0种植物病毒因基因组小、重叠基因多、基本无内含子等特点，一旦发现新的植物病毒 .就能较快了解其基因组特

径 .

是生物体生命活动的表现。每个蛋白质并不是独立地在细胞内被赋予完整的功能 .而是通常与其它蛋白质相互作用形成大的复合体 .在特定的时间

征，比细菌或真核等生物容易得多。收稿日期：2 0 1 0— 1 0— 1 0 修回1 3期：2 0 1 0— 1 1 - 2 2

基金项目：国家自然科学基金项目( N o .3 1 0 7 0 1 3 1 );中央级公益性科研院所基本科研业务费 ( N o .I T B B Z D 0 7 5 4)。 作者简介：余乃通 ( 1 9 8 5￣ F -),男，硕士研究生。研究方向：病毒分子生物学。}通讯作者：刘志昕，E— ma i l:i t b b l z x C o￣a h o o . c o n. r c n。

-

3 6 0 -

热带作物学报

第3 2卷

和空间内完成特定的功能 .这种现象在病毒感染寄主植物体后的侵染、复制、发病中尤为明显，病毒

饵蛋白质相互作用的蛋白质。此外，还有很多其它常用的蛋白标签 .如与葡萄球菌蛋白 A融合的诱饵蛋白可以通过固定有 I g G的亲和柱进行纯化：与

蛋白在寄主体内需依赖寄主细胞进行复制、转录、 翻译、翻译后修饰以及构象变化等一系列过程。 研究热带植物病毒中的蛋白质一蛋白质相互作用 .不仅可以从分子水平揭示病毒蛋白质的功能， 还可以揭示病毒在寄主细胞中的侵染机理 .从而制定相关策略预防病毒的突然爆发或进行疾病治疗。而蛋白质相互作用研究方法已有 5 0多年的历史 . 如早期的化学交联法：并且该方法的技术在不断地完善和更新 .产生一系列新的技术。包括酵母双杂交、G S T p u l l— d o w n ( g l u t a t h i o n e— S— t r a n s f e r a s e p u l l—

寡聚组氨酸肽段融合的诱饵蛋白可以通过结合 N i 2+ 的色谱柱进行纯化 .X i a o等[ 1 1]就利用 Hi s标签研究P I C K1中 P D Z和 B AR两个结构域之间的相互作用该技术运用广泛 .本实验室前期成功利用 P E T 系统带有 Hi s标签的载体特异性表达纯化 B B T VB a n a n a b u n c h y t o p v i r u s ) C P t 2

1和N S P t”一 1 4]蛋白 .后

期将 H i s— C P、H i s— N S P分别与含有目的蛋白质的溶液孵育 .鉴定互作蛋白1 . 3蛋白质免疫印迹实验

d o w n ) .免疫共沉淀和串联亲和纯化等多种技术。由于本实验室在热带植物病毒研究中涉及多种蛋白 质相互作用技术 .在此基础上 .本文总结热带植物病毒研究中常用的蛋白质相互作用技术 .为蛋白质

蛋白质免疫印记实验 ( We s t e m B l o t t i n g )是2 O

世纪 7 0年代末至 8 O年代初发展起来的蛋白质检测技术。其原理是将总蛋白经 S D S— P AG E后 .转移到固相 ( NC膜)载体上，固相载体以非共价键的形式吸附蛋白 .将膜上未反应的位点封闭起来以抑制抗体的非特异结合 .再用固定在膜上的蛋白或多肽作为抗原 .与对应的非标记抗体发生免疫反应后与荧光素酶或非放射性同位素标记的二抗起反应 .通过显色检测凝胶中的目的蛋白。该技术非常普及 . 常用于目的基因表达产物的鉴别和定量检测细胞中

相互作用的研究提供有效的选择 .同时也为蛋白质组学研究奠定了坚实的基础

1研究蛋白质相互作用的常规技术1 . 1化学交联法化学交联法用于蛋白质相互作用的研究已有

5 0多年的历史，是非常普遍和有用的实验技术。 其原理是将不同的化学功能基团共价偶联起来 .通

某个蛋白的表达水平[ 1 5— 1 6] .也可用于检测制备出多克隆抗体与抗原的特异性结厶[1 . 4噬菌体展示技术

过交联剂将 2个邻近的亚基或蛋白质共价偶联形成异多聚体【” .经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后 .利用放射自显影等技术鉴定与目的蛋白相互作用的蛋白质交联技术可用于研究病毒蛋白与病毒蛋白或病毒蛋白与植物蛋白稳定的相互作用 .蛋白质之间的可逆相互作用[ 2 1。该方法在难溶性蛋白质 (如细胞

噬菌体展示技术 ( P h a g e d i s p l a y印p r o a c h )是将编码目的蛋白的基因与编码噬菌体表面蛋白的基因融合后 .以融合蛋白的形式表达在噬菌体表面 .同时将不同的 c D N A插入噬菌体载

体进行表达 .得到表达不同蛋白的一定规模的噬菌体展示库旧.再利

膜蛋白等 )有广泛的应用【

近几年这种方法常见

用目的蛋白质与特异配基的亲和力 .筛选和配基特异结合蛋白质的一种技术。S u i等就利用噬菌体展示技术得到了 S A RS病毒的中和性抗体该技术

于热带植物病毒的研究 .如水稻黑条矮缩病毒外壳蛋白 P l O t 5]、马铃薯 X病毒运动蛋白嘲、水稻条纹病毒 RN A沉默抑制子 N S 3、花椰菜花叶病毒运

可用于筛选植物病毒蛋白的互作蛋白 如选择抗番茄斑萎病毒的抗体【 l 9] .以及体外选择黄瓜花叶病毒的胞内抗体等1 . 5免疫共沉淀

动蛋白圜等功能研究 .也可用于制备烟草花叶病毒稳定剂 1 . 2 GS T融合蛋白 p u l l— d o w n技术

自1 9 9 8年 S m i t h等【 q从细菌中纯化谷胱甘肽一S一转移酶 f g l u t a t h i o n e— S— t r a n s f e r a s e .G S T )融合蛋白

免疫共沉淀 ( C o— I m mu n o p r e c i p i t a t i 0 n )是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质

后 .在短短几年内 .G S T融合蛋白 p u l l— d o W n技术在研究蛋白质相互作用领域里得到极大的推广。

相互作用的金标准 .是确定 2种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法[ 2 1】 其原理是当细胞在非变性条件下被裂解时 .完整细胞内存在的许多

G S T融合蛋白 p u l l— d o w n技术是将诱饵蛋白质和 G S T标签融合表达 .纯化后与含有目的蛋白质的溶液孵育 .之后利用谷胱甘肽一 S e p h a r o s e将融合蛋白 洗脱下来 .最后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定与诱

蛋白质一蛋白质问的相互作用被保留了下来如果用蛋白质 X的抗体免疫沉淀 X.那么与 X在体内结合的蛋白质 Y也能沉淀下来在植物病毒研究

第 2期

余乃通等：蛋白质相互作用技术在热带植物病毒研究中的应用

一 3 6 1一

中 .免疫共沉淀既可以用于检验已知的两个蛋白质在寄主细胞内的相互作用 .也可以找出未知

的蛋白

的方法该方法将靶蛋白与一个蛋白质标签融合并在一个天然宿主细胞或生物体中进行表达 .从这些宿主细胞或生物体中制备提取物 .然后采用标准的两步法重获靶蛋白和相关的相互作用组分 .通过凝胶电泳、质谱等技术进一步分析鉴定。串联亲和纯化技术兼具融合蛋白亲和色谱法和免疫共沉淀两种技术的优点 .避免了非自然条件下的蛋白质相互作用和杂蛋白的干扰该技术可用于验证双杂交技术获得的互作蛋白串联亲和纯化技术在热带植物病毒中主要用于研究芜菁花叶病毒 R N A依赖的 R N A 聚合酶与热激蛋白 7 0的互作、马铃薯 A病毒基因组连接蛋白 VP g的翻译后修饰方式、以及对烟

质相互作用 .然后用 S D S— P A G E进行鉴定。在热带植物病毒中与马铃薯 X病毒沉默抑制子 P 2 5相互作用的 A r g o n a u t e 1蛋白、黄瓜花叶病毒 2 a聚合酶和 3 a运动蛋白之间的互作、植物 e l F 3和

6 0 S蛋白互作提高病毒转录活性、水稻矮缩病毒P 8外壳蛋白与水稻乙醇酸氧化酶的互作、烟草

花叶病毒 R N A聚合酶与寄主翻译延伸因子 1 A的互作[ 2 6 1等。该方法已有新的进展 .可用于研究 D N A一蛋白

质相互作用 .也可用于研究 R N A一蛋白质相互作用 .并且研究者不断地发展和完善此技术。在国外，

草蚀纹病毒融合蛋白的分离纯化等1 . 9蛋白质微阵列

D N A一蛋白质相互技术和 R N A一蛋白质相互作用技术已得到广泛应用 .但在国内尚未成熟应用。1 . 6酵母双杂交技术

蛋白质微阵列 ( P r o t e i n m i c r o a r r a y s )或蛋白质芯片( p r o t e i n b i o c h i p )技术最早由 L u e k i n g等开始研究[ 4 2 1 .是一种体外检测蛋白质相互作用的技术 .可以直接检测目的蛋白，还可以分析蛋白质同核酸、 脂类和药物的相互作用，有着广泛的应用前景，该

酵母双杂交 ( Y e a s t t w o— h y b r i d .Y 2 H)是一种在酵母中利用重组的转录激活物来鉴定蛋白质之间相

互作用的方法 .由

F i e l d s等[ 2 8 1在 1 9 8 9年首次发明。 其原理是将真核细胞转录因子的 D N A结合域和转录激活域分别与待研究蛋白质融合表达 .若蛋白间存在相互作用 .则 2个结构域在空间上靠近并激活报告基因的表达

技术目前已经应用于许多规模化的相互作用组研究『 4 3删。

蛋白质微阵列的基本原理是在固相支持物表面

高密度排列探针蛋白或抗体点阵 .可特异的捕捉样品中的靶蛋白 .若发生相互作用 .可在芯片表面形

最近几年，酵母双杂交在病毒、细菌、真核生物、果蝇、线虫中已经有大量报道，研究一些重

成蛋白质复合物，然后用激光共聚焦扫描仪、电荷耦合装置 ( C C D)或放射显像仪获取数组图像，最后用专门的计算机软件进行数据分析。近年来。蛋白质微阵列已经可以用微量样品多种参数同时进行测

要调控蛋白质的功能。目前 .酵母双杂交在许多实验室也是经常用来筛选感兴趣的相互作用蛋白蛋白 的主要手段[ 3 o 1 如水稻条纹病毒 3个功能蛋白的相互作用 L 3 l】、番茄黄化卷叶病毒 V 2蛋白的沉默需要

定嘲。在此基础上。可发展到对各种蛋白质、抗体及配体的检测 .弥补基因芯片的不足[拍 但由于

寄主 S G S 3因子等研究1 - 7细菌双杂交系统

该项技术的使用受到了蛋白质固定化技术以及载体材料选择的限制 .同时也需要复杂昂贵的仪器来对样品进行预处理和检测。植物病毒基因组小，编码蛋白少 .用该技术研究植物病毒大规模的蛋白质相互作用本身就是一种浪费 .所以蛋白质芯片技术在植物病毒研究中极少用

为了弥补了酵母双杂交的缺陷 .K a r i m o v a等t 3 3 -￣于 1 9 9 8年建立细菌双杂交 ( B a c t e i r a t w o— h y b i r d,

B 2 H)系统其原理与酵母双杂交相似。通过将所要研究的目的蛋白质与 D N A结合域 ( D B D)融合 .互作蛋白与活化域 ( A D)融合，如目的蛋白质与互作

蛋白相互作用 .则使活化域与 D N A结合域结合，从而调控报告基因的表达该方法具有周期短。假

2 其他方法除以上介绍的方法外

.荧光共振能量转移技术( F l u o r e s c e n c e r e s o n a n c e e n e r g y t r a n s f e r,F R E T )嘲、

阳性低等特点 .不具有翻译后的加工修饰功￣[ 3 5 - 3 6], 但该技术因起步晚的原因 .用于热带植物病毒蛋白互作的报道较少如植物光系统儿放氧复合蛋白

绿色荧光蛋白质近似成像技术 f G r e e n l f u o r e s c e n t p r o t e i n i ma g i n g ) 4[ 9 1、原子作用力显微技术 ( A t o mi c F o r c e Mi c r o s c o p e ) m、表面胞质团共振技术 ( t S u r f a c ep l a s m o n r e s o n a n c e t e c h n o l o g y,S P R) 、蛋白质片段互补分析 ( P r o t e i n f r a g me n t c o m p l e me n t a t i o n

增强体内病毒复制【 3 7 J。1 . 8 串联亲和纯化技术串联亲和纯化( T a n d e m a i f n i t y p u r i i f c a t i o n .T A P )

是 1 9 9 9年 R i g a u t等[ 3 8]提出的一套分离复合蛋白质

-

3 6 2 -

热带作物学报化学评述与进展，2 0 0 7,3 5 ( 5 ):7 6 0— 7 6 6 .

第 3 2卷

a n a l y s i s )[ 5 2 1、双分子荧光互补技术 ( b i mo l e c u l a r

f l u o r e s c e n c e c 0 mp l e m e n t a t i 0 n,B I F C)『 5 3制等方法也在不断地改进和发展虽然这些技术在病毒与植物的相互作用研究中应用不多 .但随着蛋白质组学时代的到来 .研究蛋白质功能的技术必将越来越受到研究者的重视 .对于揭示蛋白质之间的相互作用关系 .建立相互作用的网络图 .已成为蛋白质研究领

【 4】Ma n j u s r i D,F o x C F .C h e mi c l a C r o s s— L i n k i n g i n B i o l o g y[ J] .An n u￣ Re v i e w o f Bi o p h y s i c s a n d Bi o e n g i n e e r i n g, 1 9 7 9, 8:1 6 5—1 9 3 .

【 5】L i u

H J,We t C H,Z h o n g Y W,e t a 1 .R i c e b l a c k - s t r e a k e dd wa r f v i r u s o u t e r c a p s i d p r o t e i n PI O ha s s e l f - i n t e r a c t i o n s a n d

f o r m s o l i g o me r i c c o mp l e x e s i n s o l u t i o n叨.V i r u s R e s e a r c h,2 0 0 7,1 2 7 ( 1 ): 3 4 - 4 2 .

域中的热点。但是 .每种技术都有自身的优缺点 . 研究者需要根据自己的试验目的和需要选择合适的技术方法

【 6】L e s h c h i n e r A D ' Mi n i n a E Ra k i t i n a D V, e t a 1 . O l i g o me r i z a t i o no f t h e p o t a t o v i us r X 2 5 k D mo v e me n t p r o t e i n[ J] .B i o c h e mi s t r y,2 0 0 7,7 3 ( 1 ):5 0 - 5 5 .

【 7]Me t s ' Yi X,R u J, e t o i .S i z e - I n d e p e n d e n t a n d No n c o o p e r a t i v eRe c o g n i t i o n o f d s RNA b y t h e Ri c e S t ip r e Vi us r RNA S i l e n c i n g

3 展望近几年来 .虽然功能蛋白组学的研究技术得到

S u p p es r s o r N S 3[ J] .J o u r n l a o f Mo l e c u l a r B i o l o g y,2 0 1 0,4 0 4 ( 4 ):6 6 5— 6 7 9 .

【 8】L i v i a S,Ma i r a E V,D e n i s L,e t o 1 .A c o i l e d - c o i l i n t e r a c t i o n m e d i a t e s c a u l i l f o w e r mo s a i c v i us r c e l l— t o— c e l l mo v e me n t f J] .P NA S,2 0 0 5,1 0 2 ( 1 7 ):6 2 1 9— 6 2 2 4 .

快速发展。但由于生物体内蛋白质组成、结构和功能的复杂性 .目前的研

究技术还有很多缺陷由于

蛋白质相互作用的研究容易出现假阳性和假阴性的结果 .所以选择 2种以上的研究方法同时进行研究

【 9】E l i z a b e t h S R,Ad a m D B,Mi c h a e l T H,e t o 1 .P r e p a r a t i o n o fs i l i c a s t a b i l i z e d T o b a c c o mo s a i c v i us r t e mp l a t e s or f t h e p r o du c t i o n

是十分必要的现有的蛋白质相互作用技术远不能满足规模化、系统化的研究需要，即使有，也因为载体材料选择的局限或需要复杂昂贵的仪器而受到限制 .如蛋白质芯片技术等。所以 .今后很长一段时间内 .蛋白质相互作用的研究将主要集中在以下

o f me t l a a n d l a y e r e d n a n o p a r t i c l e s[ J] .J o u na r l o f C o l l o i d a n dI n t e r f a c e S c i e n c e,2 0 0 9,3 3 2 ( 2 ):4 0 2— 4 0 7 .

【 1 0】S mi t h D B, J o h n s o n K S . S i n g l e - s t e p p u i r f i c a t i o n o f p o l y p e p t i d e s

e x p r e s s e d i n E s c h e r i c h i a c o l t a s f u s i o n s wi t h g iu t a t h i o n eS - t r a n s f e r a s e[ J] .G e n e,1 9 8 8, 6 7:3 1 - 4 0 . [ 1 1】Xi a o H,S h i Y W,Wa n g L L,e t o 1 .P r o t e i n - p r o t e i n I n t e r a c t i o nBe t we e n Do ma i n s o f PDZ a n d BAR f r o m PI CK1 .Ch e m.Re s .

2个方面：①创建新的研究方法和技术，并将各种蛋白质相互作用的研究技术交叉发展和耦合使用 . 从而更好的更准确的构建蛋白质问相互作用图谱

C h i n e s e U,2 0 0 7,2 3 ( 2 ):1 9 1— 1 9 5 .

【 1 2]余乃通，冯团诚，刘志昕，等 .香

蕉束顶病毒海口分离物 C P基

因的原核表达、纯化及其抗血清制备【 j】 .热带作物学报，2 0 1 0,3l ( 5):7 6 7— 7 71 .

②以实现高灵敏度、高通量、自动化、实时定性定量检测蛋白质相互作用研究技术为目的 .以满足今

[ 1 3】冯团诚，王健华，刘志听 .香蕉束顶病毒海口分离物 N S P基因的原核表达[ J] .热带作物学报，2 0 0 9,3 O ( 9 ):1 3 4 5— 1 3 5 0 . 【 1 4]余乃通，冯团诚，刘志昕，等 .香蕉束顶病毒海口分离物核穿梭蛋白( NS P)的纯化及抗血清制备[ J】 .基因组学与应用生物学 .2 01 0;2 9( 2):3 75 - 3 7 8 .

后大规模的蛋白质相互作用的研究从近年国际上蛋白质研究的发展动向可以看出 .不管是微生物还是动植物的研究领域 .大规模

揭示蛋白质之间的相互作用关系 .建立相互作用的网络图，已成为蛋白质研究领域中的热点。大规模的蛋白质相互作用技术对于准确理解蛋白质功能、 揭开各种细胞活动的奥秘具有重大的意义 .势必会引导蛋白质组学的发展进入一个全盛时期参考文献【 1】D e y D,B o c h k a i r o v D E, J o k h a d z e G G,e t . C r o s s - l i n k i n g o fs e l e c t e d r e s i d ue s i n t h e N— . a n d C— t e r mi n a l d o ma i n s o f Es c h e r wh i a c o l t p ot r e i n L 7/ L1 2 t o o t he r ib r o s o ma l p ot r e i n s a n d

【 1 5】朱玉贤，李毅 .现代分子生物学【 M】 .2版 .高等教育出版社，2 o o 2:1 8 5 -l 8 6. .

【 1 6 1 Ni c o l a s B, T s a i C I 4,Mi r a n d a e t a 1 . T h e p o l e r o v i us r s i l e n c i n g s u p p r e s s o r P 0 t a r g e t s a r g o n a u t e p r o t e i n s f or d e g r a d a t i o n[ J] .C u r r e n t B i o

l o y,2 g 0 0 7,l 7 ( 1 8 ):1 6 0 9 - 1 6 1 4 .

【 1 7]F i t z g e r ld a K.I n v i t r o d i s p l a y t e c h n o l o g i e s - n e w t o o l s f o r d ug r d i s c o v e r y[ J] .D ug r Di s c o v e y r T o d a y,2 0 0 0,5 ( 6 ):2 5 3 - 2 5 8 . 【 1 8]S u i J H,【 J i W H,Mu r a k a mi A,e t o 1 .P o t e n t n e u t r a l i z a t i o n o fs e v e r e a c u t e r e s p i r a t o y r s y n d om r e ( S AR S ) e o r o n a v i r u s b y a h u m a n

m Ab t o S 1 p r o t e i n t h a t b l o c k s r e c e p t o r a s s o c i a t i o n[ J】 .P r o e .Na t 1 .Ac a d .S c i .US A,2 0 0 4,1 01:2 5 3 6 - 2 5 41 .

t h e e f e c t o f e l o n g a t i o n f a c t o r T u[ J] .J B i o 1 .C h e m.,1 9 9 8,2 7 3:1 6 7 0—1 6 7 6 .

【 1 9】Ma r c e l P,D i c k L,A r j e n S,e t o 1 .P h a g e d i s p l a y— s e l e c t e ds i n g l e -c h a i n a n t i b o d i e s c o n f e r hi g h l e v e l s o f r e s i s t nc a e a g a i n s t

『 2 2 1 l Wa b o u t A J,S o r d e l l a R, L u X,e t o 1 .P r o t e i n i n t e r a c t i o nma p p i n g i n C e l e g a n s u s i ng p r o t e i n s i n v o l v e d i n v u l v a l

T o ma t o s p o t t e d w i l t v i u4 r J] . J G e n . V i o1 r ., 2 0 0 5, 8 6: 2 1 0 7 - 2 1 1 3 . [ 2 0】 Ma r i a E V,P i e o r R,O r s o l a

B,e t a 1 .I mm u n o mo d u l a t i o n o fc u c u mb e r mo s a i c v i us r i n f e c t i o n b y i n t r a b o d i e s s e l e c t e d i n

d e v e l o p me n t[ J] .S c i e n c e,2 0 0 0, 2 8 7, 5 4 5 0:l 1 6 .

【 3】孙

宇，贾凌云，任

军.蛋白质相互作用的研究方法[ J] .分析

v i t r o f r o m a s t a b l e s i n g l e— f r a m e w o r k p h a g e d i s p l a y l i b r a r y[ J] .P l a n t Mde c u l a r B i o l o y,2 g 0 0 5,5 8 ( 3 ):3 0 5 - 3 1 6 .

第 2期

余乃通等：蛋白质相互作用技术在热带植物病毒研究中的应用

- 3 6 3 -

[ 2 1】T a n o w i t z M,Vo n Z M.I d e n t i i f c a t i o n o f p r o t e i n i n t e r a c t i o n s b y y e a s t t w o - - h y b i r d s c r e e n i n g a n d c o i mmu n o p r e c i p i t a t i o n[ J] . Me t h o d sMo 1 .Bi o 1 . .2 0 0 4.2 59:3 53—3 6 9 .

pu if r ic a t i o n me t ho d f o r p r o t e i n c o mp l e x c h a r a c t e iz r a t i o n a n d

p r o t e o me e x p l o r a t i o n[ J] . Na t . B i o t e c h n o l,1 9 9 9, 1 7 ( 1 0 ): 1 0 3 0 - 1 0 3 2 . f 3 9]P h i l i p p e J D, K a r i n e L S o p h i e C, e t o 1 .H e a t s h o c k 7 0 p r o t e i ni n t e r a c t i o n wi t h Tu ni r p mo s a i c v i r u s RNA - d e pe n d e n t RNA

【 2 2】C h i u M H,C h e n I H,B a u l c o m b e D C,e t .T h e s i l e n c i n gs u p p r e s s o r P 2 5 o f

P o t a t o v i r u s X i n t e r a c t s wi t h Ar g o n a u t e 1

p o l y m e r a s e w i t h i n v i r u s— i n d u c e d me mb r a n e v e s i c l e s L刀 .V i r o l o y, g2 0 0 8,3 7 4 ( 1 ): 2 1 7— 2 2 7 .

a n d me d i a t e s i t s d e g r a d a t i o n t h r o u g h t h e p r o t e a s o me p a t h w a y[ J] .Mo l e c u l a r P l nt a P a t h o l o g y,2 0 1 0,1 1 ( 5 ): 6 4 1 - 6 4 9 .

[ 4 0】A n d e r s H,K i r s t i i n a M.P u i r i f c a t i o n o f v i r l g a e n o me- l i n k e dp r o t e i n VP g f r o m p o t a t o v i r u s A—i n f e c t e d p l a n t s r e v e ls a s e v e r a l

【 2 3]Mi n S I - I,K y u n g N K J e o n g H L e t 1. O I d e n t i i f c a t i o n o f a mi n oa c i d s e q u e n c e s d e t e r mi n i n g i nt e r a c t i o n b e t we e n t h e c u c u mb c r

es p t - t r a n s l a t i o n l a l y m o d i i f e d or f ms o f t h e p ot r e i n[ J] . J Ge n . V j m1 .,2 0 0 8 .8 9:1 5 0 9 -1 51 8.

mo s a i c v i us r - e n c o d e d 2 a p o l y me r a s e a n d 3 a m o v e m e n t p r o t e i n s【刀 .J G e n . Vi m1 .,2 o o 7,8 8:3 4 4 5— 3 4 5 1 .

【 4 1]J a j S R,Me i C,Ro n ld a C,e t n f .I mp r o v e d t a n d e m a f i f n i t yp u if r i c a t i o n t a g nd a me t h o d s f o r i s o l a t i o n o f

p r o t e i n h e t e r o c o mp l e x e s

[ 2 4】O d o n Mi k h a i l S, P a r k H S, e t 1. O A n e w p l a n t p r o t e i n i n t e r a c t swi t h e l F 3 a n d 6 0 S t o e n h nc a e v i us—a r c t i v a t e d t r a n s l a t i o n

f r o m p l a n t s[ J] . T h e P l a n t J o u r n l, a 2 0 0 4,3 8 ( 1 ):1 7 2 - 1 8 1 . [ 4 2】L e u k i n g A,Ho n r M,E i c k h o f H,e t 1.P O r o t e i n mi c r o a r r a y s or fg e n e e x p r e s s i o n a n d a n t i b o d y s c r e e n i n g . An a 1 . Bi o c h e m.,

r e - i n i t i a t i o n[ J] .T h e E MB O J o u na r l, 2 0 0 9,2 8: 3 1 7 1 - 3 1 8 4 . 【 2 5】Z h o u F,Wu G,D e n g e t .I n t e r a c t i o n o f i r c e d w a r f v i us r

o u t e r c a p s i d P8 p r o t e i n wi t h r ic e g l y c o l a t e o x i da s e me d i a t e s

1 9 9 9。2 7 0 ( 1 ):1 0 3— 1 1 1 .

r e l o c a l i z a t i o n o f P 8『 J】 . F E B S L e t t e m,2 0 0 7,5 8 1 ( 1 ):3 4 - 4 0 .

【 4 3]K o r f U,Wi e m a n n S .P r o t e i n mi c r o a r r a y s a s a d i s c o v e r y t o o l o f rs t u d y i n g p ot r e i n— p r o t e i n i n t e r a c t i o n s[ J] .E x p e r t Re v .P r o t e o mi c s,2 0 0 5, 2 ( 1 ):1 3— 2 6 .

[ 2 6】Ya s u y u k i Y,T o s h i h i k o K,K o j i H,e t a 1 .I n v i v o i n t e r a c t i o nb

e t we e n To b a c c o mo s a i c v i us r RNA- - d e p e n d e n t RNA p o l y me r a s e

a n d h o s t t r a n s l a t i o n e l o n g a t i o n f a c t o r 1 A[ J] .V i r o l o y,2 g 0 0 6,3 4 7 ( 1 ):1 0 0 - 1 0 8 .

[ 4 4】Z h u H,B l g n M,B a n g h a m R,e t o 1 .G l o b l a na a l y s i s o f p r o t e i na c t i v i t i e s u s i n g p r o t e o me c h i p s[ J] .S c i e n c e,2 0 0 1,9 3 ( 5 5 3 7 ):21 01—21 0 5 .

[ 2 7】梁琳慧，韩忠朝.蛋白质相互作用的研究方法[ J] .生命的化学，2 o 0 5,2 5 ( 3 ):2 5 5— 2 5 7 .

[ 4 5]S t o l l D,T e mp l i n M F,B a c h ma nn J,e t n f .P r o t e i n m i c oa r r r a y s: a p p l i c a t i o n s a n d f u t u r e c h ll a e n g e s[ J] .C u r t .O p i n .D r u g D i s c o v .De v e 1 .,2 0 0 5,8 ( 2 ):2 3 9— 2 5 2 .

[ 2 8】F i e l d s S,S o n g O K .A n o v e l g e n e t i c s y s t e m t o d e t e c t p r o t e i n - p r o t e i n i n t e r a c t i o n s[ J] .N a t u r e,1 9 8 9,3 4 0 ( 6 2 3 0 ):2 4 5 - 2 4 6 . 【 2 9]刘先早 .蛋白质相互作用研究的技术方法和应用【 J】 .西南国防医药，2 0 0 9,1 9 ( 2 ): 2 5 1 - 2 5 3 . 【 3 0 1 S t u a r t A M,J o a c h i m F U.Y e a s t T w o - Hy b r i d As s a y t o I d e n t i f y H o s t - Vi r u s I n t e r a c t i o n s[ J] .Me t h o d s i n Mo l e c u l r a B i o l o g y,2 0 0 8,4 5 1 ( 5 ):

6 4 9— 6 7 2 .

[ 4 6】S c h a u b S,Wi l k i n s L We i l e r T,e t a f .U i r n e P r o t e i n P r o i f l i n gwi t h S u fa r c e En h a n c e d L a s e r De s o r p t i o n/ I o n i z a t i o n Ti me o f

F l i g h t Ma s s S p e c t om r e t r y[ J] .K i d me y I n t,2 0 0 4, 6 5 ( 1 ): 3 2 3 - 3 3 2 . 【 4 7】钟春英，彭蓉，彭建新，等 .蛋白质芯片技术【 J] .生物技术通报 .2 0 0 4 .2:3 4— 3 7 .

[ 3 l】L u L M,Q i n M L,Xi e L Y,e t 1.S O t u d i e s o n t h e i n t e r a c t i o n sb e t w e e n t h r e e m a j o r f u n c t i o n a l p r o t e i n s o f r i c e s t i r p e v i us r u s i n g y e a s t t w o— h y b i r d s y s t e m[ J] .J o u r n a l o f A g i r c u l t u r l a S c i e n c ea n d T e c h n o l o g y . 2 0 0 7,l ( 1 ):5 - 1 1 .

【 4 8]I g o r L M,H e d i M. Q u nt a u m d o t - b a s e d r e s o n a n c e e n e r g y t r a n s f e ra n d i t s g r o w i n g a p p l i c a t i o n i n b i o l o g y f J】 .P h y s .C h e m.C h e m.P h y s .,2 0 09,1 1:1 7 -4 5 .

[ 4 9】T o m M, D a v i d L S . Ap p l i c a t i o n s o f t h e g r e e n l f u o r e s c e n t p r o t e i n i n c e l t b i o l o y g a n d b i o t e c h n o l o g y【 J】 . N a t u r e B i o t e e h n o l o y,1 g 9 9 7,1 5:9 6 1— 9 6 4 .

f 3 2]E f r a t G,Av i Z,Y a e l L .I n

t e r a c t i o n w i t h h o s t S G S 3 i s r e q u i r e df o r s u p p r e s s i o n o f RNA s i l e n c i n g by t o ma t o y e l l o w l e a f c u r l

v i r u s V2 p r o t e i n[ J] P N A S,2 0 0 8,1 0 5 ( 1 ):1 5 7 - 1 6 1 .[ 3 3 J K a r i mo v a G,P i d o u x J,U l l ma nn^ e t a 1 .A b a c t e r i l a t w o— h y b i r d s y s t e m b a s e d o n a r e c o n s t i t u t e d s i g n a l t r a n s d u c t i o n p a t h w a y[ J] .P r o c .N a t 1 .A c a d .S c i .U S A,1 9 9 8, 9 5 ( 1 0 ): 5 7 5 2— 5 7 5 6 .

【 5 0]B i n n i g G,Q u a t e c F .A t o m i c F o r c e Mi c os r c o p e[ J] .P h y s .R e v .L e t t .,1 9 8 6,5 6 ( 9 ): 9 3 0— 9 3 3 .

【 5 1]陈巨莲 .表面质膜共振技术一种检测蛋白质特异结合反应的方法[ J】 _昆虫知识，2 0 0 3, 4 O( 2 ):1 1 9— 1 2 3 . [ 5 2】彭琳，张红，蒋太交，等 .蛋白质相互作用检测新方法一蛋白片段互补叨.安徽农业科学， 2 0 0 8, 3 6 ( 1 9 ): 8 0 2 3— 8 0 2 5, 8 2 3 9 .

[ 3 4】L a d a n t D,Ka i r mo v a G .Ge n e t i c s y s t e ms or f a n ly a z i n g p r o t e i n - p r o t e i n i n t e r a c t i o n s i n b a c t e i r a[ J] .R e s .Mi c r o b i o l,2 0 0 0,1 5 l( 9):7 1 1 - 7 2 0 .

【 5 3】严晶，霍克克.双分子荧光互补技术及其在蛋白质相互作用研究中的应用[ J] .生物化学与生物物理进展，2 0 0 6,3 3( 6 ):5 8 9—5 9 5 .

[ 3 5】S h a y wi t z A J,D o v e S L,G r e

e n b e r g M E,e t 1.A O n ly a s i s o fp h o s p h o r y l a t i o n— - d e p e n d e n t p r o t e i n—。 p ot r e i n i n t e r a c t i o n s u s i n g a

b a c t e i r a l t w o - h y b i r d s y s t e m[ J] . S c i .S T K E .,2 0 0 2 .1 4 2:1 1 .[ 3 6】D o v e S L,H ch o s c h i l d A .A b a c t e i r a l t w o - h y b i r d s y s t e m b a s e d

[ 5 4】郑红英，燕飞，侯明生，等.双分子荧光互补技术及其在植物病毒学研究中的应用【 J] .病毒学报，2 0 0 9,2 5, 4:3 2 3— 3 2 6 .

o n t r a n s c i r p t i o n a c t i v a t i o n[ J] .Me t h o d s Mo 1 .B i 0 1 . .2 0 0 4 .2 6 1:2 31— 46 .

[ 3 7】T uu r s E A, J a c k R P,T h e r a N M,e t 1.S O i l e n c i n g o f a G e n eEn c o d i n g a Pr o t e i n Co mp o n e n t o f t h e Ox y g e n- Ev o l v i n g Co mp l e x o f Ph o t o s y s t e m I I En h a n c e s Vi us r Re p l i c a t i o n i n

P l nt a s【 J] . Vi r o l o y,2 g 0 0 2,2 9 5 ( 2 ): 3 0 7 - 3 1 9 . [ 3 8】R i g a u t G,S h e v c h e n k o A,R u t z B,e t O 1.A g e n e r i c p r o t e i n

责任编辑：高

静

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/2y01.html