D-Dimer标准操作流程

XXXX医院检验科 ACL8/9000D-二聚体标准操作流程 文件编号: 生效日期: 仪器序列号： 页码/Pages：1/7 版本 / Revision: D－二聚体 标准操作流程

目录

1 目的

2 检测原理 3 产品信息 4 试剂配制

5 试剂保存和稳定性 6 预防和警告

7 样本收集和准备

8 检测需要但试剂盒中未提供的耗材 9 质量控制 10定标

11定标方法 (如需要) 12操作流程 13结果

14 结果解释 15程序局限性 16 预期结果 17 性能特征 18 参考文献

1 目的

此程序提供在ACL? 8000，ACL9000上使用HemosIL? D-Dimer试剂用于D-二聚体检测的指导。

2 测试原理

D-二聚体存在于因子XIIIa交联纤维蛋白(XDP)纤溶酶降解过程中形成的可溶性衍生物中。这些可溶性纤维蛋白降解产物包括一种原纤维蛋白原分子中没有

的新抗原（D-二聚体结构），以及它的降解产物和可溶性纤维蛋白。 D-二聚体胶乳试剂是一种大小均一的聚苯乙烯乳胶颗粒悬浊液，这些乳胶颗粒上包被有对纤维蛋白可溶性衍生物中的D-二聚体结构具有高度特异性的单克隆抗体。当含有D-二聚体的血浆与D-二聚体试剂盒中的乳胶试剂和反应缓冲液

起草人: 日期： 修改人： 日期： XXXX医院检验科 ACL8/9000D-二聚体标准操作流程 文件编号: 生效日期: 仪器序列号： 页码/Pages：2/7 版本 / Revision: 反应时，包被的乳胶颗粒会发生凝集。凝集的程度与样本中D-二聚体浓度成正比，仪器通过检测405 nm 波长处，由凝集引起的透射光的减少进行测定（透射免疫比浊法）。

3 产品信息

D-二聚体试剂盒（P/N 20008500）内含： R 胶乳试剂：4 瓶x 3 mL包被有鼠单克隆抗体 (MA-8D3)聚苯乙烯乳胶颗粒冻干悬浊液，内含牛血清白蛋白，缓冲液，稳定剂和防腐剂。 B 反应缓冲液：3瓶x9mL磷酸盐缓冲液，内含牛血清白蛋白，稳定剂和防腐剂。 C D-二聚体定标液：2 瓶x 1 mL冻干溶液，为从人纤溶酶降解的纤维蛋白中

部分纯化的D-二聚体。内含牛血清白蛋白，缓冲液，稳定剂和防腐剂。 D-二聚体质控（P/N 20008610）试剂盒内含： L 低值质控： 5 瓶x 1 mL冻干溶液，为从人纤溶酶降解的纤维蛋白中部分纯化的D-二聚体。内含牛血清白蛋白，缓冲液，稳定剂和防腐剂。 H 高值质控：5 瓶x 1 mL冻干溶液，为从人纤溶酶降解的纤维蛋白中部分纯化的D-二聚体。内含牛血清白蛋白，缓冲液，稳定剂和防腐剂。

4 试剂配制

胶乳试剂:用3 mL NCCLS II型或相同质量要求的去离子水复溶。盖上盖子，轻轻混匀。确保充分溶解。置15-25oC 平衡30分钟，用前混匀。请勿用力振摇。防止产生气泡。

反应缓冲液:直接使用，用前颠倒混匀。

D-二聚体定标液:每瓶用1 mL NCCLS II型或相同质量要求的去离子水复溶。

o

盖上盖子，轻轻混匀。确保充分溶解。置15-25C 平衡30分钟，用前混匀。请勿用力振摇。防止产生气泡。

D-二聚体质控：每瓶用1 mL NCCLS II型或相同质量要求的去离子水复溶。 盖上盖子，轻轻混匀。确保充分溶解。置15-25oC 平衡30分钟，用前混匀。请勿用力振摇。防止产生气泡。

5 试剂保存和稳定性

未开封的试剂和定标液可稳定至2-8 oC至试剂盒上标注的有效期。

为了最佳试剂保存，建议不使用时，将试剂从仪器系统取出，使用原瓶，保存于

起草人: 日期： 修改人： 日期： XXXX医院检验科 ACL8/9000D-二聚体标准操作流程 文件编号: 生效日期: 仪器序列号： 页码/Pages：3/7 版本 / Revision: 2-8 oC。

胶乳试剂：复溶后于原瓶中2-8 oC稳定一个月，或者在ACL 8000-10000上（15oC）稳定1天，不可冻存。

反应缓冲液：开瓶后于原瓶中2-8 oC稳定一个月，或者在ACL 8000-10000上（15-25oC）稳定1天。 D-二聚体定标液：复溶后于原瓶中15-25oC稳定3天；2-8oC稳定一个月；–20oC 稳定二个月。冷冻的定标液应当在37oC复溶，用前轻轻混匀，不可反复冻溶。 D-二聚体质控：复溶后于原瓶中15-25oC稳定3天；2-8oC稳定一个月；–20oC稳定二个月。冷冻的质控液应当在37oC复溶，用前轻轻混匀，不可反复冻溶。

6 预防和警告 潜在传染危险！

此产品的耗材经FDA认证的检测方法检测，不含乙肝表面抗原 (HBsAg)，抗HCV和抗 HIV (1 & 2)抗体。应视作潜在传染原处理。

所有试剂均含低于0.1%叠氮钠，在含铅的金属管中可能形成易爆的叠氮化物，请安全处理废弃物。 避免于皮肤和眼睛接触(S 24/25)，不可倒入排水沟(S 29)。需穿着相应的防护服(S 36)。

7 样本收集和准备

9份新鲜静脉血加入1份枸掾酸三钠抗凝剂中混匀。

有关样本采集，处理和贮存的详细说明请参阅临床和实验室标准委员会CLSI (原 NCCLS) H21-A4 文件。

冷冻样本应当在 37oC迅速复溶，检测前必须离心。复溶后2小时内完成检测。

8 检测需要但试剂盒中未提供的耗材

? NCCLS II型或相同质量要求的去离子水 ? D-二聚体质控（P/N 20008610） ? 因子稀释液（P/N 09757600）

9 质量控制

推荐使用两个水平的质控进行完整的质量控制过程。上表中所列低值和高值D-二聚体质控品可用于该质控程序。每个实验室应当建立自己的平均值和标准差，以及整套质控程序用来监测实验测试。 依据良好的实验室规范，质控应当每8小时运行一次。请参阅Westgard et al 文献判别质控出控并获得相应的解决办法。

10 定标

起草人: 日期： 修改人： 日期： XXXX医院检验科 ACL8/9000D-二聚体标准操作流程 文件编号: 生效日期: 仪器序列号： 页码/Pages：4/7 版本 / Revision: 要想正确获得D-二聚体测试结果，需要进行定标并保存定标曲线。进行定标时不能同时运行样本。以下情况，需要定标： ? 更换试剂批号 ? 满足当地法规需要 ? 根据实验室内部需要

11 定标方法（如需要）

1. 从主菜单，选择 Setup/Liquids 。输入测试所需液体的所有试剂信息。 2. 在液体信息屏幕，输入从D-二聚体试剂盒内获得的D-二聚体定标液的靶值。 3. 选择 Confirm（√） 关闭液体设置屏幕。

4. 从主菜单，选择 Calibration/Calibrate 。从Tests to Calibrate列表钟选择 D-Dimer。 5. 选择 Materials Map 图标。查看试剂位置，更新容量，检查批号，反应盘等等。

6. 选择 Start 图标。

7. 查看定标结果，如果R <0.980，请重新定标。 备注： DD h（D-二聚体高值）项目使用正常的D-Dimer定标曲线。无需对其另外输入定标靶值。 ACL 8000-9000 将自动稀释50% 和25% 定标点，每个定标水平重复4次测试–100%，50% 和25%。

2

定标曲线的相关系数R必须大于0.980。 变异系数CV%值要求： ? < 4.0% ， 1000 ng/mL ? < 6.0% ， 500 ng/mL ? < 10.0% ， 250 ng/mL

12 操作流程

1、如需要，确认适当的D-Dimer和D-D H测试项目已经被活化（操作手册第4章节）。

2、如需要，定义液体设置（操作手册第4章节）。 3、如需要，建立质控文件（操作手册第3章节）。

4、如需要，设置组合，包含D-Dimer和D-D H。如使用单测试/组合测试，使用或不使用条码运行样本，请参阅手册（操作手册第4章节）。 5、在样本盘上装载原始试管，样本杯和/或质控。确保条码管上的条码朝向样本盘外壁。

6、选择 Analysis，选择 Profile Session或Single Test.。

a、如选择 Profile Session，在当前组合下，下拉选择一个包含

D-Dimer和D-D H项目的测试组合，这将利于 在同一次测试内完成D-Dimer和D-D H项目测试。

起草人: 日期： 修改人： 日期： XXXX医院检验科 ACL8/9000D-二聚体标准操作流程 文件编号: 生效日期: 仪器序列号： 页码/Pages：5/7 版本 / Revision: b、如选择 Single Test Session，选择D-Dimer 项目。需要使用D-D

H的样本必须再次选择D-D H 进行另外单独测试

7、选择 Read Bar Codes 图标，不含条码的样本。比如质控样本将会触发样本识别错误报警。选择 OK ，并通过选择 Enter/Edit Sample ID 图标输入样本编号，或者选择 Add QC 添加质控编号。如需要，请重复以上操作。 8、如果 LIS 为非选项，对没有测试请求的样本选择 Order Test 图标。使用箭头键选择一个测试，选择 Program Tests 图标添加项目测试请求。按Confirm 图标保存设置并关闭窗口。

9、在状态栏内（待测）确保所有测试均提示 “P” 。 10、选择 Materials Map 图标。检查试剂耗材位置，更新耗材量，检查批号，反应盘等等。

11、选择 START 图标。

12、仪器将确认可用的反应孔，并且提示操作者输入反应盘上第一和最后一个孔的位置。

13 结果计算

D-二聚体结果以ng/mL形式报告。更多详情，请参阅仪器操作手册。

备注：由于没有国际参考标准，一些生产厂家用FEU（纤维蛋白原当量单位）表示D-二聚体的结果。这两种单位之间的关系大约为： 2 FEU = 1 ng/mL.1

14 结果解释

D-二聚体检测被广泛应用于血栓的诊断和溶栓治疗的监测。

D-二聚体水平升高可见于：深静脉血栓（DVT），肺栓塞(PE) 和弥散性血管内凝血(DIC)。D-二聚体水平升高也可见于正常妊娠过程，但是D-二聚体的极度升高提示有并发症的可能。

然而仅仅有D-二聚体结果的升高不足以用来诊断DVT和PE，而阴性的D-二聚体检测结果可用来排除诊断静脉血栓。5许多文献均曾探讨过如何确定临界值用来作为静脉血栓的诊断。

15局限性/干扰

以下情况，D-二聚体结果不受影响： ? 血红蛋白低于 50 mg/dL ? 胆红素低于 5 mg/dL

? 甘油三酯低于1000 mg/dL

? 类风湿因子低于60 IU/mL（血浆中存在类风湿因子可能造成假阳性结果）。 溶血标本不应该用于检测。

IL D-二聚体胶乳试剂使用的单克隆抗体 (MA-8D3)，对交联纤维蛋白降解产物的D-二聚体具有高度特异性。 当血浆中加入浓度高于20 ug/mL纯化的降解片断D和E时，可观察到较低的交叉反应。

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文件编号: 生效日期: 仪器序列号： 页码/Pages：6/7 版本 / Revision: 16参考范围

通过每次对30例健康成人供血者标本，使用几个不同批号的试剂和定标液，进行D-二聚体项目检测，对正常参考范围进行评估。 总测试例数为240（30x8）

仪器 数量 正常范围高限 (单位) ACL100-10000 240 255 (ng/mL)

由于许多因素（包括患者年龄）均可影响DD结果，每个实验室应当建立自己的参考范围。该项目的检测结果应当结合其它信息，包括临床前后检测的结果等，一起使用，联合诊断。

17 性能特征 精密度：

批内和总的精密度的评估是通过多次运行获得的。 ACL 100-10000 平均值 (ng/mL) CV% 相关性： 系统 低值质控 310 6.01 高值质控 732 2.42 相关系数参考方法 r ACL 100-1000 1.26 240.4 0.998 D-Dimer EIA 另外，使用IL公司D-Dimer试剂和商业酶免疫测定（EIA）试剂进行比较，对67例样本（10例正常，38例DIC患者，9例深静脉血栓DVT和10例静脉疾患）D-二聚体结果进行评估。ACL血凝仪的相关系数为 0.958 (n=67)。所有经临床诊断的DIC和DVT病人样本其D-二聚体水平均升高。

精密度和相关性结果均使用特定批号的试剂和质控检测获得。

斜率 截距 最低检测限： ACL 系列血凝仪 - 140 ng/mL 线性：

起草人: 日期： 修改人： 日期： XXXX医院检验科 ACL8/9000D-二聚体标准操作流程 文件编号: 生效日期: 仪器序列号： 页码/Pages：7/7 版本 / Revision: 系统 ACL 100-10000 200-1050 ng/mL

在ACL系列血凝仪上低于

20000 ng/mL均无前带现象。

高于1050 ng/mL 的样本结果应该用因子稀释液对样本进行1:5 (50 μL 样本 + 200 μL 因子稀释液)稀释后重新检测。 如果检测结果仍然高于1050 ng/mL应当重复此程序（比如进行1:25 或 1:125稀释）。打印的结果需根据稀释情况，乘上5，25或125倍数。

具有自动重检（高值D-二聚体，DD H）功能的仪器，比如ACL 8000-10000，能自动执行 1:5稀释，并且自动换算结果，从而使测试范围达到 5250 ng/mL。超过 5250 ng/mL的样本必须使用1:25 或 1:125手工稀释，使用正常测试进行检测，检测结果乘上稀释倍数。

18 参考文献

1. HemosIL? D-Dimer package insert issued July 2003, Instrumentation Laboratory.

2. HemosIL? D-Dimer Controls package insert issued March 2003, Instrumentation Laboratory.

3. ACL 8000/9000/10000 Operator’s Manual, pn19085468, Instrumentation Laboratory.

4. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Collection, Transport, and Preparation of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance of Coagulation Assays – 4th Edition; Approved Guideline. NCCLS document H21-A4, 2003. 5. Curtin N et al. Extensive Evaluation of the Instrumentation Laboratory IL Test? D-Dimer immunoturbidometric assay on the ACL? 9000

determines the D-Dimer cutoff value for reliable exclusion of venous thromboembolism. Laboratory Hematology 2004; 10:88-94.

6. Marlar RA. The value of D-Dimer testing. Advance for Administrators of the Laboratory 2003; 12(1):52.

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本文来源：https://www.bwwdw.com/article/2x6p.html