穿山龙中薯蓣皂苷元的提取

穿山龙中薯蓣皂苷元的提取、分离、鉴定

薯蓣皂苷元俗称薯蓣皂素，存在于薯蓣科（Dioscoreaceae）植物中，一般含量约为1～3%，我国薯蓣科植物资源丰富，种类亦多，分布南北各地，其中作为薯蓣皂甙元生产原料的植物，主要有盾叶薯蓣（Dioscorea zingiberesis C.H.Wright）俗称黄姜、穿龙薯蓣（D.nipponica Makino）俗称穿山龙，用其根茎提取薯蓣皂甙元。

薯蓣皂甙属甾体皂甙，水解可得薯蓣皂甙元，这种甾体皂甙元，是近代制药工业中合成甾体激素和甾体避孕药的重要原料。

本实验以穿山龙为原料，穿山龙中含有多种甾体皂甙，有水溶性皂甙和水不溶性皂甙，结构多数不详，总皂甙水解可得薯蓣皂甙元，其含量可达1.5～2.6%。 一 主要成分理化性质

薯蓣皂甙（dioscin）为无定形粉末或针状结晶，mp288℃。可溶于乙醇、甲醇、乙酸，难溶于乙醚等弱极性有机溶剂，不溶于水。

薯蓣皂甙元（diosgenin） 为白色结晶性粉末，mp204～207℃，[α]25D-129 o（C=1.4氯仿）。可溶于常用有机溶剂及醋酸中，不溶于水。 二 目的要求

1.掌握亲脂性中性成分（甾体皂甙元）的提取方法。 2.掌握薯蓣皂甙及薯蓣皂甙元的性质和检识方法。 三 实验原理

薯蓣皂甙元在植物体内与糖结合成甙，但经水解可得薯蓣皂甙元和单糖，利用薯蓣皂甙元不溶于水，易溶于有机溶剂的性质，可用石油醚连续回流将其提取出来。 四 实验方法及注意事项 1.预实验

取穿山龙粗粉5g，加水浸泡（1:10）1小时或置80℃水浴上温浸30分钟，过滤得滤液供以下试验。

（1）泡沫试验：取供试液2ml于试管中，紧塞试管口后猛力振摇，试管内液体则产生大量的持久性的似蜂窝状泡沫（示有皂甙）。（皂苷有降低水溶液表面张力的作用，它的水溶液经强烈振摇能产生持久性的泡沫，不因加热而消失。皂苷具有乳化剂的作用，所以它可以代替肥皂用作清洁剂、去垢剂。皂苷之所以具有表面活性，能产生泡沫和能作为乳化剂，是由于其分子中亲脂性的皂苷元部分和亲水性强的多糖部分能否达到适当的配比，当这两部分的配比适当时就能表现出表面活性。若配比不恰当，亲水性部分强于亲脂性，或亲脂性强于亲水性，分子内部失去平衡，表面活性作用就不易表现出来。所以有不少皂苷没有起泡性或起

泡性很弱，如甘草酸的起泡性很弱，薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷等难溶于水或不溶于水，混水振摇时自然不易产生泡沫。 ） （2）溶血试验：取2%血球悬浮液1ml，加生理盐水8ml，再加上述供试液1 ml，混合均匀后放置，几分钟内则溶液由红色混浊变成红色透明，产生溶血现象（示有皂甙）。 （注：此试验可同时作空白对照以兹比较现象更为明显。操作方法相同，只以生理盐水1ml代替供试液即可。） 2.薯蓣皂甙元的提取、分离 穿山龙粗粉（40g） 置园底烧瓶中，加水200ml，浓H2SO4 20ml ，室温浸泡 24小时，文火加热回流4～6小时，放冷，倾出酸水液 酸性药渣 用清水漂洗三次，然后将药渣倒入乳钵中，加Na2CO3粉末 ，反复研磨调PH至中性、

水洗、抽干 中性药渣 低温（80℃）干燥12小时 干燥药渣 置乳钵中研成细粉，置索氏提取器中，以石油醚（60～90℃沸程）为溶剂连续回流提取4～5小时。 石油醚提取液 回收石油醚至剩10～15ml时，迅速倾入小三角瓶中、放置使充分冷却，过滤 滤液 沉淀 用少量冷石油醚洗二次，抽干 薯蓣皂甙元粗品 无水 EtOH或CHCl3：MeOH（1:3）重结晶 薯蓣皂甙元精制品

干燥、称重、计算收率

薯蓣皂甙元纯品 3.薯蓣皂甙元的鉴定

（1）物理常数的测定：mp：204～207℃[α]25D -129 o（C=1.4氯仿）。 （2）化学检识：

① 醋酐-浓硫酸反应（Liebermann-Burchard反应）

取样品少许，置白瓷皿中，加冰醋酸0.5ml使溶解，续加醋酐0.5ml搅匀，再于溶液的边沿滴加1滴浓硫酸，液体则呈现紫红色，最后变为乌绿色。

② 氯仿-浓硫酸反应（Salkowski反应）：

取样品少许，用1ml氯仿溶解，加入1ml浓硫酸后，在氯仿层出现红或蓝色，硫酸层有绿色荧光出现。

（3）UV鉴定

UV λH2SO4 max nm(logε)：334（3.68）412（4.1） 512（3.52） （4）薄层层析

吸附剂：硅胶-CMC薄层板

样 品：5%自制薯蓣皂甙元的乙醇液 对照品：5%薯蓣皂甙元标准品的乙醇液 展开剂：苯：乙酸乙酯（8:2）

显色剂：25%磷钼酸的乙醇溶液（喷洒后110℃加热5分钟）

〖注〗1.原料经酸水解后应充分洗涤呈中性，以免烘干时炭化。 2.在干燥水解原料的过程中，应注意压散团块和勤翻动，以利 快干。

3.在连续回流提取过程中，由于使用的石油醚极易挥发损失，故水浴温度不宜过高，能使石油醚微沸即可。此外可加快冷凝水的流速，以增加冷凝效果。

4.回收石油醚的蒸馏操作，不必另换蒸馏装置。只将索氏提取器中的滤纸筒取出，再照原样装好，继续加热回收烧瓶中的溶剂，待溶剂液面增高至虹吸管顶部弯曲处1cm处，暂停回收，取下抽提器，将其中石油醚移置另外容器中。如此反复操作，即可完成回收石油醚的操作。

5.在连续提取过程中，欲检查有效成分是否提取完全，可取抽提器中提取液数滴，滴于白瓷皿中，挥散溶剂、观察有无残留物。然后进行醋酐-浓硫酸反应。若反应呈阴性，示已提取尽。

6.所得薯蓣皂甙元粗品可作溶点测定，若测定不合格时再进行重结晶处理。 五 实验指导

1.实验安排：（需16学时） 2.思考题

（1）甾体皂甙可用哪些反应进行鉴定？

（2）试设计一种从穿山龙中提取薯蓣皂甙的工艺流程，并说明提取、分离原理。 （3）使用石油醚作提取溶剂时，操作中应注意哪些事项?

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