Bcl-2、Bax在胃癌及胃癌前病变中的表达与细胞凋亡的关系

第３７卷第２期２０１４年４月

遵义医学院学报

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＺｕｎｙｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ

Ｖ０１．３７Ｎｏ．２

Ａｐｒ．２０１４

临床医学研究

Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ在胃癌及胃癌前病变中的表达与细胞凋亡的关系

伍冬梅１，李春鸣２

遵义医学院组织胚胎学教研室，贵州遵义５６３０９９；２．遵义医学院病理学教研室，贵州遵义５６３０９９）

［摘要］目的探讨胃癌及胃癌前病变组织中Ｂｅｌ一２、Ｂａｘ的表达情况及其与细胞凋亡的相互关系。方法采用免疫组织化学ｓＰ法分别检测ｌＯ例正常胃黏膜、６０例慢性萎缩性胃炎伴肠化生、３０例异型增生、５０例胃癌中Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ蛋白的表达情况，采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记技术（ＴＵＮＥＬ法）检测组织切片中细胞凋亡的情况。结果慢性萎缩性胃炎伴肠化生、异型增生、胃癌中Ｂｅｌ一２蛋白表达阳性率分别为３１．７％，４３．３％，６２．０％，均显著高于正常胃黏膜（Ｐ＜０．０１）。慢性萎缩性胃炎伴肠化生、异型增生中Ｂａｘ蛋白阳性率分别为５５．０％，３０．０％，其阳性率均显著高于胃癌（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）。Ｂｅｌ一２蛋白表达阳性慢性萎缩性胃炎伴肠化生、异型增生和胃癌中凋亡细胞指数（ＡＩ）显著低于Ｂｃｌ一２蛋白阴性组（Ｐ＜０．０５），Ｂｃｌ一２蛋白表达阳性率与ＡＩ值呈负相关。Ｂａｘ蛋白表达阳性慢性萎缩性胃炎伴肠化生、异型增生和胃癌中ＡＩ显著高于Ｂａｘ蛋白阴性组（Ｐ＜０．０５），Ｂａｘ蛋白表达阳性率与ＡＩ值呈正相关。结论胃黏膜癌变过程中，ＡＩ、凋亡调控基因Ｂｃｌ一２和Ｂａｘ的比值逐渐增加，说明它们在胃癌演变过程中可能起重要作用。［关键词］胃癌；胃癌前病变；Ｂｃｌ一２；Ｂａｘ；细胞凋亡［中图法分类号］Ｒ７３５．２

［文献标志码］Ａ

［文章编号］１０００－２７１５（２０１４）０２－０２０１－０３

ＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎＢｃｌ——２ａｎｄＢａｘｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄ

ｐｒｅｃａｎｃｅｒｏｕｓｌｅｓｉｏｎｓａｎｄ

ａ

Ｄｏｎｇｍｅｉ１，ＬｉＣｈｕｎｍｉｎ９２

（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｉｓｔｏｌｏｇｙａｎｄＥｍｂｒｙｏｌｏｇｙ，ＺｕｎｙｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＺｕｎｙｉＧｕｉｚｈｏｕ５６３０９９，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔ—

ｍｅｎｔｏｆＰａｔｈｏｌｏｇｙ．ＺｕｎｙｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．ＺｕｎｙｉＧｕｉｚｈｏｕ

５６３０９９，Ｃｈｉｎａ）

ｏｆｎｏｒｍａｌｇａｓｔｒｉｃｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｒｃｉ－

『Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ

ａｎｄ

Ｄｒｅｃａｎｃｅｒｏｕｓ

ｃａｓｅｓ

ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎＢｃｌ一２ａｎｄＢａｘｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａ

ｌｅｓｉｏｎｓａｎｄ

ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ

ｃａｓｅｓ

ＴｈｅＢｃｌ一２ａｎｄＢａｘｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｉｎ１０

ｃａｓｅｓ

ｍｕｃｏｓａ．６０

ｏｆｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｅｔａｐｌａｓｉａ，３０

ｏｆｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｄｙｓｐｌａｓｉａｏｆｓｔｏｍａｃｈａｎｄ５０

ｃａｓｅｓ

ｎｏｍａｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｖｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌＳＰｍｅｔｈｏｄ．ＴｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｅｘｗａｓｅｘａｍｉｎｅｄｂｙＴＵＮＥＬｍｅｔｈｏｄ．

ＲｕｓｕｌｔｓＴｈｅＢｃｌ—２一ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｅｌｌ

ｒａｔｅ

ｉｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｅｔａｐｌａｓｉａ，ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｄｙｓｐｌａｓｉａｏｆｓｔｏｍａｃｈａｎｄｇａｓｔｒｉｃｃａｒｃｉ－

ｎｏｍａｓｗｅｒｅ３１．７％，４３．３％ａｎｄ６２．０％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｈｉｃｈｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｎｏｒｍａｌｇａｓ—ｔｒｉｃ

ｗｅｒｅ

ｍｕｃｏｓａ（Ｐ＜０．０１）．ＴｈｅＢａｘ—ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｅｌｌ

５５．０％ａｎｄ３０．０％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｈｉｃｈ

ａｐｏｐｔｏｔｉｃ

ｒａｔｅ

ｉｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｅｔａｐｌａｓｉａａｎｄｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｄｙｓｐｌａｓｉａｏｆｓｔｏｍａｃｈ

ｗａｓ

ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａｓ（Ｐ＜０．０１，

Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ

ａ

ｉｎｄｅｘ（ＡＩ）ｏｆ

Ｂｃｌ一２一ｐｏｓｉｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｅｔａｐｌａｓｉａ，ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｄｙｓｐｌａｓｉ—

ｗａｓ

ｏｆｓｔｏｍａｃｈａｎｄｇａｓｔｒｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａｓｇｒｏｕｐｓ

ｗａｓ

ａ

ｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎＢｃｌ一２一ｎｅｇａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｇｏｕｐｓ（Ｐ＜０．

０５１．Ｔｈｅｒｅ

ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＡＩａｎｄＢｃｌ一２一ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｅｌｌｒａｔｅ．ＡＩｏｆＢａｘ—ｐｏｓｉｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ｉｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｅｔａｐｌａｓｉａ．ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ

ｄｙｓｐｌａｓｉａｏｆｓｔｏｍａｃｈａｎｄｇａｓｔｒｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａｓｇｒｏｕｐｓ

ｗａｓ

ａ

ｗｅｒｅ

ｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎ

Ｂａｘ—ｎｅｇａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ｇｏｕｐｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅｒｅ

ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＡＩａｎｄＢａｘ—ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｅｌｌ

ａｎ

ｒａｔｅ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｄＡＩａｎｄｔｈｅｒａｔｉｏｏｆＢｃｌ一２ａｎｄＢａｘｍｉｇｈｔｐｌａｙ

ｅｓｉｓｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａ．

ｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎ—

［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ｇａｓｔｒｉｃ

ｃａｒｃｉｎｏｍａ；ｐｒｅｃａｎｃｅｒｏｕｓｌｅｓｉｏｎｓ；Ｂｃｌ一２；Ｂａｘ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ

［基金项目］贵州省卫生厅科学技术基金资助项目（ＮＯ：Ｄ一３７４）；遵义医学院中青年科研启动基金资助项目（ＮＯ：Ｆ一３８９）。［通信作者］李春鸣，女，教授，硕士生导师，研究方向：胃癌，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｍｌｉ＠ｚｍｃ．ｅｄｕ．ｃｎ。

２０１

遵义医学院学报

３７卷

肿瘤是危害人类健康的大患，它的发生是多因素、多步骤的病理过程…，其本质上可能是细胞原癌基因的激活和抑癌基因的失活造成的，最终导致肿瘤的发生。近年来，生命科学研究的领域中，细胞凋亡与癌变关系的研究一直是研究的热点，本课题通过对胃癌及胃癌前病变中细胞凋亡及相关基因Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ表达情况的观察，进一步探讨胃癌

发生的可能分子机制。

～２）。慢性萎缩性胃炎伴肠化生、异型增生、胃癌中Ｂｃｌ一２蛋白表达阳性率与正常胃黏膜对比，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），慢性萎缩性胃炎伴肠

化生Ｂｃｌ一２蛋白表达阳性率与异型增生对比，差

异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。胃癌前病变Ｂａｘ蛋白阳性率与胃癌组织对比，差异有统计学意义（Ｐ

＜０．０１，Ｐ＜０．０５，见表１），慢性萎缩性胃炎伴肠化生Ｂａｘ蛋白表达阳性率与异型增生对比，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。

１材料与方法

１．１

材料与试剂选取我院２００５年１月至２００９

年１月病理科胃黏膜活检及手术标本共１５０例，正常胃黏膜１０例，慢性萎缩性胃炎伴肠化生６０例，异型增生３０例，胃癌５０例。所有标本经１０％福尔马林固定，石蜡包埋，制备４斗ｍ切片。兔抗人Ｂｃｌ一２多克隆抗体、兔抗人Ｂａｘ多克隆抗体、免疫

组化试剂盒、ＤＡＢ显色试剂盒、ＴＵＮＥＬ凋亡试剂盒

图１

注：Ａ：异型增生；Ｂ：胃癌组织。

Ｂｃｌ一２蛋白在异型增生及胃癌组织中的表达

购于武汉博士德生物有限公司。

１．２

（ＳＰ。×４００）

方法

１．２．１免疫组织化学ＳＰ法检测Ｂｃｌ一２蛋白、Ｂａｘ蛋白石蜡切片脱蜡至水，３％过氧化氢室温１０

ｍｉｎ以灭活内源性酶，微波修复抗原，滴加封闭液

室温１０ｍｉｎ，滴加一抗及生物素化二抗，ＤＡＢ显

色，苏木精复染，脱水、透明、封片。第一抗体原液按１：１００稀释，以ＰＢＳ代替一抗作为阴性对照。光镜下观察结果，Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ蛋白阳性信号为细

胞质呈棕黄色或棕褐色。

１．２．２

图２

注：Ａ：异型增生；Ｂ：胃癌组织。

Ｂａｘ蛋白在异型增生及胃癌组织中的表达（ＳＰ。×

ＴＵＮＥＬ技术检测细胞凋亡石蜡切片脱

４００）

蜡至水，蛋白酶Ｋ消化１０ｍｉｎ，滴加封闭液室温３０

表１

胃癌、胃癌前病变中Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ蛋白表达情况

ｍｉｎ，滴加ＴＵＮＥＬ反应混合液６０ｒａｉｎ，ＤＡＢ显色、封片后光镜下观察结果，细胞核呈棕黄色。显微镜下选５个高倍视野，计数每个视野１００个细胞中的凋亡细胞数，计算细胞凋亡指数（ＡＩ值）＝（凋亡细胞数／计算细胞总数）×１００％。

１．３统计学分析采用ＳＰＳＳｌ３．０统计软件进行分析，ＡＩ值以均数－４－标准差（ｘ．４－ｓ）表示，组间比较

采用方差分析，检验水准为０【＝０．０５，Ｐ＜０．０５则

注：与正常胃黏膜比较，８Ｐ＜０．叭，与胃癌比较，６Ｐ＜

０．０１，。Ｐ＜０．０５。

２．２

胃癌及胃癌前病变组织细胞凋亡情况

认为差异有统计学意义。

２

２．１

ＴＵＮＥＬ染色阳性反应物质为棕黄色，位于细胞核，凋亡细胞呈簇状分布或单个散在分布。Ｂｃｌ一２蛋

结果

胃癌及胃癌前病变组织中Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ蛋白

白表达阳性肠化生、异型增生和胃癌中凋亡细胞指

数显著低于Ｂｃｌ一２蛋白阴性组（Ｐ＜０．０５，见表

２），经相关分析发现，Ｂｃｌ一２蛋白表达阳性率与ＡＩ

表达情况Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ蛋白在慢性萎缩性胃炎伴

肠化生、异型增生及胃癌组织中均有表达（见图１

值呈负相关（ｒ＝一０．９１５，Ｐ＜０．０１）。Ｂａｘ蛋白

２期

伍冬梅等 Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ在胃癌及胃癌前病变中的表达与细胞凋亡的关系

表达阳性组中凋亡细胞指数显著高于Ｂａｘ蛋白阴性组（Ｐ＜０．０５，见表３），Ｂａｘ蛋白表达阳性率与ＡＩ值呈正相关（ｒ＝０．８７９，Ｐ＜０．０１）。

表２胃癌、胃癌前病变中Ｂｃｌ一２蛋白表达与细胞凋亡的关系

注：与Ｂｃｌ一２阴性组比较，８Ｐ＜０．０５。

表３胃癌、胃癌前病变中Ｂａｘ蛋白表达与细胞凋亡的关系

注：与Ｂａｘ阴性组比较，８Ｐ＜０．０５。

讨论

胃癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一，但其机

制尚未明确。胃癌的发生很少直接从正常胃黏膜

上皮产生，在癌变之前多经历一段相当长的演变过程，胃黏膜异型增生和肠化生认为是胃癌前病变心Ｊ。近年研究发现，胃黏膜癌变过程中不仅存在活跃的细胞增生，而且存在细胞凋亡的异常旧１。

Ｂｃｌ一２基因是凋亡调控中起关键作用的基因，是保护细胞免受凋亡的重要凋亡抑制基因之一Ｈ１。Ｂａｘ与Ｂｃｌ一２在细胞内可形成二聚体，Ｂａｘ的过表达可拮抗Ｂｃｌ一２的保护效应而使细胞趋于凋亡，

是重要的凋亡诱导基因之一∞Ｊ。

胃黏膜癌变的启动阶段可能存在活跃的细胞

增殖和大量细胞凋亡共存的现象，而推进阶段则可能以细胞增殖为主，细胞凋亡退居其次。细胞过度

增殖和（或）细胞凋亡减少是胃癌发生的生物学基

础哺Ｊ。王琳等【刊研究发现由正常胃黏膜至胃癌前

病变及胃癌的演变过程中，Ｂｃｌ一２对细胞凋亡有

明显的负调节作用。Ｂａｘ具有抑制Ｂｃｌ一２促进细胞凋亡的作用。Ｂｃｌ一２与Ｂａｘ两者之间的比例决定了细胞的命运，若Ｂａｘ占多数则Ｂｃｌ一２被抑制，凋亡被诱导；反之细胞得以生存。本实验用免疫组

化法检测Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ蛋白的表达，结果显示：胃癌

前病变到胃癌的过程中，Ｂｃｌ一２蛋白表达阳性率

逐渐增加，Ｂａｘ蛋白表达阳性率则逐渐减少，Ｂｃｌ一２与Ｂａｘ蛋白表达阳性率之比逐渐增加，说明Ｂｃｌ一２蛋白具有抑制细胞凋亡的作用，Ｂａｘ蛋白具有促进细胞凋亡的作用，Ｂｃｌ一２蛋白表达增加及Ｂａｘ表达减少可能是胃癌发病中细胞凋亡受抑制

的主要机制之一，胃癌的发生可能与细胞凋亡受抑

制有关。

此外，本实验采用ＴＵＮＥＬ技术检测了正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎伴肠化生、异型增生及胃癌

中细胞凋亡的情况，发现胃癌组织中ＡＩ值低于癌前病变组织ＡＩ值，即从慢性萎缩性胃炎伴肠化生、异型增生到胃癌的发展过程中ＡＩ值逐渐下降，表明胃黏膜发生癌变过程中可能存在细胞凋亡受抑

制。在此过程中Ｂｃｌ一２蛋白表达增加，且Ｂｃｌ一２

蛋白表达阳性率与ＡＩ值呈负相关，表明Ｂｃｌ一２参与了对胃黏膜细胞恶性转化过程中的调控，对凋亡具有抑制性调控作用。Ｂａｘ蛋白表达阳性率与ＡＩ

的过程，胃黏膜上皮细胞增殖与凋亡之间的平衡失

调，可能是最终导致胃癌发生的分子基础。

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与细胞凋亡和增生的关系［Ｊ］．世界华人消化杂志，２００４，１２（１５）：２５４３—２５４６．

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和ｐ５３蛋白的表达和意义［Ｊ］．分子诊断与治疗杂志，２０１２，４（６）：３９７—３９９．

［收稿２０１３—１２—０９；修回２０１４—０２—２０］

（编辑：王福军）

．２０３

值呈正相关，表明Ｂａｘ促进了胃黏膜上皮细胞凋亡

３

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/2p44.html