检验科免疫组管理程序性SOP文件

陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：共99页 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 （S—O—P） 拟定人：＿＿＿＿＿＿＿ 批准人：＿＿＿＿＿＿＿ 批准日期：＿＿＿＿＿＿＿ 启用日期：＿＿＿＿＿＿＿ 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第1页共99页 目录 文件名称 页码 免疫实验室的设置及人员情况????????????????3 免疫实验室工作管理程序....................................4 免疫实验室规章制度……………………………………………………6 免疫实验室工作流程……………………………………………………19 免疫实验室操作步骤……………………………………………………20 免疫室内质控失控分析管理制度………………………………………42 外部质控血清的制备和保存……………………………………………44 仪器的使用维护…………………………………………………………45 冰箱的使用、操作和维护程序………………………………………....47 桂林优利特URIT-660酶标仪分析仪操作维护规程………………….49 深圳雷杜RT-3100洗板机的标准操作程序……………………………62 可调式移液器的标准操作程序…………………………………………64 安徽航天SSC-1500ⅡB2生物安全柜的标准操作程序??????.66 电热恒温水浴箱操作规程………………………………………………72 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第2页共99页 目录 文件名称 页码 长沙湘智XZ-4A离心机操作规程………………………………………73 上海三申YM-50A高压蒸汽灭菌器操作规程…………………………75 室内质量控制的标准操作程序…………………………………………78 室间质量评价的标准操作程序…………………………………………87 实验室意外和事故处理…………………………………………………92 免疫室保密制度程序……………………………………………………95 免疫室应急处理程序……………………………………………………97 本操作程序（SOP）的变动程序……………………………………….99 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第3页共99页 免疫实验室的设置及人员情况 为了更好发挥传染病检测在传染病防治工作中的作用，根据《全国传染病检测技术规范》对于传染病的检测要求，我院检验科设置了免疫实验室。为了使检测工作能够正常进行，保证传染病检测结果的正确性和准确性，我们不仅对工作环境条件和检测设施加以整改，而且建立了完整的实验室标准化操作规程，以确保传染病检测结果的准确有效。传染病检测实验室分为清洁区、半污染区和操作区，配备了专用的的生物安全柜、电脑、冰箱、酶标仪、洗板机、恒温培养箱、离心机、高压消毒锅等设备和安全防护用品等。 根据传染病检测实验室工作的需要，我科配备从事检测工作人员6名，其中专职工作人员2名，中级卫生技术职称人员1名，所有人员从业年限均在5年以上。 免疫实验室负责人： 薛军卫 人 员： 魏晓丽 张小玲 陈丽丽 景利娜 倪宇芹 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第4页共99页 免疫实验室工作管理程序 一、目的 对传染病四项（甲肝、乙肝、丙肝、梅毒）、肺炎支原体、风湿四项、生化标本检验前处理工作全过程进行控制，保证检验工作符合规定要求，提供可靠的检验数据和有效的检验报告。 二、范围 适用于本实验室开展的各类医学检验工作的各个环节。 三、职责 1、工作人员负责住院检验样品的接收。 3、负责组织协调完成检验任务，并负责对检验工作质量的监督。 4、工作人员负责执行检验任务，做好检验记录，填报检验结果。 5、报告授权审核人负责检验报告的签发、发放。 6、实验室负责人负责检验资料的归档保管(计算机)工作。 四、工作程序 （一）、检验工作分类 本实验室的检验工作，根据标本的来源不同分为采样检验和送样检验，根据工作性质分为常规标本检验和检验质量抽检委托复检。 （二）、采样及样品管理 采样执行陕西省水电医院检验科文件《临床检验标本采集与送检手册》。 样品接收、分发和保管处理，执行本科程序文件《标本管理程序》和《标本采样管理程序》。 （四）、标本检验 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期

陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第5页共99页 检验执行本科程序文件《标本检验管理程序》和《检验项目标准操作规程》。 （五）、检验依据 1、国家标准方法； 2、部颁标准方法和检验规范； 3、卫生技术部门推荐使用方法； 4、有关科技文献或杂志上发表的方法； 5、自编规程的使用执行《检验方法确认程序》。 （六）、检验实施 检验人员按检验标准或试剂说明书的要求按时完成检验任务，并按程序文件《记录档案管理程序》做好原始记录。 （七）、检验报告的编制、复核和签发按本科程序文件《检验报告管理程序》执行。 （八）、检验方法控制 检验必须按《全国临床检验操作规程》规定的方法或标准检验方法进行，也可用经本科技术负责人批准的非标准检验方法进行。其他检验方法不得采用。 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第6页共99页 免疫实验室规章制度 一、实验室工作制度 1、热爱党，热爱社会主义，坚持四项基本原则，全心全意为人民服务。 2、努力学习政治，刻苦钻研业务，发扬救死扶伤，实行革命人道主义，对病人如亲人，态度和蔼，有问必答。 3、热爱本职工作，服从分配，遵守劳动纪律，做到不迟到、不早退，不擅自离开工作岗位，不私自干私活。 4、严格执行规章制度，尽职尽责，及时做好各项检验结果记录，自觉抵制不良之风。 5、识大体，顾大局，关心集体，团结友爱，不背后议论，搬弄是非。 6、讲究文明礼貌、积极参加爱国卫生运动，美化环境，保持医院科室整洁，安静、大方。 7、免疫实验室应制定严格的管理制度和标准化操作规程，工作人员必须充分了解各项规定并严格遵照执行。 二、岗位责任制 1、岗位责任制是保证工作质量和医疗安全，提高工作效率的重要环节。建立岗位责任制，做到人人分工职责明确，事事有人负责，立足本职，团结互助，相互协调，保证各项任务的胜利完成。 2、免疫实验室由有实践经验的技术人员负责。 3、牢固树立把质量放在第一位的思想，在工作中必须加强检查和复查制度，以保证血液质量及医疗安全。 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第7页共99页 4、交接工作必须认真负责，须核对实物和记录，对工作一般情况、存在问题和注意事项应进行具体交待，否则，发生问题由交班人负责。 5、职工临时因故离开工作岗位，必须将工作委托给能胜任该项工作的人员，否则，发生问题由原担任该项工作者负责。 6、新参加工作的职工，在未熟悉和掌握工作前不能独立工作不能顶岗位，在确能掌握经考核合格后方可。 7、建立免疫实验室专用的精密仪器和重要设备专责岗位制，其他人不得任意使用。严格按照仪器操作规程操作，不可擅自乱改设置。 8、凡是一物多人使用的，除共同负责外，应指定一人为该岗位责任制负责人，负责指导正确操纵，定期安全检查，经常维护保养，保持正常运转，该负责人有权制止任何违章操作和有害设备安全的行为。 9、人员职责分工： 每日正班人员负责样品的采集，接收，执行检验任务，做好检验记录，填报检验数据，签发报告及实验室仪器设备的日常维护和保养。 副班人员负责协助正班人员做好实验室的所有日常工作，并负责对检验工作质量的监督，检验报告的复核、发放，结果的解释，实验室室内消毒以及每日医疗废弃物的消毒处理。 实验室负责人负责检验资料的归档保管(计算机)工作。 三、标本管理制度 （一）、样品的采集和处理 传染病检测最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血。常用的血液样品的采集和处理方法如下： 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第8页共99页 1、血清样品采集和处理 （1）、用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量静脉血，室温下自然放置1?2h，待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15min，吸出血清备用。 2、抗凝血样品采集和处理 （1）、用加有抗凝剂的真空采血管（或一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管），反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。 （2）、应根据实验要求选用适当的抗凝剂(K3EDTA、肝素、枸橼酸钠)。 3、采集样品注意事项 （1）、采集样品原则上应按临床采血技术规范操作。 （2）、采集样品时应注意安全，建议采用真空采血管及蝶形针具，以避免直接接触血液；接触感染者病人血液/体液的操作,应戴双层手套。 （3）、所有的血液、血清均应视为有潜在传染性，都应以安全的方式进行操作。 （4）、应象操作未知传染风险样品一样，小心存放、拿取和使用所有可能有传染性的质量控制和参考物质。用后的包裹应进行消毒。 （5）、采血时一定要注意安全，采血用一次性注射器，谨慎操作，防止发生刺伤皮肤和造成外界污染。 （6）、离心机要使用密闭的罐和密封头，以防液体溢出或在超/高速离心时形成气溶胶。 （二）样品的保存 用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20℃以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2-8℃。 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第9页共99页 （三）样品的接收 1、含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的、穿戴防护衣的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。 2、核对样品与送检单，认真核对标本上病人姓名、年龄、性别、病区、床号、住院号是否与申请单符合。检查样品管有无破损和溢漏，如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时通知有关科室。 3、检查样品的状况，观察标本的量、标本类型、是否抗凝或有小凝块样品，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况，判断标本是否符合检验要求。如果污染过重或者认为样品不能被接受，则应和临床科室联系。 4、打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。 样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。同时应戴口罩、防护眼镜，双层手套以防皮肤或粘膜污染。 7、不符要求的标本，必须第一时间通知临床，说明情况重新采集。不符要求的标本与可疑含有感染性样品用后的包裹同检验后的标本一样进行消毒或无害化处理后废弃。 （四）、标本检测 1、离心机要使用密闭的罐和密封头，以防液体溢出或在超/高速离心时形成气溶胶。 2、在标本足够的情况下，不能浪费、随意丢弃或损坏标本。应象操作未知传染风险样品一样，小心存放、拿取和使用所有可能有传染性的质量控制和参考物质。用后的包裹应进行消毒。 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期

陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第10页共99页 （五）、标本处理 检验标本先用含2-3g/L有效氯消毒剂浸泡半小时，再用高压锅高压消毒。然后用双层专用黄色医用垃圾袋专人收集所有废弃医用垃圾。送专门存放医用垃圾处统一焚化处理。并做好登记。 四、试剂管理制度 （一）、采购与审批 科主任根据需要定期拟定采购计划，交由院领导审批，批核后由科主任与供应商联系进货。 （二）、验收与登记 仓管负责人根据供应商提供的试剂及清单对数量、品种、品牌、包装等进行验收，并将入库数据登记。 （三）、贮存 冷藏试剂统一存放在免疫室实验室专用的冰箱内，冰箱保管及温度登记由专人负责。免疫室试剂一般应2～8℃避光保存，在有效期内使用。 （四）、出库管理 各室提出试剂申领，仓管人填写出库单据，认领人签名后出库。 （五）、其它 1、试剂的保存应严格按照要求存放，以保证有效期内能有效地使用，杜绝浪费现象。 2、仓管人应对试剂库存定期检查，不使用过期变质的试剂。 3、易燃，易爆试剂应分开存放远离火源和电源。 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第11页共99页 4、剧毒试剂必须由科主任和负责科室保卫的同志负责保存，放保险箱内，使用时应有两人在场，并做好登记。 五、环境消毒隔离制度 1、实验室应分为清洁区和操作区，清洁区要注意保护不受污染。操作有气溶胶可能的标本应配置生物安全柜及其它防护设置，如紫外线灯，排气扇等操作区的工作台及地面每日用消毒液擦拭一次，有污染时随时消毒，每周大扫除一次。 2、采血室每日操作前用清水擦拭操作台一次，采血结束用消毒液擦拭操作台、桌子和地面一次，紫外线每日照射消毒二次，每月空气细菌培养一次，紫外线强度定期测定。 3、各种检验标本的收集，送检必须用相应指定的容器留取，不得外溢污染。 4、静脉及末稍采血，应严格执行消毒隔离措施，静脉抽血做到一人一针一筒一巾一带一消毒，所用止血带及纸垫每日消毒，末稍采血一人一片一管，杜绝交叉污染。 5、一次性医用器具包括采血针，注射器、尿杯、血红蛋白微量吸血吸管，应严格做好领发登记，注射器先浸泡消毒后由供应室一对一调换，统一处理，其余一次性器具浸泡消毒后装入污物袋送焚烧炉焚烧。 6、检验人员在进行静脉抽血时应严格遵守无菌操作技术，操作前必须洗手必须戴好帽子与口罩，操作台和手被污染时应用肥皂和流水认真洗手，必要时用消毒液浸泡双手，酒精、碘酒瓶每周更换消毒两次。 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第12页共99页 7、溢出试管外的血液，应立即用碘酒棉签擦拭干净，注意防止玻璃碎片刺伤手，并注意试管有无破裂。 8、当针头和碎玻璃刺伤手时,用流水冲洗,挤出血水,应立即用碘酒消毒局部。 9、实验室操作时应戴上手套。吸取标本，离心振荡等应严格按操作规程，防止自身和实验室受污染。 10、已检查标本与容器分别浸泡于次氯酸钠(2000mg/L)中两小时后，标本倾弃，一次性容器送焚烧，重复使用的经清洗消毒和灭菌后再使用，均要有记录。有毒化学试剂和放射性试剂使用后要经无害化处理，防止污染环境。 11、非科室工作人员不准进入实验室，外来人员参观需经科主任同意方可进入。 六、实验台消毒措施 1、实验台消毒措施必须符合免疫室实验室的通用生物安全要求。由专人按特定程序和方法进行清洁和消毒。 2、台面的清洁消毒，保持清洁、湿式打扫。每天开始工作前用湿布抹擦1次，地面用湿拖把擦1次，禁用干抹干扫。抹布和拖把等清洁用具实验室专用，不得混用，用后洗净晾干，下班前用含氯消毒剂（次氯酸钠，含有效氯2000mg/L）、0.2～0.5%过氧乙酸或75%乙醇抹擦1次。也可用便捷式高强度紫外线消毒器近距离照射消毒。 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第13页共99页 3、应象操作未知传染风险样品一样进行消毒与灭菌，小心存放、拿取和使用所有可能有传染性的血液、质量控制和参考物质，若被上述物品明显污染，如具传染性的标本或培养物外溢，溅泼或器皿打破，洒落于台面，应立即用消毒液消毒，用5000mg/L有效氯消毒剂、过氧乙酸或乙醇洒于污染的台面，并使消毒液浸过污染表面，保持30～60 min后再擦，拖把用后浸于上述消毒液内1h以上。 4、各类在实验室实验台上操作后的废弃物品均应视作物染物分类处理，所有废弃物应视为污染物品，按照《传染病防治法》处理。 七、废弃物处置和实验室消毒 1、废弃物处置 废弃物处置应符合《实验室生物安全通用要求》（GB 19489-2004）和《消毒技术规范（2002年版）》。 从免疫实验室出来的所有废弃物，包括不再需要的样品、培养物和其它物品，均应视为感染性废弃物，应置于专用的密封防漏容器中，安全运至消毒室，并在高压消毒后再进行处理或废弃。 2、常用的物理消毒方法 压力蒸汽消毒，121℃，保持15～20min; 干燥空气烘箱消毒（干烤消毒），140℃，保持2～3h。 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第14页共99页 3、常用的化学消毒方法 最常用的化学消毒剂是含氯消毒剂（次氯酸钠，含有效氯2000～5000mg/L）、75%乙醇和2%戊二醛，保持10～30 min。 4、废弃物缸：5000mg/L 次氯酸钠。 5、生物安全柜工作台面和仪器表面：75%乙醇。 6、溢出物：5000mg/L次氯酸钠。 7、污染的台面和器具：2000mg/L 次氯酸钠,也可以用过氧化氢或过氧乙酸。器械可用2%戊二醛浸泡消毒。 八、消毒液的配制及使用措施 1、实验室最常用的化学消毒剂是含氯消毒剂（次氯酸钠，含有效氯2000-5000mg/L）、75%乙醇和2%戊二醛，保持10～30 min。 2、含氯消毒剂的配制：次氯酸钠原液使用前进行1：20～1：50稀释（2000-5000mg/L）或联昌84使用前进行1：10～1：25（2000-5000mg/L）稀释后，用于实验室内的消毒。 3、乙醇，俗称“酒精”，能够杀灭多种细菌，对病毒有一定的杀灭作用，70～75%的效果最好。因此，使用前新鲜配置足量70～75%的乙醇，用于生物安全柜、工作台面和仪器表面的消毒，可以达到最佳的消毒效果。 4、过氧乙酸也是目前使用比较广泛的一种高效消毒剂，新鲜配置1～3%的过氧乙酸熏蒸，用于地面、墙壁、实验器材及实验室内资料、文件、书本等物品的消毒。0.04%的过氧乙酸用于实验室工作人员手浸泡1～20分钟，再用肥皂洗手。 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期

陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第20页共99页 免疫实验室操作步骤 （一）甲型肝炎病毒IgM抗体（HAV-IgM） 1． 检验目的：检测人血清或血浆中的抗HAV-IgM。 2． 检测原理：本品系用抗人-IgM（u链）包被的微孔板，配以纯甲型肝炎抗原（HAV-Ag）

和酶标记的甲型肝炎病毒抗体（抗HAV-HRP）及其它试剂，采用捕获法原理，检测人血清或血浆中的抗-HAV-IgM。 3． 试剂：上海科华生物工程股份有限公司 组分名称 HAV-IgM微孔板 HAV-IgM酶标记抗体 数量 1块 1支 规格 48T×1 3.2mL 1.0mL 2.2 mL 组分名称 底物A 底物B 封口膜 浓缩洗涤液 说明书 数量 1支 1支 3张 1支 1份 规格 4.0 mL 4.0 mL 3.5 mL 30 mL HAV-IgM阳性对照血清 1支 HAV-IgM阴性对照血清 1支 甲肝抗原 自封袋 1支 1个 1 .0mL 终止液（2MH2SO4） 1支 4． 操作： 4.1 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有结晶析出应充分溶解）浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。 4.2 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。 4.3 加样：待测样本用生理盐水作1：1000稀释，每个样本检测孔加入稀释样本100 uL。设阴阳对照各1孔，每孔加入100 uL，并设空白对照1孔。 4.4 温育：置37℃温育20分钟，室温平衡2分钟。 4.5 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。 4.6 加抗原、酶：每孔加入抗原（HAV-Ag）30 uL、酶标记抗体50uL（1滴），充分混匀。 4.7 温育：置37℃温育20分钟。 4.8 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。 4.9 显色：每孔加底物A、B各50uL，轻拍混匀，置37℃暗置15分钟。 4.10 终止：每孔加终止液50uL，混匀。 4.11 测定：用酶标仪单波长450nm/630nm测定各孔OD值（用单波长测定需设定空白对照一孔，30分钟完成测定，并记录结果）。 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第21页共99页 5. 结果判定： 5.1 临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD均值N×2.1 阴性对照OD值低于0.050←0.050计算，高于0.050按实际OD值计算。 5.2结果判定：样品OD值S/C.O.≥1者为HAV-IgM阳性 样品OD值S/C.O.＜1者为HAV-IgM阴性 5.3 失效：如果阳性对照OD均值小于0.05，则表明不正常的操作或试剂盒已变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。 6. 标本： 6.1 静脉抽取空腹患者标本3.0 mL（真空管采血），将血液放置水浴箱中30分钟后，分离血清。 6.2 溶血标本不能用于检测。 6.3 用完的标本，应在样品管上注明日期，放置在2—8℃冰箱中保存一周。 6.4 样品放置一周后，逐管加入1：50的84消毒液，并放置4小时后，装入医疗垃圾袋由医院专人按医疗垃圾处理。 7. 注意事项 7.1 本试剂盒仅用于体外诊断试验.进用于人血清或血浆样本,其它体液和样品可能得不到准确的结果. 7.2 请勿使用溶血标本.样本加样量对本实验极为重要,建议使用精密加样器准确加样.并经常对精密加样器进行校准. 7.3 每板建议设阴、阳性对照血清各两孔,设空白对照时,不加样品及酶标记抗体,其余各步相同. 7.4 洗涤时各孔均需加满,防止孔内有游离酶未能洗净. 7.5 加试剂前应将试剂瓶翻转数次,使液体混匀. 7.6 实验环境应保持一定湿度,避风.避免在过高温度下进行实验. 7.7 样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定正相关.任何一种测试都不能绝对保证样品中没有低浓度的抗体存在. 7.8 试剂各组分在正当处理和保存的情况下直至校期都保持稳定,不能使用过校期的试剂盒.不同品名、不同批号的试剂不可混用,以免产生错误结果. 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第22页共99页 (二)乙型肝炎病毒（HBV） 1、乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg） 1 .检验目的：检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsAg），其阳性者为急性乙型肝炎潜伏期或急性、慢性乙肝患者，无症状HBsAg携带者。 2. 检验原理：在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗体（HBsAb），配以酶标记抗体（HBsAb—HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsAg） 3. 试剂：英科新创（厦门）科技有限公司。 3.1 HBsAg微孔板（96人份） 3.2 HBsAg酶标记抗体 3.3 HBsAg阳性对照血清 3.4 HBsAg阴性对照血清 3.5 浓缩洗涤液 25ml 3.6 底物 A 3.7 底物 B 3.8 终止液（2M H2SO4） 3.9 封口膜 3.10 自封袋 4. 试剂的贮存： 直接使用，2~8℃贮存至失效期避免阳光直射。 5.操作： 5.1 平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18℃—25℃），微孔板开封后，余者即时以自封袋封存。 5.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。 5.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。 5.4 加样：每孔中加入稀释液20 uL，病人血清100 uL，设阴、阳性对照各1孔，每孔加入100 uL，空白对照1孔。 5.5 温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。 5.6 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干（每次应保持30—60秒的浸泡时间）。 5.7 加酶：每孔加入酶50 uL，温浴30min 洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干 5.8 显色：每孔加底物A、B各50uL，轻拍混匀，置37℃暗置15分钟。 5.9 终止：每孔加终止液50uL，混匀。 5.10 测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450nm/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第23页共99页 6. 结果判定 6.1 临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD均值N×2.1 阴性对照OD均值大于0.1或阳性对照小于0.4时应重新试验，小于0.05时以0.05计算 6.2 结果判定：样品OD值S/C.O.≥1者为HBsAg阳性 样品OD 值S/C.O.＜1者为HBsAg阴性 7.标本： 7.1静脉抽取空腹患者标本3.0mL（真空采血管），将血液放置在37℃水浴中30分钟后，分离血清。 7.2 溶血标本不能用于检测。 7.3 用完的标本，应在样品管上注明日期，放置在2—8℃冰箱中保存一周。 7.4 样品放置一周后，逐管加入1：50的84消毒液，并放置4小时后，装入医疗垃圾袋由医院专人按医疗垃圾处理。 8.注意事项 8.1 每板建议设阴、阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。 8.2 洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。 8.3 加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1—2滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。 8.4 所有样品都应按传染源处理。 8.5 样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。任何一种测试都不能绝对保证样品中没有低浓度的抗原存在。 8.6 封口膜使用说明：（1）微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条低部，以免影响其透光性。 （2）微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其它因素对实验带来的非预期的影响。 8.7 不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第24页共99页 2、乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb） 1 .检验目的：检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗体（HBsAb），其为保护性抗体，大多数急性病人恢复期后为阳性，接种乙肝疫苗后产生免疫力。 2. 检验原理：在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗原（HBsAg），配以酶标记抗体（HBsAg—HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗体（HBsAb） 3. 试剂：英科新创（厦门）科技有限公司。 3.1 HBsAb微孔板（96人份） 3.2 HBsAb酶标记抗原 3.3 HBsAb阳性对照血清 3.4 HBsAb阴性对照血清 3.5 浓缩洗涤液 25ml 3.6 底物 A 3.7 底物 B 3.8 终止液（2M H2SO4） 3.9 封口膜 3.10 自封袋 4. 试剂的贮存： 直接使用，2~8℃贮存至失效期，避免阳光直射。 5.操作： 5.1 平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18℃—25℃），微孔板开封后，余者即时以自封袋封存。 5.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。 5.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。 5.4 加样：用加样器加入待测血清50uL，设阴、阳性对照各1孔，每孔加入50 uL，空白对照1孔。 5.5 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗原50uL；轻拍混匀。 5.6 温育：置37℃温育30分钟，室温平衡5分钟。 5.7 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干（每次应保持30—60秒的浸泡时间）。 5.8 显色：每孔加底物A、B各50uL，轻拍混匀，置37℃暗置15分钟。 5.9 终止：每孔加终止液50uL，混匀。 5.10 测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450nm/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期

陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第35页共99页 6. 结果判定 .6.1临界值(CUTOFF)计算：临界值=阴性对照孔A均值NC×2.8 阴性对照OD均值大于0.08或阳性对照小于等于0.5时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。 6.2结果判定：样品OD值S/C.O. <1者为HCV阴性。 样品OD 值S/C.O.≥1者为HCV阳性。 7. 标本： 7.1静脉抽取空腹患者标本3.0mL（真空采血管），将血液放置在37℃水浴中30分钟后，分离血清。 7.2 溶血标本不能用于检测。 7.3 用完的标本，应在样品管上注明日期，放置在2—8℃冰箱中保存一周。 7.4 样品放置一周后，逐管加入1：50的84消毒液，并放置4小时后，装入医疗垃圾袋由医院专人按医疗垃圾处理。 8. 注意事项 8.1 试剂盒从冷藏环境中取出时应置室温平衡 15-30分钟后方可使用,未用完的微孔条用自封袋密封2-8℃保存,温育酶标板的时间和温度必须严格控制. 8.2 加试剂前，应先将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。加液时使用移液器加,并经常校对移液器的准确性.，避免加样时在孔中产生气泡。 8.3 洗涤时各孔均需加满洗液,防止孔口内有游离酶不能洗净.使用洗板机洗涤应设定30-60秒浸泡时间. 8.4 HCV抗体检测结果的判定必须以酶标仪读书为准,使用双波长450/630nm检测时,可不设空白对照. 8.5 所有样品和废弃物都应按传染源处理,终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全. 8.6 操作应按说明书严格进行,有效期内使用,封板膜为一次性用品不能重复使用. 8.7 操作过程中禁止酶标板及其它试剂、次氯酸类消毒剂接触。 8.8洗板机在使用结束后要使用新鲜蒸馏水或高品质去离子水冲洗干净，以防止管路阻塞和腐蚀。 8.9终止后请尽早用酶标仪进行读数测量。样本的检测读值与样本中抗体的浓度不一定呈正相关关系。 8.10不同厂商、不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第36页共99页 （四）梅毒螺旋体抗体（AntT—TP） 1. 检验目的：用于检测血清或血浆标本中的梅毒螺旋体。 2. 检测原理：本试剂为又对抗原夹心ELTSA方法，时机盒中所用色被抗原和酶标记抗原

基因工程表达的煤毒螺旋体特异性抗原，显色剂为TMB。 3. 试剂：英科新创（厦门）科技有限公司。 3.1 TP酶标板 （96人份） 3.7显色液B 1瓶 3.2 TP阳性对照 1管 3.8 终止液 1瓶 3.3阴性对照 1管 3.9自封袋 1个 3.4TP酶试剂 1管 3.10 封板膜 3张 3.5浓缩洗涤液 1瓶 3.11说明书 1份 3.6显色液A 1瓶 4. 操作： 4.1配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。 4.2编号：将酶标板条固定于板架上，设阳性对照1孔,阴性对照1孔，空白对照1孔(空白孔不加样品及每试剂,其余各步相同)。 4.3加样：分别在相应孔中加入待测样品100ul,阴、阳性对照各加入100ul震荡混匀。 4.4温育：置37℃温育60分钟。 4.5 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干。 4.6 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体100uL；轻拍混匀。 4.7 温育：置37℃温育30分钟。 4.8 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干。 4.9 显色：每孔加显色剂A、B各50uL，轻拍混匀，置37℃暗置30分钟。 4.10 终止：每孔加入终止液50uL轻轻振荡混匀 4.11测定：用酶标仪单波长450nm或双波长630nm测定各孔OD值(建议用双波长测定，用单波长测定时需用空白对照孔调零)并记录结果。 5.结果判定 .5.1临界值(CUTOFF)计算：临界值=阴性对照孔A均值NC×2.8 阴性对照OD均值大于0.08或阳性对照小于等于0.5时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。 5.2结果判定：样品OD值S/C.O. <1者为TP阴性。 样品OD 值S/C.O.≥1者为TP阳性。： 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第37页共99页 6. 标本： 6.1静脉抽取空腹患者标本3.0mL（真空采血管），将血液放置在37℃水浴中30分钟后，分离血清。 6.2 溶血标本不能用于检测。 6.3 用完的标本，应在样品管上注明日期，放置在2—8℃冰箱中保存一周。 6.4 样品放置一周后，逐管加入1：50的84消毒液，并放置4小时后，装入医疗垃圾袋由医院专人按医疗垃圾处理。 7. 注意事项 7.1 试剂盒从冷藏环境中取出时应置室温平衡 15-30分钟后方可使用,未用完的微孔条用自封袋密封2-8℃保存,温育酶标板的时间和温度必须严格控制. 7.2 加试剂前，应先将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。加液时使用移液器加,并经常校对移液器的准确性.，避免加样时在孔中产生气泡。 7.3 洗涤时各孔均需加满洗液,防止孔口内有游离酶不能洗净.使用洗板机洗涤应设定30-60秒浸泡时间. 7.4 HCV抗体检测结果的判定必须以酶标仪读书为准,使用双波长450/630nm检测时,可不设空白对照. 7.5 所有样品和废弃物都应按传染源处理,终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全. 7.6 操作应按说明书严格进行,有效期内使用,封板膜为一次性用品不能重复使用. 7.7 操作过程中禁止酶标板及其它试剂、次氯酸类消毒剂接触。 7.8洗板机在使用结束后要使用新鲜蒸馏水或高品质去离子水冲洗干净，以防止管路阻塞和腐蚀。 7.9终止后请尽早用酶标仪进行读数测量。样本的检测读值与样本中抗体的浓度不一定呈正相关关系。 7.10不同厂商、不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。 制定人 修改人 审核人 批准人 期准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第38页共99页 （五）肺炎支原体（IgM、IgG） 1.预期用途：肺炎支原体肺炎是由支原体感染引起的呼吸道和肺部的急性炎症改变。该试剂盒采用金标免疫渗滤分析原理定性测定人血清中的肺炎支原体（IgM、IgG）抗体。 2.检验原理： 2.1肺炎支原体IgM：本试剂盒应用纯化肺炎支原体特异性抗原和单克隆抗体，结合金标免疫渗滤实验原理，以间接法检测血清中的MP- IgM抗体。 2.2肺炎支原体IgG：本试剂盒依据间接法免疫测定原理，以胶体金粒子作为标记示踪物，结合金标免疫渗滤试验原理，测定血清标本中的肺炎支原体抗体。先将特异性MP抗原固相化于硝酸纤维素膜上，当血清标本根据渗滤作用通过硝酸纤维素膜时，其中的MP抗体便与膜上的固相抗原发生特异性结合形成复合物，而其他无关物质则被滤过，再加上金标记抗人IgG单克隆抗体，滤过时便与复合物结合，形成肉眼即可方便观察的红色印迹。 3.试剂：潍坊市康华生物技术有限公司。 3.1检测板 20块 3.3洗涤液 1X5.0ml 3.2金标液 1X3.5ml 3.4说明书 1份 4.储存条件及有效期： 4.1.试剂盒置2-8℃冷藏，有效期为10个月。 4.2试剂盒可短期常温运输。寒冬或炎夏季节应采用相应防护措施，避免冻融或长期高温。 5.样本要求 5.1必需使用新鲜血清或2-8℃放置3天内的血清测定。 5.2特殊情况下标本无法及时检测，应于-20℃以下保存。任何标本在临用前均须充分离心后取澄清液体部分检测。 6检验方法： 6.1肺炎支原体IgM：1）、取出试剂盒，室温平衡20-30分钟； 2）、滴加洗涤液2滴于反应孔中，待液体将膜完全湿润； 3）、加待测血清50 ul（若用样品吸管则加2滴）于反应孔中，待液体充分吸入； 4）滴加洗涤液2滴于反应孔中，待液体充分吸入； 5）滴加金标液3滴于反应孔中，待液体充分吸入； 6）滴加洗涤液3滴于反应孔中，待液体充分吸入后于3分钟内观察结果。 制定人 修改人 审核人 批准人 期准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第39页共99页 6.2肺炎支原体IgG：1）、取出试剂盒，室温平衡20-30分钟； 2）、滴加洗涤液1滴于反应孔中，待液体将膜完全湿润 3）、加待测血清150 ul（若用样品吸管则加2滴）于反应孔中，待液4）、5）滴加金标液3滴于反应孔中，待液体充分吸入； 6）滴加洗涤液3滴于反应孔中，待液体充分吸入后于3分钟内观察 体充分吸入； 结果。 7.检验结果的解释： 7.1阴性-质控点C显示红色，检测点T位置无红点出现； 7.2阳性-质控点C显示红色，检测点T位置有红点出现； 7.3无效-质控点C不显色即表明操作失误或试剂失效。 8检验方法的局限性：. 8.1本试剂盒与所有定性检测试剂一样，只用于筛选试验。 8.2感染时间短或处于窗口期的标本，由于其抗体还不存在或太低，用本试剂盒检测会出现阴性结果。 8.3个别免疫受抑制抗体或免疫亢进个体其检测结果会有差异。 8.4本试剂盒不能确定（MP-IgM、MP-IgG）抗体的确切含量。 8.5本试剂为定性检测试剂，任何检测结果均需要与临床信息联系来综合判定。 9.注意事项： 9.1必须使用新鲜血清或2-8℃放置3天内的血清测定。少数标本（高脂血、高胆红素、溶血）背景轻微偏深，一般不影响结果判定。 9.2加有抗凝剂、促凝剂的标本渗滤速度缓慢，底色太红，影响结果判读，建议不使用。 9.3加液体的各步操作之间不得有时间间隔；同一步骤中所加液体应迅速一次加入后等其渗入。 9.4超过规定时间出现的结果无效。 9.5质控点的强弱并不代表试剂质量的优劣，只要其显色清楚可见，即表明试剂有效。 9.6不同产品、同产品不同批次之间的金标液、洗涤液严禁混用。 制定人 修改人 审核人 批准人 期准日期

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