非布索坦的有关物质测定方法研究

非布索坦的有关物质测定方法研究

药品鉴定

21 2第8第期 0年月 1 4 1卷

非布索坦的有关物质测定方法研究张静，文艳 吴其华周，

( .省阜阳市药品检验所，徽阜阳 1安徽安

260;. 3 0 0 2安徽联创药物化学有限公司，徽合肥安

2 03 ) 3 0 1

【摘要】目的：讨非布索坦有关物质测定的最佳方法。方法：探采用高效液相色谱法 ( L, HyeiO— P色谱 HP C)用 sr DS B l柱，用梯度洗脱的方式进行检测。流动相 A为乙腈一 .采 01%醋酸铵溶液 (04, 6:0用冰醋酸调节 p H值至 46; .)流动相B为乙腈；测波长 3 0n流速 1 / n结果：测纯度因子均为 09 99检测限为 01n。论： L检 4 m; . ml。 0 mi检 .9, . g结 HP C测定非布索坦有关物质准确、简便、速，对产品中的有关物质进行准确监控。快可 『关键词】布索坦；非高效液相色谱法；关物质有【图分类号】 8 .中 R2 60【文献标识码] C【文章编号】 6 4 4 2 ( 0 )2(一 4— 3 1 7— 7 1 2 1 O a) 0 4 0 1

De e m i to O ea e ub t nc s0 e x sa y HPLC t r na i n fr l t d s sa e ffbu o t tbZ AN 窖 z U We yn, U Oh a H G 1, Ho n a 2W iu?(.u a gIstt rD u o t l A h i rvn e F y n 2 6 0, hn; . h i in h a gP am et a C e 1 yn ntuef rgC nr, n u oic, u ag 3 0 0 C ia 2 F i o o P An u a cu n h r c ui l hm— L cityCo An u r vn e Hee 2 0, ia sr, h i o ic, fi 3 03 Chn 1 P 1

『 s at 0 et e T s bi nHP C meh dfrtedtr nt no ea d sbtn e ffb xsa. eh i: Abt c] r ci: oet l h a L to eemiai frl e u s cso e u ottM tol v a s o h o t a sHP C me o r ea d s b tn e s te c lmn Hye i 0— P 46mmx 5 L t d f lt u s c s et h o

h o r e a t, u: s r DS B ( . l 2 0 mm, m) te mo i h s, a 5;h bl p ae A w s ea eo i ie 0 1 a c tn t l一 .% mmo n u a eae B wa c tt;te d tce v sa 4 m.Re u t:T eln a a g si r u i m c tt. sa eae h ee td wa ewa t3 0 n sl s h i e rr e wa n n te c n e t t n rn e f3 3 0 tgm1= 9 9 9 h o c nr i a g so — 0￣/ .r 0.9 .Co du in:T ea ayia to Srla l n a s d t o— a o n so h n lt lmeh d i eibe a d c n u e o c n c t l h r d c u lv o b x sa oho h a l n h eee c rd c. r ep o u tq ai f e u o ttb t ft esmp ea dt erfrn ep o u t o t t f

[ ywo d] e u ottRe tdS btn e HP C Ke r s F b x s; l e u s c; L a a a

美国食品药品监督管理局于 2 0 0 9年 2月 1 3日批准武田制药北美公司的非布索坦 (品名 U oi)于治疗痛风商 lr用 c病。非布索坦可降低尿酸水平，尿酸产生于消化及正常代谢过程。血液中的尿酸水平过高，可以在大脚趾、部、足脚踝或

品中杂质尽可能检出 .本试验选择 3 4n 1 m作为检测波长。22溶液制备 .

称取供试品约 1, 5mg精密称定， 5 量瓶中，流置 0ml加动相超声使溶解并稀释至刻度，匀，过 (.5 m)续滤摇滤 O4 ,

膝盖形成结晶。F A药品评价与研究中心新药办公室主任 D Jh n is表示， lr o nJ kn e U oi c获得批准为 (风病 )者治疗疼痛痛患提供了另外的选择。者参考有关文献合成了非布索坦，笔 其有关物质方法学研究尚少见。高效液相色谱法 ( L ) HP C是测定有关物质的常用方法。为此，者建立了高效液相色笔谱法 ( P C)定非布索坦的有关物质， H L H L测以 P C对非布索坦降解产物进行检测并进行了方法学研究。现报道如

下：1仪器与试药

液作为供试品溶液；密量取供试品溶液 1ml置 1 0m量精 , 0 l瓶中，流动相稀释至刻度，用摇匀，作为对照溶液 ( .。 1%) 023试验操作方法 .

按药典方法调试好高效液相色谱仪，流速为 1 Y n . m mi, 0检测波长为 3 4n,温为室温，样量为 2 l 1 m柱进 0。24色谱柱的选择 .

用反相高效液相色谱法测定样品，一般首选 O色谱柱。 DS 经试验筛选，现选用 Hye lO S B发 sf D— P色谱柱柱效高，离 i分效果好。故本试验采用 Hye l S B sf i OD— P色谱柱用于样品检测。 25流动相的选择 .

U 0 0紫外分光光度计 ( V1 0上海天美科学仪器有限公司 );HP C仪，:hma z 0 L泵 S i du2 A型、外检测器 S i du2 A型紫 hmaz 0 (日本岛津公司 )色谱柱为 Hye l DS B,. m 2 0m ; sf— P 46 mx 5 m, iO 5 I大连依利特分析仪器公司 )A 3一 m( x; B1 5 S型分析天平 (梅特勒一托利多仪器有限公司 )雷磁 P S 2; H一 5酸度计 (海精上密科学仪器有限公司 )非布索坦原料 (品批号：0 9 9 1。产 20 00、 2 0 0 0、0 9 9 3:徽联创药物化学有限公司。乙腈为 0 9 9 2 2 0 0 0 )安色谱纯，醋酸钠、酸为分析纯。醋2方法与结果 21检测波长的选择 .

本试验首先考察了甲醇及甲醇一系统，验发现用常水试规系统不能对样品进行很好分离，试验采用梯度洗脱的方本式进行检测。流动相 A为乙腈一 .%醋酸铵溶液 ( 04用冰 01 6: 0,醋酸调节 p H值至 4 )流动相 B为乙腈； .; 6流速为每分钟 1 ; .ml 0 检测波长为 3 4n按表 1进行梯度洗脱。论板数按非布 1 m。理索坦峰计算不低于 2 0主成分峰与相邻杂质峰的分离度 5 0,

应符合要求。26方法专属性的研究 .

取非布索坦适量与非布索坦合成过程中 5个关键中间体，甲醇和磷酸盐缓冲液 (H 66作溶剂，成一定浓度用 p .)制的样品溶液， 2 0 4 0n波长范围内扫描，品分别在在 0

~ 0 m样 2 6n和 3 4n波长处有最大吸收。非布索坦合成过程中 1 m 1 m 5个关键中间体均在 3 4n波长处有最大吸收，了使样 1 m为4中国当代医药 CHIA M0D N ME CIE 4 N lER DI N

261样品与各中间体混合溶液高效液相色谱图： ..取样品及各中间体适量，流动相 A制成每 1升中约含各组分分别加毫为 2 g的溶液，上述方法， 2 l 0按取 0注入液相色谱仪，记录色谱图见图 1与各中间体均能有效分离。,

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21 0 1年 2月第 1 8卷第 4期

药品鉴定264碱降解试验：取非布索坦约 1, 5 量瓶中， ..称 5mg置 0ml

表 1流动相梯度洗脱 ( ) %

加入 1m] o L氢氧化钠溶液 1 l摇匀， (0 2￣水浴中放] 5m,置 9+ ) C置 1h取出， 1mo/,用 l L盐酸溶液调节 p值为 68后，流 H .用

动相 A稀释至刻度，过，续滤液 2 1入液相色谱仪，滤取 O注记录色谱图见图 4。样品几乎完全分解，主要降解杂质峰保

留时间分别为 32、 .3 46、 02 n此流动相对碱降解 . 42、 . 1 .8mi。 3 5产物有较好分离效果。

图 4碱破坏色谱图

262高温降解试验：样品适量， 2 0 ..取置 0%烘箱中，置 1 ,放 0h

265强氧化降解试验：取非布索坦约 1, 5 量 ..称 5mg置 0m1瓶中，加入 3%过氧化氢溶液 1,摇后放置 4取出， 0 0ml振 8h,女

称取适量，流动相 A制成约 03mgm溶液， 2 1入用 ./l 取 0注液相色谱仪，录色谱图见图 2记。样品在高温破坏下有轻微分解，解物出峰时间为 2 . mi此流动相体系对高温降降 45 n, 解产物能取得较佳的分离效果。

用流动相 A稀释至刻度，过，续滤液 2 注入液相色滤取 0

谱仪，录色谱图见图 5样品有轻微分解 (记。降解率小于 01, . %)降解杂质峰均能有效分离。●

图 5氧化破坏色谱图

263酸降解试验：取非布索坦约 1, 5 量瓶中， ..称 5mg置 0ml 加入 1mo L盐酸溶液 1 l振摇后置

( 0 2℃水浴中放置 l/ 5m, 9￣ ) 3h,出， 1mo]氢氧化钠溶液调节 p值为 68后， 取用 1 L H .用流动相 A稀释至刻度，声使其溶解，过，超滤取续滤液 2 l 0 注入液相色谱仪，录色谱图见图 3记。样品有轻微分解 (解分率为 02,明样品对酸溶液稳定； .%)表降解杂质峰保留时间

266强光照射试验： ..取非布索坦适量 .置光照强度为 50 0 0~

6 00L 0 x的日光灯下放置 5 d取样，流动相 A制成约 ,用03mg溶液， 2 l . / ml取 0注入高效液相色谱仪，录色谱图记

见图 6由色谱图可知，。样品有轻微‘解(分 1降解率小于 02。 . %)

为45、 3 4 mi。此流动相对酸降解产物有较好的分离效 . 2. n 4 4果

27最低检测限试验 .

取非布索坦约 1,密称定，流动相 A超声使溶 5mg精加解并稀释至 5 ( . mgm1,匀，密移取 1 ,流 0ml03/ )摇 精 . ml用 0CHI NA MODE N MEDI NE中国当代医药 4 R CI 5

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药品鉴定动相 A稀释至 1 0ml3 p/ )再移取此液分别配制浓度 0 (￣ m1, g

21 2第8第期 0年月 1 4 1卷量 ( 1 )精密称定， 5 I量瓶中，流动相 A超声约 5mg,置 0Il l用使溶解并稀释至刻度，为供试品溶液；密量取供试品溶作精液 1ml置 10 ml瓶中，流动相 A稀释至刻度， , 0量用摇匀，作

为 5 05 00、 . 5n, l不同浓度溶液，上述方法，、.、.5 00 gr等 0 n照依法测定。结果表明本品最低检测限为 01 gO 0 g x 0 ) .n (. 5n ml2 1。 O28线性及精密度 (内差 )验 .日试

为对照 ( .%) 1 O溶液。高效液相色谱法 (国药典 2 0照中 0 5年版二部附录 V D)取对照溶液 2 l入液相色谱仪，节检 , 0注调测灵敏度 .主成分色谱峰的峰高约为满量程的 2%。再分使 0别取供试品溶液与对照溶液各 2 l注入液相色谱仪。试 0,供品溶液的色谱图中如显杂质峰，杂质峰面积的和，得大

各不

精密称取非布索坦适量，流动相 A超声使溶解并稀释加制成 30 0 r的溶液，密移取此液适量分别稀释至 7% n l精 5

( 2 gm )5%(5咖 1、5 7 e ) 1 (0咖 1 2 5 f/ J、0 1 0, )2%(5￣C、0 3 m]% )1 3I/ )%( . m]四梯度溶液，用。取上述 5种溶液各 2 l z g备 0, 分别注入液相色谱仪，记录色谱图；隔 2 h重复进样并每 1次， 5次，共考察日内差的大小。从试验结果可知，色谱本仪精密度试验良好，试溶液稳定，供日内差 R D(均不大 S%)于 20,浓度为 3 3 0 I/范围内进样 2 l线性良 .%在~ 0 t ml, g 0,好， r为 09 99 n 6。 .9 (= )2重复性试验 . 9

于对照溶液主峰面积的 05倍 ( .% )单个杂质峰面积不 . 05;得大于对照溶液主成分峰面积的 O1倍 ( .%) . 01。3批供试品的有关物质含量结果表明，品 3批有关物质含量均小于本10。 .%

3讨论

分别精密称取非布索坦适量。流动相超声使溶解并稀加释至 1 0 3 g的溶液，上述方法， 2 l注入高效 5、0/ ml照取 0,

该实验对非布索坦有关物质检查的试验条件进行了考察，定了文中色谱条件和检查方法。验证明，用方法专确试所属性强、灵敏度高、密度好、精简便快速，有效地检查出常能规样品与酸、、碱高温、高湿及强光处理后的相关微量杂质。

液相色谱仪，连续进样 6针，记录色谱图，取峰面积，并量由试验结果可知，品溶液测定结果 R D(小于 1%,仪样 S%) .本 0

【文献】参考【】王字，薇 .疗痛风和高尿酸血症新药——非布索￣ J.国药房， 1贾治 -[中 1 2 0, (2: 7— 4 0 0 92 2 ) 4 8 1 8 . 0 1[】唐春雷，德才，妹， .型抗痛风药物非布索坦『1国新药杂志， 2王陈等新 J.中 2 0,87:7— 6 . 09 1() 7 5 0 5[】孙运强，玉玲，辛波， .布索坦合成路线图解[.国医药工业 3王周等非 J中】杂志， 0, (2:5— 5 . 2 9

4 1) 4 9 6 0 0 9【】郑凡，珊，莉， .布索坦的合成[ .国医药工业杂志，0 9 0 4钱杨等非 J中] 20, 4

器测定结果准确可靠。21 .0溶液稳定性试验

精密称取非布索坦适量 .流动相超声使溶解并稀释制加成 10￣/ l溶液，样，记录色谱图，取峰面积。隔 5 gm的进并量每

2 4 h重复进样 1次， 3次。溶液稳定性结果可知， S%)共 R D(小于 20 .液在 4 .%溶 8h内稳定。

21 .1非布索坦纯度f关物质)算方法的选择有计纯度计算方法一般有外标法和归一化法等，标法要求外配制对照品溶液，加试验步骤，归一化法又不能准确地增而反映有关物质含量。照现行版中国药典二部大多数原料有参关物质检查方法 .品采用自身稀释对照法。取非布索坦适本

(o:2 - 2 . 1) 6 7 8 7 [】白玉红，慧， 5韩于海威，盐酸氮卓斯汀片有关物质测定方法的研究『.等. J 1中国当代医药， 0,61) - 6 2 91(2:1 1 . 0 15 1 [】刘利军 .相高效液相色谱法测定普卢利沙星中的有关物质[.南 6反 J中】药学， 1,() 2— 2 . 2 086: 3 4 5 0 4(稿日期：0 0 0~ 2收 2 1— 9 0 )

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读往来 编

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4中国当代医药 CHI A MODER DI NE 6 N N ME CI

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