药学分子生物学实验指导书

基因工程综合实验

武汉科技大学医学院生化教研室

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目 录

分子生物学实验综合规程································································································3 参考书目 ··························································································································3 实验内容····························································································································4 实验一 实验基础知识和基本技能培训··········································································5 实验二 大肠杆菌感受态细胞的制备··············································································7 实验三 质粒DNA的转化·······························································································8 实验四 碱裂解法提取质粒DNA····················································································9 实验五PCR基因扩增·····································································································11 实验六DNA的限制性核酸内切酶消化········································································13 实验七琼脂糖凝胶电泳检测DNA·················································································15

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分子生物学实验综合规程

? 上课时间提前5分钟进入实验室；不迟到、不早退，无故旷课累计3次没成绩； ? 请假须医院病假条或班主任签字的假条；

? 上课时需穿实验服，不许在实验室内吃东西，不背着书包做实验，不穿拖鞋进实验室； ? 实验课期间不许打闹、闲聊等，不大声喧哗，保持课堂纪律，实验过程中，至始至终需全组同学一起完成，任何人中途不得缺席。

? 必须做到课前认真预习，课间做好实验记录、课后详细总结实验结果并按时提交实验报告；

? 公用试剂不得污染！每次都必须用新枪头。公用台上公用试剂不得私自拿到自己实验台上；

? 不得私自拿走或乱放别人的实验物品、实验产品； ? 不得擅自使用实验室中非本实验仪器、试剂。 ? 实验废液不随便倾倒，随时保持实验台的整洁； ? 爱护实验器材，实验器材损坏必须按规定赔偿； ? 实验前按仪器性能与要求，进行仪器预热；

? 实验完成后检查电源插座，用完仪器后必须复位，仪器清洁干净 、摆放整齐；每组实验物品齐全，需教师验收，枪量程要归位，发现问题及时报修；

? 每位同学负责自己实验台面和柜体的卫生，值日生负责公用实验台、地面等处卫生； ? 每次轮到打扫卫生的小组，要认真做好值日工作，离开实验室须向教师声明； ? 同学与老师之间、同学与同学之间、实验班与实验班之间一定要互相协作配合保持公用房间卫生，注意门窗水电的安全。 ? 遵守通用的实验室规则。

违反上述任何一条规则责任自负，并要扣分，造成损失要照价赔偿。

参考书目：分子生物学实验指导，魏群 主编，高教出版社

分子生物学实验指导，刘进元 主编，清华大学出版社

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实 验 内 容

实验一 分子生物学实验的基本知识和基本技能培训 实验二 大肠杆菌感受态细胞的制备 实验三 质粒DNA的转化 实验四 碱裂解法提取质粒DNA 实验五PCR基因扩增

实验六DNA的限制性核酸内切酶消化 实验七 琼脂糖凝胶电泳检测DNA

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实验一 实验基础知识和基本技能培训

实验目的 学习和掌握分子生物学实验的基本技术和技能，了解分子生物学实验中常用的仪器设备，

熟悉常用玻璃器皿、耗材。

实验原理 通过多媒体、胶片、板书、实物演示等各种教学方式，让学生初步学习和掌握分子生物学

实验的基本知识和基本技能，了解分子生物学实验常用仪器设备，熟悉常用玻璃器皿、耗材。

1. 分子生物学实验综合规程（见前页） 2. 分子生物学实验设备

1) 温度控制系统：冰箱：4 ℃、-20℃、-70 ℃--样品、试剂和材料等的保存 2) 恒温培养箱：细菌平板的培养 3) 恒温空气摇床；菌体的培养

4) 灭菌器: 培养基、试剂、耗材等的灭菌 5) PCR仪：PCR 扩增、保温实验等

6) 恒温水浴及微量加热器：保证实验温度的恒定 7) 电泳仪：电泳时提供电压和电流

8) 电泳槽：核酸或蛋白质的电泳定性分析时的凝胶支架 9) 凝胶成像系统：电泳结果的定性和定量分析 10) 紫外分析仪：电泳结果的定性分析 11) 台式高速冷冻离心机：样品的分离 12) 分光光度计：样品的定量测定 13) 超净工作台：提供洁净工作环境 14) 电子天平：样品、试剂等的称量 15) pH 计：精确的pH值测定 16) 移液器；液体试剂的精确取量 17) 制冰机：保证操作过程中温度的恒定 3. 分子生物学基本技术 3.1实验规范训练－仪器的操作 要求：

a) 仪器在未经培训前，不得擅自使用 b) 严格按操作规程使用仪器，

c) 有些仪器必须有教师在场时才能使用，并由教师操作 d) 违反规定的使用者，造成的后果由使用者承担 3.2实验规范训练－量程的选择

1) 2) 3)

天平

烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶－－不同规格 量程的选择－移液器

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3.3实验规范训练－标签

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