免疫

更新时间：2023-12-21 23:56:01 阅读量：教育文库文档下载

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颗粒性抗原及其抗体的制备以及相

应的凝集反应试验

一．制备颗粒性抗原

【原理】

抗原是（Ag）是指能与T细胞、B淋巴细胞的TCR或BCR结合，促使其增值、分化，产生抗体或致敏淋巴细胞，并与之结合，进而发挥免疫效应的物质。抗原诱导机体产生抗体，并能与抗体发生反应。抗原是多种多样的，就抗原性而言，有完全抗原和不完全抗原。不同抗原，其免疫原性的强弱不相同，这取决于抗原的相对分子量、化学活性基团、和空间立体结构等。这就将抗原分为颗粒性抗原、可溶性抗原。颗粒性抗原主要是指人、动物、微生物或者寄生虫的细胞。可溶性抗原主要包括蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、脂多糖、细菌外毒素和核酸，它们有相当部分来源于组织和细胞，成分复杂。制备这类免疫原时，首先将组织和细胞破碎，然后再从组织和细胞匀浆中提取目的蛋白或其他抗原，提纯的抗原需鉴定后才能做免疫原。

【制备方案】

10%鸡红细胞制备：

（1）采健康鸡的翼根经脉血10ml注入离心管中（加抗凝剂）；（2）将离心管用2000r/min，离心5min，弃上清；

（3）下层的红细胞加等量的PBS缓冲液（或无菌生理盐水）

洗细胞2～3次（每次2000r/min,5min）；

（4）取积压红细胞，用无菌生理盐水稀释至10%～20%，即

可用于兔免疫注射；

（5）剩余的红细胞用阿氏细胞保存液以1:1保存在4～8℃

冰箱中，可保存2周。

【结果预测】

制备出10%的红细胞悬液。

【材料】

鸡、针管（带针头）、酒精棉球、抗凝剂、离心管、PBS缓冲液（或无菌生理盐水）、尖吸管、阿氏细胞保存液

【注意事项】

（1）在取血时，注射器要用抗凝剂润湿，避免血液凝固；（2）在操作过程中尽量避免无处不在的微生物污染，使血清中混有

抗微生物的抗体；

二．免疫血清的制备

【原理】

具有免疫原性的抗原可刺激机体相应B细胞增值、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。由于抗原分子表面的不同抗原决定簇为不同特异性的B细胞克隆所识别，因此由某一抗原刺激机体后产生的抗体，实际上是针对该抗原分子表面不同抗原决定簇的抗体混合物（即多克隆抗体）（将小鼠骨髓瘤细胞和经绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞在体外进

行融合，形成杂交瘤细胞，这种细胞及具有骨髓瘤细胞无限繁殖的特性，又具有抗体形成细胞核分泌抗体的能力。它们是由识别一种抗原决定簇的细胞克隆所产生的均一性抗体，故称之为单克隆抗体。与多抗隆抗体相比，单克隆抗体的纯度高、理化性状高度均一、与抗原的结合的特异性强）。

另外，抗体的产生具有记忆应答的特点，这是由于记忆性B细胞和记忆性T细胞参与再次应答所致。在基础免疫的基础上，多次重复注射免疫原，不仅可获得高效价抗体，同时由于抗体亲和力的成熟，抗体的亲和力可明显提高。

此外，在免疫过程中常会用到佐剂（预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的非特异性免疫增强性物质，称为佐剂），颗粒型抗原的免疫性较强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。可溶性抗原的免疫性弱，一般要加佐剂。佐剂可分为弗氏佐剂、TiterMax佐剂、Ribi佐剂、Gerbu佐剂、Imject铝盐佐剂。常用的佐剂为弗式完全佐剂和弗氏不完全佐剂。

【免疫方案】

注射器给兔子背部皮下注射1ml鸡红细胞；第二次免疫，两天后，在背部皮肤注射1.5ml红细胞；第三次免疫，四天后，在耳缘静脉注射2ml红细胞。

（2）采血：一周后采血，主要有心脏采血、耳缘静脉采血

I 心脏采血

（1）兔抗颗粒性抗原免疫血清的制备：第一次免疫，用2ml

①家兔仰面，四肢缚于动物固定架上； ②剪去左胸部兔毛，消毒皮肤；

③用左拇指摸到胸骨剑突处，食指及中指放在右胸处轻轻向左推心脏，并使心脏固定于左胸侧位置。然后，以以拇指触摸心脏搏动最强的部位；

④用20ml注射器，对准心波最强处刺入心脏抽血； II 耳缘静脉采血

拔去注射部位的被毛，用手指弹动或轻柔兔耳，使静脉充盈，左手食指和中指夹住静脉的近端，拇指绷紧静脉的远端，无名指及小指垫在下面，右手持注射器连6号针头尽量从静脉的远端刺入，移动拇指于针头上以固定针头，放开食指和中指，抽取血液，然后拔出针头，用手压迫针眼片刻。

（3）分离血清：将抽取的血液放入离心管中，将血液置于37℃的温

箱1h,再置4℃冰箱内3h，待血液凝固血块收缩后，用毛细滴管吸取血清，既得抗血清。

【结果预测】