条件恐怖动物模型的制备

条件恐惧动物模型的制备

摘要 本实验利用巴甫洛夫经典条件反射来建立环境相关条件恐惧大鼠模型。方法是把大鼠放入条件恐惧箱中，给予大鼠一个环境信号（条件刺激，白噪音），随后给予电击（非条件）刺激。记录大鼠僵立次数、僵立时间、僵立时间占总时间的百分比。实验结果表明在测试阶段，大鼠的行为得分明显高于制备阶段，条件恐惧模型鼠制备成功。 关键词 条件恐惧模型 应激 僵立 1前言

应激(Stress)是机体对生存环境中多种不利因素适应过程中, 实际上或认知上的要求与应付能力之间不平衡导致的心身紧张状态及其反应。恐惧是一种较为常见的的心理反应，它主要是指个体（人或动物）在面临并企图摆脱某种危险情境而又觉得无力摆脱时产生的一种情绪体验。在多种情况下都会使个体产生恐惧反应，如恐怖症（Phobia）、创伤后应激障碍（posttraumatic stress disorder，PTSD）。其中恐怖症是一种一恐惧症状为主要临床表现的神经症，并且这种恐惧反应极其强烈。

研究恐惧、焦虑等基本的情绪问题需要通过精神应激或心理应激的方法制作相应的、特定的动物模型。多项研究表明恐惧应激可以直接引起实验动物的一系列的防御性行为反应，包括僵立反应、心率增快、惊跳反应、逃避反应等应激反应从而引起神经系统、心血管系统、免疫系统、内分泌系统等微环境的变化。关于恐惧心理应激动物模型的研究，目前主要集中于条件性恐惧和旁观电击恐惧模型、、捕食应激恐惧模型等。

条件恐惧模型其制造模型程序通常应用典型巴甫洛夫条件反射，在一种明确的中性刺激(一般是光照或声音)与一种恶性刺激(通常是电击足底)之间建立联系，这种联系建立与否 可以用僵立行为实验进行检测。训练后将动物重新暴露于训练过的环境或条件线索下，动物表现出对该整体训练环境（环境恐惧）和具体条件线索（线索恐惧）的条件性恐惧反应。本实验是利用噪音和足底电击，并重复几次来进行实验。

条件恐惧应激模型实验鼠通常在噪音发出后出现僵立姿势(freezing posture):静止、蜷缩、呆滞、蹲伏、修饰等, 期间仅有呼吸和轻微摇摆运动，并伴有立毛、肌肉轻微振颤、大小便失禁等表现。其总时间称为僵立时间 (freezing time) , 即恐惧模型实验鼠行为得分。

条件恐惧动物可以在训练结束后立刻或几天后进行可以提供在条件信号影响下短期和长期记忆的信息。 2方法

2.1实验原理

利用巴甫洛夫经典条件反射建立环境相关条件恐惧大鼠模型；实验过程中，实验对象被给与一个环境信号（条件刺激，如声音信号），随后给予电击（非条件）刺激。该训练称为条件性训练，训练结束后对实验动物进行声音信号或环境联系性实验；一般情况下啮齿类动物对相应的环境或不同环境下同样的声音信号都会做出明显的条件性恐惧反应；啮齿类动物在恐惧时会表现出特有的不动状态(Freezing，僵立),动物在这种情况下倾向于保持静止不动的防御姿势。

2.2实验材料与仪器

实验动物：一只SD大鼠 70%酒精、毛巾

仪器：条件恐惧系统 2.3实验程序 实验步骤：

1、抚摸大鼠，适应环境

2、模型制备：将大鼠放入条件恐惧箱内,适应60s后再给予声音信号（白噪音,80dB）20S，在最后5s给与不可逃避的足底电击（1mA），声音与电击同时结束，反复10次，每两次声音间隔为10s-240s。

3、将大鼠放回笼内，酒精清洁箱底。

4、恐惧记忆测试：将大鼠放入电击箱中，适应60s自由探索。然后，只予以声音刺激而无电击,其他条件同模型制作时，观察3min内大鼠僵立时间比和次数。 5、实验完成后将大鼠放回笼内，酒精清洁箱底。 3结果

表1 制备和测试大鼠的僵立次数、时间、百分比以及总平均速度

制备 测试

实验总时间 僵立次数 僵立总时间 僵立时间百分比 总平均速度

1070 240

29 8

587.7 229.5

54.93% 95.63%

2.7 0.03

从表中可以看出制备阶段的实验时间比测试阶段时间长；在制备阶段，大鼠僵立次数明显多于在测试的时候；僵立时间也比测试阶段多；总平均速度也比测试阶段快；但僵立时间占总时间的百分比则明显低于测试阶段。

图1 大鼠在制备和测试时的活动轨迹

从图中可以看出大鼠在制备阶段，活动轨迹频繁，且更多的是贴壁活动；而在测试阶段大鼠活动几乎没有，长时间成僵立状态。

4讨论

根据表1中的数据，本次实验大鼠测试阶段的僵立时间百分比与制备阶段有着显著差异，表明大鼠长时间处于僵立状态；在实验期间，大鼠会出现活动缓慢、减少、贴壁、蹲伏等僵立姿势，并且只有呼吸和理毛以及轻微的摇摆活动；期间伴有肌肉轻微震颤、大小便增 多等表现。

根据图1中大鼠的活动轨迹，可以看出大鼠在测试阶段活动显著减少，表明大鼠长时间处于僵立状态。通过比较发现，在测试阶段，大鼠的行为得分明显高于制备阶段，表明条件恐惧模型鼠制备成功。

诸多研究表明多种应激可以使动物产生行为和情绪障碍。恐惧应激模型是根据经典条件反射制造的一种模拟恐惧情感的动物模型。恐惧条件反射是指在一种明确的中性刺激(一般是光照或声音)与一种恶性刺激(通常是电击足底)之间建立联系，这种联系建立与否可以通过僵立行为实验进行检测。

本实验通过对大鼠条件恐惧实验的研究发现在恐惧应激后恐惧大鼠木僵反应显著增加，而活动次数与对照组相比均显著减少。这说明通过反复的将条件刺激（声音）与非条件刺激（足底电击）之间建立联系，条件性恐惧反射已经形成，实验组大鼠表现出强烈的恐惧反应。但也有研究结果表明当大鼠旁观其他大鼠遭受电击之后，其自发活动能力会增强。这一结果的差异可能与应激的形式有关。

由于条件限制，本次实验的大鼠只有一只，无法更细致的观察大鼠僵立状态下的情况。 5结论

在测试阶段，大鼠的行为得分明显高于制备阶段，条件恐惧模型鼠制备成功。 参考文献

1. 钱令嘉. 关于应激与军事应激医学研究的思考[ J] . 解放军预防医学杂志, 2001, 19: 235-238.

2. Kubzansky LD, Koenen KC. Is post-traumatic stress disorder related to development of heart disease? Future Cardiol 2007,3:153–156.

3. Jarvinen K L．Emotional helplessness-a risk factor for hypertension and tachycardia after PTSD[J]. Paychosom Med,2000,50(2)：409-413．

4. Follick MJ, Gorkin L, Capone RJ, et al. Psychological distress as a predictor of ventricular arrhythmias in a post-myocardial infarction population. Am Heart J. 1988;116:32-36. 5. Solter V, Thaller V, Karlovic′ D, Crnkovic′ D. Elevated serum lipids in veterans with combat-related chronic posttraumatic stress disorder. Croat Med J 2002; 43:685–699.

6. Blanchard EB, Kolb LC, Prins A. Psychophysiological responses in the diagnosis of posttraumatic stress disorder in Vietnam veterans. J Nerv Ment Dis. 1991;179:99-103. 7. McEw BS. Mood disorders and allostatic load. Biol Psychiatry 2003; 54:200–207.

8. Dong M, Giles WH, Felitti VG, et al. Insights into causal pathways for ischemic heart disease: adverse childhood experiences study. Circulation 2004; 110:1761–1766.

9. Rozanski A, Blumenthal JA, Davidson KW, Saab P, Kubzansky LD. The epidemiology, pathophysiology, and management of psychosocial risk factors in cardiac practice: the emerging eld of behavioral cardiology. J Am Coll Cardiol 2005;45:637–651.

10. Leibing E，Schunemann I，Hermann C，et al．Psychiatric disorder or coronary heart disease in PTSD patients [J]．Paychother Psychosom Med．2001，50(1) :30-536.

11. Lad~ig KH，Hobing E，Busch R．Psychlogical comorbidity in patients with alarm chest pain symptoms [J]．Psycbother Psychosom Med，2001．51(2)：46—54.

12. Rosch PJ Stress and memory loss：some speculations and solutions [J]Stress Med．1997，13：1-6.

13. Davis,M．Are different Parts of the extended amygdala involved in fear versus anxiety?[J]．Biol Psychiatry，1998，44：1239-1247.

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/1y3h.html