石蜡切片标本的制作过程

第25卷第11期　　　　　　　　　　通化师范学院学报　　　　　　　　

2004年11月　　　　JOURNALOFTONGHUATEACHERS’COLLEGE　　　VOl.25.NO11Nov.2004

石蜡切片标本的制作过程

刘桂芝

(通化铁路分局通化第二中学　吉林通化　134002)

摘　要:阐述生物实验的作用的基础上,描述了石蜡切片标本的制作过程。

关键词:课程改革;生物实验;标本

中图分类号:G633.91　文献标识码:A　文章编号:1008-7974(2004)11-0090-02Ξ迎接世界课程改革的浪潮,,。基础教育课程改革的核心是以提高国民素质为宗旨,。

在生物学教学中,充分体现。,所以尽快熟悉有关这方,,借助于标本的直观作用,可以很好地帮助学生了解生物机体的形态和结构,并增强记忆,提高教学效果。

石蜡切片标本是通过显微制片技术制作的标本之一。石蜡切片法是显微切片技术的主要方法。它有许多优点:(1)比较节省时间,容易操作。(2)可以切成薄的片子(2um),而且能连续切片。(3)容易附贴于玻片上。(4)标本经石蜡包埋后,可永久保存。基于上述优点,就有必要具体介绍一下石蜡切片标本的制作过程。

石蜡切片标本的制作过程可分为两个阶段。第一阶段包括取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋六步;第二阶段包括切片、贴片、脱蜡、复水、番红染色、分色、固绿染色、分色、脱水、透明、封片十一步。具体操作步骤如下:

第一阶段:

1.取材。根据制作不同标本的需要,在不同季节,带上配制好的固定液到野外取材。取材时应考虑到如下几点:①组织体较为柔软。②材料要新鲜。③季节性。④确定好取材的大小。

2.固定。将刚取的新鲜材料用固定剂迅速杀死,尽量使其保持原有的生活状态。固定剂有两种,简单固定剂(如福尔马林、乙醇、醋酸等)和复合固定剂(用得较多)。常用的有以下几种。(1)复合固定剂FAA。其配方是50%—70%的乙醇90ml,冰醋酸5ml,福尔马林30ml。FAA固定植物体材料比较好。(2)卡诺固定液。其配方是无水乙醇60ml、冰醋酸10ml、氯仿30ml。它固定植物、昆虫卵、蛔虫卵效果比较好。(3)AF固定液。其配方是乙醇和福尔马林混合液。AF固定花粉粒等植物组织效果比较好。

3.脱水。脱水的目的是用脱水剂将材料中的水分脱掉,为以后实验打下基础。常用的脱水剂是乙醇。需要用一定浓度梯度的乙醇对材料进行脱水,这样可以保护材料。开始时用多大浓度的乙醇要根据材料本身的含水量而定。(如材料含水量是70%,那开始可启用75%的乙醇进行脱水)。如果开始我们启用的是75%的乙醇,那以后可再依次用80%、85%、90%、95%、无水乙醇进行脱水。时间共计2h左右。

4.透明。透明的目的是让组织中的脱水剂被透明剂所代替,使石蜡顺利地渗入组织中,增强组织的折光系数。常用的透明剂是二甲苯。使用透明剂也要有浓度梯度。开始可将材料放于二甲苯与无水乙醇比例为1:1的透明剂中,然后再放于二甲苯中。时间共计是2h左右。

5.浸蜡。将透明后的材料放入溶解状态的普通石蜡中,让材料里含有石蜡,以便包埋时与包埋蜡融成为一体。

Ξ收稿日期:2004-05-10),通化铁路分局通化市第二中学,中教一级。作者介绍:刘桂芝,女,(1965年—

90

6.包埋。(1)配制包埋蜡。普通石蜡9份,蜂蜡1份混合而成。前者脆硬易碎,后者柔韧有弹性,二者混合便于切片。(2)制作蜡块。首先制作个蜡槽,将溶解状态的包埋蜡倒入蜡槽中,然后把浸蜡后材料取出迅速放入蜡槽底部(注意材料大小与方向),最后将蜡槽置于冷水中制成蜡块。

该过程的作用是使材料与包埋蜡溶为一体,形成蜡块,便于切片。

第二阶段:

1.切片。用切片机(也可徒手切)将包埋好的材料切成薄片,其厚度为210um(如果使用切片机均匀切成的蜡片粘连在一起可形成一条蜡带)。

2.贴片。用贴片剂将蜡片固定于清洁的载玻片上(切好的蜡带最好立即进行贴片)。贴片剂配方是:鸡蛋清搅成沫用沙布过滤,取滤液与甘油配比成1:1的混合液,称其为蛋白—甘油(也叫贴片剂)。具体贴片操作步骤是:

(1)在洁净的载玻片上涂一层贴片剂,用手指抹平。

(2)在上面滴一滴清水。

(3)蜡片置于清水滴中。

(4)将整个装置放于水浴锅中展片。

(5)烘干。

3.脱蜡

。。

4.复水。。可以选用不同浓度梯度的乙醇进行复水。如无水乙醇→70→5.0.5的番红溶液(溶剂可以是水,也可以是乙醇),将材料中取材之前死的部分(如木质部)染成红色。时间是2h。

6.分色。分色是将材料中不该染成红色的部分的番红去掉(如材料中取材之前活的部分,像韧皮部、薄壁细胞等与番红结合得不紧密,这些部分即可用70%的乙醇将番红溶解掉)。用70%的乙醇分色,2min左右即可(该步骤应特别注意时间不宜太长,因为时间太长,与番红结合紧密的部分材料也会去掉红色)。

7.固绿染色。将材料取材之前活的组织部分染成绿色。用0.5%的固绿剂,时间是2min。8.分色。分色是将材料中不该染成绿色的部分除去。用70%的乙醇分色,时间是2min。该过程结束之后,材料红绿分明,不仅看着赏心悦目,而且很容易观察与分辨各个组织部分。非常美观实用。

9.脱水。该步骤的目的是将材料中的水分脱掉,以便于透明。脱水剂是具有一定浓度梯度的乙醇。可依次用75%、80%、85%、90%、95%、无水乙醇。时间是10min(注意脱水时间不宜太长,因为番红、固绿都可以和乙醇发生反应)。

10.透明。用二甲苯将材料中的的乙醇脱掉。可以进行两次透明,共计可用10min。

11.封片。封片使用中性树胶。其操作步骤是:将材料置于洁净的载玻片上,用中性树胶滴于载玻片的材料之上,然后盖上盖玻片。

石蜡切片标本制作完毕要贴上标签。要求在标签上注明:

(1)切片名称。

(2)制作者单位、姓名。

(3)制作日期。

标本制作完毕后放于标本盒中进行干燥处理。

综上所叙,石蜡切片标本的制作并不难,就是过程繁琐了一点。只要大家能够严格按照规定程序操作,人人都可以制作出观察效果很好的石蜡切片标本。

学生在采集和制作标本时,既可以开拓眼界,活跃思维,激发学习兴趣,培养敏锐的观察能力,实践能力,创新能力;又能够培养一种严谨、认真的科学态度;并且从中去发现美,去接收美的熏陶,在教育实践的过程中,激发学生对科学与艺术的热爱和追求。

参考文献:

1.郑国昌.1978.生物显微技术.[M].人教社.(书)

2.新世纪新课程新理念.教改纵模.[J].2003(3)

3.历天德.谈生物标本制作的科学性与艺术性.生物学教学.[J].2003.28(9)39

91

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/1xvi.html