微生物工程实验报告
更新时间:2023-10-11 18:11:01 阅读量: 综合文库 文档下载
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实验1 培养基的配制和灭菌
一、目的要求
1.了解培养基的配制原理和方法,掌握其配制过程。
2.了解几种灭菌方法,掌握高压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。 3.熟悉菌种分离筛选的前期准备工作及操作方法。 4.每2人一组,每人一份实验报告。 二、实验材料
1.药品:酵母粉、蛋白胨、氯化钠、琼脂、葡萄糖、KNO3、MgSO4?7H2O、FeSO4?7H2O、1N HCl、1N NaOH
2.设备:高压蒸汽灭菌锅、紫外线灭菌灯、75%酒精棉。
3.材料:天平、药匙、电炉、pH 试纸、烧杯、量筒、5mL、10mL 注射器、玻璃棒、试管、培养基、吸管、移液器(1mL 0.2mL)、牛皮纸、线绳、标签等。 三、实验内容 (一) 培养基的配制 1.培养基的配制方法和步骤
1)称量:按照配方正确称取所需药品放于烧杯中。 2)溶化:在烧杯中加入所需水量,玻棒搅匀,加热溶解。 3)调pH 值:用1N NaOH 或1N HCl 调pH,用pH 试纸对照。 4)加琼脂溶化:加热过程要不断搅拌,可适当补水。 5)分装:注意不要污染试管塞或纱布。 6)包扎成捆:用记号笔注明何种培养基。
7)灭菌:在高压锅中, 115 °C 高温灭菌30min。 2.培养基的配制 A.富集培养基(液体):
海水2216E 液体培养基(g/L):蛋白胨5.0,酵母粉1.0,海水1L,pH 8.0。取50mL 分装250mL 三角瓶后,8 层纱布封口,外包1层牛皮纸,121℃,高温灭菌20min。 B. 2216E 斜面(固体):
海水2216E 液体培养基中加入2%的琼脂粉,加热溶化琼脂,每支试管内。加入3mL,121℃高温灭菌20min,灭菌后摆斜面。 C. 无菌生理盐水和保种液:
生理盐水: NaCl 0.85% 蒸馏水配制。
每支试管加入5mL,盖上试管帽、包扎、121°C 高温灭菌20min。 保种液:生理盐水,加25%甘油 D. 碳源优化培养基:
以海水2216E 液体培养基(蛋白胨0.5%,酵母粉0.1%,磷酸铁0.01%, 人工海水,pH7.6)为基础,碳源分别是:葡萄糖、蔗糖、甘油、柠檬酸钠、乳糖,每种碳源的添加量为1%。 (二) 分离培养微生物常用器皿的准备
1) 清洗一些玻璃仪仪器:如三角烧瓶、试管、培养皿等。 2) 制作8层纱布,酒精棉。
3)Tip 头(0.2,1ml,分装枪头盒,牛皮纸包好,灭菌);保种管;药勺;长竹签。
4)卫生(308 实验室超净台,实验台面) (三) 培养基和玻璃器皿的灭菌方法 1、加压蒸汽灭菌法。其步骤如下:
1)灭菌锅内加入一定量的水,将用防水纸包扎好的物品放入其中。 2)接通电源,进行加热。
3)排除高压锅内的冷空气,可将排气阀打开,待排出冷空气后关闭排气阀;或关闭排气阀,待压力上升到0.5kg/cm2 时再打开排气阀,待压力回复到将近零时,再关闭排气阀。
4)当压力达15bl/in2(即1.05kg/cm2)时,此时灭菌锅内的温度为121℃,维持30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时,应适当降低压力,延长时间。
5)灭菌时间一到,切断电源。待压力降至零时,才能打开排气阀,然后打开灭菌锅盖,取出物品。 2、紫外线灭菌
一般使用30W 灯管,9m3空间,距地面2m,打开紫外灯照射0.5h,可使室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂,可增强灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力,但穿透力弱,即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除,因此上适用于空气表面杀菌。 3、化学药剂消毒灭菌
微生物实验室中常用的化学杀菌剂有酒精、甲醛、高锰酸钾、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、来苏尔、过氧乙酸等,它们有的是杀菌剂,有的是抑制剂。
四、思考题
1.固体培养基加琼脂后加热溶化时要注意哪些问题?
答:1)加热器功率不能太高,也不能太低。太高,容易沸腾和把培
养基烧焦;太低,培养基容易凝固。
2)受热要均匀,可以垫上石棉网,要用玻璃棒不停缓慢搅拌。 3)加热完毕后,要在合适的温度(60℃左右)倒平板,防止凝固。
2.培养基中加琼脂的作用是什么? 答:充当固化剂,起支持作用 3.如何检查培养基灭菌是否彻底?
答:把灭菌后的培养基,置25℃~30℃培养一周左右进行检查。如果培养基没有什么变化,说明灭菌效果良好;如果培养基出现了杂菌菌落,说明灭菌不彻底;如果大部分或全部菌种瓶都出现杂菌,说明灭菌温度或灭菌时间不够,应提高压力或延长灭菌时间。经过几次检验都证明已彻底灭菌后,以后按同样条件灭菌的则不必进行检查。
实验二 产碱性蛋白酶海洋细菌的分离筛选
一、目的和要求
根据一定的实验目的如酶类的生产,建立合适、精确的筛选模型,并从特定的样品如海泥中筛选出高产菌株。
目的:加深对发酵工程上游技术中菌种选育的认识;学会常规选种和育种的方法,树立科学认真仔细的态度,培养科研协作精神。 二、仪器与试剂
1. 仪器设备:灭菌锅,培养箱,摇床,玻璃仪器(每组需用量)(已准备)
2. 需准备的培养基 A.富集培养基(液体):
海水2216E 液体培养基(g/L):蛋白胨5.0,酵母粉1.0,陈海水1L,pH7.6。取50mL 分装250mL 三角瓶后,8层纱布封口,外包1层牛皮纸, 115℃高温灭菌30min。 B. 2216E 斜面(固体):
海水2216E 液体培养基中加入2%的琼脂粉,加热溶化琼脂,每支试管内加入5mL,115℃高温灭菌30min,灭菌后摆斜面。 C. 无菌生理盐水:
NaCl 0.85% 去离子水配制。每支试管加入4.5mL,盖上试管帽、包扎、115℃高温灭菌30min。
D. 碱性蛋白酶筛选培养基:海水2216E-脱脂奶粉平板:A:4%脱脂奶
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