MALDI-TOF MS操作规程

MALDI-TOF MS操作规程

(一) 样品测试步骤

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9 需做样的同学，在早9：00之前，标记好自己的样品（样品标记：以袁江北为例，命名为YJB1，YJB2,以此类推），放入质谱的样品架上； 操作质谱者在样品登记格中登记样品； 根据登记格中的位置在靶板上点样； 15 min后，待样品干燥后，在仪器Standby的状态下，单击Exp.Tech中的Open door，约为1 min，样品室门打开； 戴上PE手套或洗干净手，将靶板正确放入样品室； 单击Exp.Tech中的Close door按钮关闭靶板门； 等待真空度下降，一般约为15 min，一般为pum2小于5.0×10即可进行样品分析； 单击Exp.Tech中的Operate，待飞行时间管出现红线即可； 开始样品分析，按照操作规程进行；

分子量校正步骤：

（a） 设置质谱分析的参数设置，主要有：Firing中的power（一般50左右）；Blank参数应大于待分析样品的最小质量数（至少大于300Da，一般越大越好谱图越干净）；样品采集的质量数设置（pulsed ectraction optimised at），一般为样品中最大分子量的2/3；Exp.Tech中Turning mode：一般为Reflectron（分子量低于6000Da适用）；

（b） 打开Camera窗口；

（c） 右键点击靶板的放大镜，输入校正点的位置（如A10，不分大小写），回车键；按照靶板上的位置，开始分析样品（点击Fire，Power由低（50）到高开始分析，一般不要高于110，避免损坏激光源）；

（d） 新建文件夹（每次做样均需新建文件夹，文件夹命名为20130320，按日期命名，一个月保存在一个文件夹目录下），保存样品，命名为Cal0001;

（e） 点击Processing中的找校正文件，单击打开；点击Calibration开始校正；校正完毕后，点击save，关闭校正窗口；

10 校正完毕，按照样品登记表中登记的样品信息，仔细进行样品分析。样品分析、保存和校正数据一

样（以袁江北为例，命名为YJB10001，YJB10002,YJB20001,以此类推）；

11 做完样，单击Standby，在Standby的状态下，单击Open door，取出靶板，放在培养皿中；单击

Close door； -5

12 关闭软件、电脑。

注意事项：

每次使用完质普后，请及时把枪头盒里的枪头补满；

使用完点样枪，将移液枪的量程调到最大，悬挂在枪架上；

在MALDI-TOF MS记录本中登记做样的数目和仪器的使用状态。

一． 靶板的清洗

1.带上手套，将样品靶放入Lock_Lock盒中，倒入色谱纯级乙腈，溶剂浸没靶板，超声5-10分钟。

2.将溶剂换成色谱纯甲醇，浸没靶板，超声5-10分钟。

3.将溶剂换成50%甲醇+50%millipore纯水，超声5分钟。

4.将溶剂换成100%millipore纯水，超声5分钟。

5.将靶板取出，自然晾干即可。

注：如样品靶板特别脏，在第一步前用丙酮超声10分钟

二． 基质的选择

本实验室有以下三种基质选择

1.CHCA基质:5-10mg/ml (50%ACN,50%H2O,0.1%TFA) 多肽及小分子样品

2.DHB 基质:10-20mg/ml (50%ACN,50%H2O,0.1%TFA) 糖类及小分子样品

3.SA 基质：10-15mg/ml (50%ACN,50%H2O,0.1%TFA) 大于一万的蛋白及大分子样品

4.Dithranol基质：10-15mg/ml (100%THF,0.1%TFA) 聚合物样品

三．点样方式

1.混匀法: 样品及基质1:1的比例在Ep管内混合均匀，取1ul点靶，自然晾干。

2.覆盖法：移液枪取0.5ul样品，点靶，自然晾干。取0.5ul基质，覆盖到样品上，自然晾干。

3.三明治法：移液枪取0.5ul基质，点靶，等5-10s将基质吸走，形成基质的薄膜。取0.5ul样品，点靶，自然晾干。再取0.5ul基质点靶覆盖，自然晾干。

一般选用覆盖法点样。

样品分析

100

shots：

2

备注：仪器处于standby状态

五、特别注意事项：

1.Acquisition界面第二个选项Exp.Tech.右下角的Vent按钮禁止点击。（该按钮为泄真空功能键，仪器会失去高真空状态，对仪器内的电磁元件会有损害。）

2.仪器使用完毕，关掉Camera窗口，点击Standby使仪器处于待机状态。

3.仪器后面左下方为硅胶干燥瓶，正常时呈蓝色。如果变成紫红色或红色，请及时更换里面的硅胶。

4.仪器后面右下方是仪器的电源按钮，仪器长时间不用（如春节假期），请先关闭操作软件，再关电源。再次开机，需要先开电源，等待一小时以上，再打开操作软件，在Exp.Tech.界面点击左下角的Pump按钮，点击Pump SAC。仪器重新抽真空，请等待24小时后再使用仪器。

5.使用完质普后，请及时把枪头盒里的枪头补满。

三． 靶板的清洗

1.带上手套，将样品靶放入Lock_Lock盒中，倒入色谱纯级乙腈，溶剂浸没靶板，超声5-10分钟。

2.将溶剂换成色谱纯甲醇，浸没靶板，超声5-10分钟。

3.将溶剂换成50%甲醇+50%millipore纯水，超声5分钟。

4.将溶剂换成100%millipore纯水，超声5分钟。

5.将靶板取出，自然晾干即可。

注：如样品靶板特别脏，在第一步前用丙酮超声10分钟

四． 基质的选择

本实验室有以下三种基质选择

1.CHCA基质:5-10mg/ml (50%ACN,50%H2O,0.1%TFA) 多肽及小分子样品

2.DHB 基质:10-20mg/ml (50%ACN,50%H2O,0.1%TFA) 糖类及小分子样品

3.SA 基质：10-15mg/ml (50%ACN,50%H2O,0.1%TFA) 大于一万的蛋白及大分子样品

4.Dithranol基质：10-15mg/ml (100%THF,0.1%TFA) 聚合物样品

三．点样方式

1.混匀法: 样品及基质1:1的比例在Ep管内混合均匀，取1ul点靶，自然晾干。

2.覆盖法：移液枪取0.5ul样品，点靶，自然晾干。取0.5ul基质，覆盖到样品上，自然晾干。

3.三明治法：移液枪取0.5ul基质，点靶，等5-10s将基质吸走，形成基质的薄膜。取0.5ul样品，点靶，自然晾干。再取0.5ul基质点靶覆盖，自然晾干。

一般选用覆盖法点样。

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/1v8e.html