TLC常用试剂配制及显色方法

常用试剂配制及显色方法

（一） 通用显色剂 1． 重铬酸钾——硫酸

一般有机物均能显色，不同化合物显示不同颜色。

喷洒剂：5克重铬酸钾溶于100ml，40%硫酸中。喷洒后加热至150oC斑点出现。 2． 碘：检查一般有机物

（1） 碘蒸汽：在一个密闭玻璃皿先放入碘片，使缸内空气被碘蒸气饱和将薄层或纸层

放入缸内数分钟即显色，有时在缸内放一盛水的小杯，增加缸内的湿度，可提高显色的灵敏度。

（2） 0.5%碘的氯仿溶液，取出挥发散过量的碘再喷1%淀粉的水溶液，斑点转成蓝色。 3． 碘——碘化钾溶液：很我有机物虽黄色（配法见后）。

4． 5%——磷钼酸乙醇溶液：喷后120oC烤，还原性物质显兰色，再用氨气熏，则背景

变为无色。

5． 20%磷酸乙醇溶液：喷后120oC，还原性物质显兰色。

6． 碱性高锰酸钾试剂：还原性物质在淡红背景上显黄色。溶液I:1%高锰酸钾溶液。

溶液II：5%碳酸钠溶液。 溶液I和溶液II等量混合使用。

7． 中性0.05%高锰酸钾溶液：易还原性物质在淡红背景上显黄色。

8． 硝酸银——氢氧化铵（Tollen’s--zoffaronl）试剂，喷后105oC烤5~10分钟，还原性物

质显黑色。

溶液I：0.1N硝酸银溶液。 溶液II：氢氧化铵溶液。

临用前溶液I和溶液II以1：5混合。注意：放久则形成爆炸性的叠氦化银。 9． 硝酸银——高锰酸钾试剂：还原性物质在兰绿色背景上立即显黄色。

溶液I：0.1N硝酸银溶液：2N氢氧化铵溶液：2N氢氧化钠（1：1：2）。临用前配制。 溶液II：高锰酸钾0.5g，碳酸钠1g，加水成100ml溶液,临用前溶液I和溶液II等量混合。

10．四唑试剂：还原性物质，在室温或微加热时显紫色。

溶液I：0.5%四唑兰甲醇溶液。 溶液II：6N氢氧化钠溶液。临用前溶液I和溶液II等量混合。

11．铁氰化钾：三氯化铁试剂：还原性物质显兰色，再喷射2N/L盐酸溶液，则兰色加深。 溶液I：1%铁氰化钾溶液。 溶液II：2%三氯化铁溶液。临用前溶液I和溶液II等量混合。

12．浓硫酸：甲醇（1：1）溶液，或5%硫酸的乙醇溶液，喷后100oC烤15分钟，各种不同物质显不同颜色。

13．萤光显色剂溶液：试喷以下一溶液，不同的物质财富在萤光背景上可能显黑色或其他萤光斑点。

A：0.2%2.7——二氯萤光素乙醇溶液。 B：0.01萤光素乙醇液 C：0.1%桑色素乙醇溶液 D：0.05罗丹明B乙醇溶液 E：萤光素一溴，检不饱和化合物。 （1）0.1%萤光素乙醇溶液 （2）5%溴的CCL4溶液。

喷洒（1）以后，放置（2）溶液的缸内，可在UV光下检查萤光，萤光素与溴 化合成曙红（ensln）（无萤光），而光饱和化合物则与溴加成，保留了原来的萤光；若点样量较多，则成黄色 斑点，底板成红色。

14．碱式醋酸铅试剂（可做喷洒或沉淀试剂，多种有机化合物均反应）。

取Pbo14g置乳钵内，加蒸馏水10ml，研后成糊状后，倾入玻璃瓶中，乳钵用10ml蒸馏水洗净，洗液并入瓶中，加醋酸铅溶液（取醋酸铅22g，加蒸馏水70ml制成）70ml，用力振摇，放置七天，滤过，并自滤器中添加适量新沸过的冷蒸馏水使成100ml即得。 （二）生物碱显色剂 通用显色剂：

1．改良碘化铋钾（Dragendorff）试剂：生物碱和某些含氯化合物显橙红色。 溶液I：碱式硝酸铋0.85g，溶于冰乙酸10ml和40ml. 溶液II：碘化钾0.8g溶于水20ml.

储存液：溶液I和溶液II等量混合（置棕色瓶中杨以长期保存）。 显色剂：储存1ml与冰乙酸2ml和水70ml混合，用前配制。

2．碘化铂钾（碘铂酸）试剂，不同的生物碱显不同的颜色。10%六氯化铂酸溶液3ml和水97ml混合，加6%碘化钾溶液100ml，混合均匀，临用前配制。 3．碘—碘化钾（Wagner）试剂：生物碱 显棕褐色。

碘1g和碘化钾10g溶于50ml水中，加热，加冰醋酸2ml用水稀释到100ml。 4．改良碘化铋钾：碘，碘化钾（1：1）试剂；生物碱显紫棕色或灰黑色。

5．硫酸铈——硫酸试剂（改良sonnensclein试剂）：喷后110oC烤几分钟，不同的生物碱

显不同的颜色。硫酸铈0.1g悬浮于水4ml中，加三氯化乙酸1g，加热煮沸，放冷，逐滴加入浓硫酸直到混浊消失为止。

6．碘化氯钾（vmayer）试剂（沉淀试剂）：取HgCL2（毒）1.35g加蒸馏水60ml溶解后，量取碘化钾5g，加碘馏水10ml使溶解将两液混合，加蒸馏水稀释使成100ml即得。 7．硅钨酸（Bertrand）试剂（沉淀试剂）：5g硅钨酸溶于100ml蒸馏水中，加稀盐酸使呈酸性反应即得。 （三）强心苷显色剂

1．碱性3.5——二硝基苯甲酸试剂：强心苷显紫红色、几分钟后褪色。2%3.5——二硝基苯甲酸甲醇溶液与2N氢氧化钾溶液，用前按劳1：1混合。 2．碱性三硝基苯：在浅橙色背景上显橙红色。

溶液I：间三硝基苯100mg。溶于二甲基甲酰胺40ml，加浓HCL3~4滴，加水至100ml，避光能长期保存。

溶液II：5%碳酸风溶液

先喷溶液I，再喷溶液II，喷后90~103.0oC烤5分钟。

3．三氯乙酸试剂：喷后110oC烤7~10分钟，紫外光下观察萤光。

试剂I：25%三氯乙酸的乙醇或氯仿溶液，配制后可放置数日。或用试剂II：上述乙醇溶液用前每10ml加过氧化氢溶液4滴或新配3%氯铵T水溶液按4：1混合。 4．三氯化锑试剂：喷后100oC烤5分钟，日光下或紫外光下观察。 25%或饱和的三氯化锑氯仿溶液。 5．磷酸——溴试剂

溶液I：10%磷酸溶液。 溶液II：溴化钾饱和溶液：25%盐酸溶液（1：1：1）。 薄层用溶液I喷洒后，在125oC烤12分钟（薄层太湿时则烤的时间可适当延长），在紫外光下观察一次，将薄层再烤热，趁热喷溶液II，再在紫外光下观察。 6．Keller——Kllianl试剂：（检查α——去氧糖）

试液：100ml冰HAC和FeCL3试液0.5ml混匀，试样1ml混匀。试样1ml加试液2ml溶解后，沿试管壁滴入浓硫酸2接触面即显棕色。渐变浅绿，兰色。最后HAC层全部染成兰色。

（四）黄酮苷显色剂

黄酮类成份在紫外光下大多显出不同颜色，用氨熏，喷三氯化铝溶液或喷氢氧化钠等碱性溶液，则颜色 变深或变色。 1．氨气

2．10%氢氧化钠或氢氧化钾溶液。 3．1%或5%碳酸钠溶液。 4．1%或5%三氯化铝乙醇溶液。 5．2%乙酸镁甲醇溶液。

6．饱和三氯化锑的氯仿溶液，100oC烤5分钟。 以上六种试剂在喷前喷后将薄层置日光与紫外光下观察。 7．1~2%三氯化铁乙醇溶液。 8．1%中性乙酸铅或碱式乙酸铅溶液。 9．0.1N硝酸银溶液。

10．铁氰色钾——三氯化铁试剂。

溶液I：2%铁氰化钾溶液。 溶液II：2%三氯化铁溶液。临用前溶液I与溶液II等量混合。

11．硼氢化钾试剂：双氢黄酮化合物显红、橙红色。

溶液I：1~2%硼氢化钾（钠）异丙醇溶液，必须新鲜配制。溶液II：浓盐酸 先喷I、5分钟后放入盐酸蒸气槽内。

12．Shinoda试剂：在混有锌粉的硅胶薄层上喷盐酸，黄酮醇显红紫色。制备硅胶薄层时，加入2%w/w锌粉混合，薄层展开后盐酸溶液,如展开剂为酸性，可在展开后先喷锌——丙酮混悬液，再喷盐酸溶液。 罗丹明——氨试剂。

溶液I：0.1%罗丹明B的4%盐酸溶液。 溶液II：浓氨溶液。 先喷溶液I，然后再将薄层放入氨汽槽内。 14．对氨基苯磺酸试剂。

溶液I：对氨基苯磺酸盐溶液。 溶液II：5%亚硝酸钠溶液。

将对氨基苯磺酸0.3g溶液对8%盐酸溶液100ml中，到紫溶液25ml用冰冷却，加预冷的溶液II1.5ml。

15．硼酸——柠檬酸试剂

溶液I：饱和硼酸的丙酮溶液。 溶液II：柠檬酸丙酮溶液。 先喷溶液I，再喷溶液II。

16．福林试剂（Folin Ciocalteu试剂）

钨酸钠10g和钼酸钠2.5g溶于70ml水中，再缓缓加85%磷酸5ml和浓盐酸10ml，将混合液回流煮沸10小时，然后加硫酸锂15g，水5ml及溴1滴，再回去流煮沸15分钟，所

得溶液冷却后移置100ml溶量瓶中并用水稀释到刻度（贮备液），溶液应不显绿色。 溶液I：20%碳酸钠溶液。 溶液II：临用前上述贮备液1份用水三分稀释。 先喷溶液I，稍干再喷溶液II。 （五）皂苷灶显色剂

1．25%磷钼酸乙醇溶液：喷后在140oC加热5~10分钟皂苷元均呈深兰色。

2．三氯化锑浓盐酸或氯仿溶液：喷后在90oC烤10分钟（应在通风厨中进行），不同的皂苷元在可见光或紫外光下显出各种颜色。

3．硫酸：甲醇（1：2）溶液，喷后加热，不同的皂苷元可显红褐色、紫色、黄色或黑色，所显颜色与温度无关。

4．氟磺酸：乙酸（1：1）溶液，喷后130oC加热5分钟。各种皂苷元可显天兰紫、粉红、淡棕等色，在紫外光下也显不同萤光。

5．碘蒸汽：薄层置于碘蒸汽筒中，皂苷无皆显棕黄色斑点。

6．三氯快乙酸或三氯乙酸：乙酸（1：2）溶液，喷后在100oC加热20分钟皆显黄色。 7．2%血球生理盐水混悬液（溶血试验、检皂苷）。

取新鲜兔血（由心脏或静脉取血）适量，用洁净小毛刷迅速搅拌除去纤维蛋白，并用生理盐水反复离心洗涤至上清液无色后，量取沉降红血球（可以管的离心管通接读取）用生理盐水配成2%混悬液贮冰箱内备用（贮存期2~3天）。 （六）蒽醌苷显色剂

蒽醌及其苷本身在日光下显黄色，在紫外光下则显黄，红橙色萤光。在薄层上用氨熏或喷氢氧化钾与碱溶液，则颜色变深或变色。 1．氨气

2．10%氢氧化钾、甲醇溶液。 3．3%氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液。 4．50%哌啶的苯溶液。 5．饱和喷酸锂溶液。 6．饱和硼砂溶液。

7．0.5%乙酸镁甲醇溶液：喷后90oC烤5分钟。 8．0.5%乙酸铝溶液，喷后紫外光下看萤光。

9．0.5%牢固兰B试剂，喷后则原来氢氧化钠、锂、钾等溶液碱溶液显萤光的斑点此时在可见光下显棕、紫或绿色。也可先喷本试剂，再喷稀氢氧化钠溶液而显色。也用于酚类及能偶芳香胺的显色。

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