食品快速检测技术W2101-4 食用油中黄曲霉毒素总量快速检测-微教材

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《食品质量安全检测技术》课程-微教材

微课编号 所属模块（章节） 关键词 是否通用 微课类型 W2101 微课名称 食用油中黄曲霉毒素总量快速检测 子模块 生物毒素的快速检测 生物安全快速检测 食用油；黄曲霉毒素总量；快速检测 通用 农产品 √食品 实验实训型 微课形式 是否重点建设 实地拍摄式 √是 否 教学设计模式 直观演示法 1、 了解黄曲霉毒素的危害 教学目标 2、 掌握黄曲霉毒素总量快速检测的样品前处理方法 3、 掌握黄曲霉毒素总量快速检测的检测方法 知识点 1、 黄曲霉毒素相关知识及危害 教学内容 2、 食用油中黄曲霉毒素总量快速检测的前处理知识 技能点 1、 食用油中黄曲霉毒素总量快速检测的前处理操作技术 2、 食用油中黄曲霉毒素总量快速检3、 食用油中黄曲霉毒素总量快速检测测的检测基本操作技术 的基本检测知识 知识讲解

1、黄曲霉毒素的危害

黄曲霉毒素（AFT）是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉寄生曲霉产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。它们存在于土壤、动植物、各种坚果中，特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品，是霉菌毒素中毒性最大、对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素。

黄曲霉毒素进入体内后，主要在肝细胞内质网微粒体混合功能氧化酶系的作用下进行代谢。黄曲霉毒素没有经过代谢活化是无致癌性的，因曲昔曲霍毒素袖称为前致癌物。其毒性远远高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性，其中以B1毒性最大。当人摄入量大时，可发生急性中毒，出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。当微量持续摄入，可造成慢性中毒，生长障碍，引起纤维性病变，致使纤维组织增生。AFT的致癌力也居首位，是目前已知最强致癌物之一。

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边学边练

任务：食用油中黄曲霉毒素总量快速检测 操作步骤： 1、设备及试剂

设备：微孔板酶标仪、涡旋振荡器、天平、离心机、离心管、微量移液器、移液管、烧杯、具塞试管等。

试剂：去离子水、石油醚、甲醇、黄曲霉毒素总量ELISA检测试剂盒等。 2、试剂配制

（1）、50%甲醇溶液配制方法为：首先向具塞试管中加入5ml甲醇溶液，然后加入5ml去离子水，混合均匀后备用。

（2）、10倍稀释的浓缩样本稀释液的配制方法：用移液器吸取浓缩样本液500ul于具塞试管中，然后加入4.5ml去离子水，混匀后备用。

（3）、10倍稀释洗涤液的配置：首先向烧杯中加入5ml浓缩洗涤液，然后加入45ml去离子水，混匀后备用。

3、样品前处理

准确食用油2份，每份1g分别置于具塞离心管中，加入4ml石油醚，在涡旋振荡器上充分振荡，混匀；然后再加入4ml 50%甲醇溶液，轻摇3min，静置分层后取400ul下层清液与ep管中，加600ul样品稀释液充分混匀后待测。

4、检测与结果判定

取出需要数量的微孔板，将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置，并按如下步骤操作（1）、将标准品和样本加入到对应的微孔中，每孔50μL，再分别向各孔中加入黄曲霉毒素总量（AFT）酶标物50μL ，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境中反应15min。（2）、取出微孔板进行洗板，小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液300μL/孔，充分洗涤4次，每次间隔10s，用吸水纸拍干，未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破。（3）、显色：加入底物液100μL/孔，用盖板膜盖板后置室温避光环境反应15min。（4）、测定：加入终止液50ul/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处，建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据，测定每孔OD值。

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