高中生物第一章微生物培养技术第二节培养基对微生物的选择作用自

第一章 微生物培养技术 第二节 培养基对微生物的选择作用

1．下列有关培养基配制原则的叙述，不正确的是（ ）

A．异养微生物的培养基至少要有一种有机物

B．任何培养基都必须含有水、碳源、氮源、无机盐及生长因子 C．配制培养基时，要注意各种营养物质的浓度和比例

D．微生物的生长除受营养因素影响外，还受到pH、氧、渗透压的影响 2．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是（ ） A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水 B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水 C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水

D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水

3．耐冷菌是生活在低温环境下的一类微生物，在0～5 ℃可生长繁殖，最高生长温度一般在30 ℃左右。关于耐冷菌的说法不正确的是（ ）

A．耐冷菌参与代谢的酶在低温下仍具有较高的催化活性 B．不同取样地点相比较，北方寒冷地区水土中较易分离出耐冷菌 C．探究耐冷菌生活的最适温度，自变量应为温度，无关变量应相同且适宜

D．分离纯化耐冷菌的过程中，使用过的培养基及培养物必须经过消毒处理后才能丢弃 4．用来判断选择培养基是否起到了选择作用而设置的对照是（ ） A．未接种的选择培养基 B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基 C．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基 D．接种了的选择培养基

5．下列关于配制培养基的叙述中，正确的是（ ） A．制作固体培养基必须加入琼脂 B．加入青霉素可得到放线菌

C．培养自生固氮菌的培养基中不需添加氮源 D．发酵工程一般用固体培养基

6．因对病人滥用抗生素而造就了超级细菌。超级细菌对所有抗生素都有抗药性，能使人身上生成脓疮和毒疱，甚至能让人的肌肉坏死。欲从病人体内分离出超级细菌，对培养基的特殊处理是（ ）

A．不提供碳源 B．不提供氮源 C．加入多种维生素

D．加入多种抗生素

7．在分离分解纤维素的微生物实验中，关于土壤取样的叙述不正确的是（ ） A．可选取深层的土壤作为样品

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B．可选取树林中多年落叶形成的腐殖土作为样品 C．可选取树林中多年积累的枯枝败叶作为样品

D．可把滤纸埋在土壤中经过30天左右，再选取已烂的滤纸作为样品

8．选择培养时称取土样10 g，在无菌条件下加入盛有以纤维素粉为唯一碳源的液体培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下振荡培养1～2 d，直至培养液变浑浊。由此推论，纤维素分解菌的代谢类型是（ ）

A．自养需氧 B．自养厌氧 C．异养需氧 D．异养厌氧

9．稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是（ ）

A．操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释 B．需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面 C．不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落 D．操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理 10．下列图示错误的是（ ）

11．不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是（ ）

A．氮源物质为该微生物提供必要的氮元素 B．碳源物质也是该微生物的能源物质 C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质 D．水是该微生物的营养要素之一

12．要将能分解纤维素的细菌从土壤中分离出来，应将它们接种在（ ） A．加入伊红美蓝的鉴别培养基上 B．含有蛋白胨的固体培养基上

C．只含纤维素粉而无其他碳源的选择培养基上 D．含四大营养要素的培养基上

13．下表是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的培养基配方。请回答下列问题。

试剂 用量 牛肉膏 5 g 蛋白胨 10 g NaCl 5 g 琼脂 20 g 水 1 000 mL 2

（1）培养基的类型有很多，但培养基中一般都含有水、碳源、________和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是________________。培养基配制完成以后，一般还要调节pH，并对培养基进行________处理。该培养基从物理性质上分类属于____________。

（2）分离纯化微生物最常使用的接种方法是__________和____________。

（3）假设培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是什么？（列举两项） ______________________________________________________________________。

14．现在大力提倡无纸化办公，但是每年仍然不可避免地要产生大量的废纸，其主要成分是木质纤维，人类正努力将其转化为一种新的资源——乙醇。下图是工业上利用微生物由纤维素生产乙醇的基本工作流程，请回答相关问题。

（1）自然界中①环节需要的微生物大多分布在____________的环境中。将从土壤中获得的微生物培养在以________为唯一碳源的培养基上。

（2）如上所述的筛选中获得了三个菌落，对它们分别培养，并完成环节②，且三种等量酶液中酶蛋白浓度相同，则你认为三种酶液的活性__________（“一定相同”“不一定相同”“一定不同”），可以通过______________________________进行定量测定。

（3）根据测定结果，①环节常选择木霉，则②中获得的酶是________酶。

（4）生产中可以满足④环节的常见菌种是________，为了确保获得产物乙醇，⑤环节要注意______________，④过程要注意避免________。

15．某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，设计实验步骤如下，请给予合理的补充。

（1）采样与培养：将采集的土样混匀后称取1 g，置于经过______________法灭菌处理的液体培养基中，28 ℃振荡培养。

（2）接种与选择：为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行__________处理。之后，将菌液涂布接种于以______为唯一碳源的固体培养基上，30 ℃条件下培养。为避免污染，需将培养皿呈______状态放置。此外，为排除其他因素的影响，提高实验可信度，本步骤需设计____________________作为空白对照。

（3）筛选与纯化：将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围的现象是____________，则说明此种菌能够__________________________。从平板中挑取实验效果明

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显的目的菌株，采用________法接种于新的培养基平板，可对菌株进行进一步的纯化。

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参考答案

1．解析：不同微生物需要的营养物质不同，如自生固氮菌能利用空气中的N2，因而培养基中不需添加氮源。

答案：B

2．解析：分解尿素的细菌能利用尿素，因此培养基中含尿素而不含其他氮源。 答案：A

3．解析：使用过的培养基必须经过灭菌处理后再丢弃，消毒还会存在微生物的芽孢和孢子。

答案：D

4．解析：对照实验应遵循是单一变量原则，所以牛肉膏蛋白胨培养基与选择培养基一样，应进行接种、培养。

答案：C

5．解析：琼脂是常用的凝固剂，但非唯一的凝固剂。细菌和放线菌对青霉素都比较敏感，加入青霉素的培养基不会得到放线菌。根瘤菌能够利用大气中的N2（固氮），培养基中不必含有氮源。发酵工程一般获得微生物的代谢产物，液体培养基比较适合。

答案：C

6．解析：超级细菌的生命活动必需碳源、氮源，不加入碳源、氮源，不可能分离出超级细菌。超级细菌和普通病菌的区别在于前者对所有抗生素均有抗性，后者对抗生素没有抗性，所以在培养基中加入多种抗生素后能特异性地选择出超级细菌。

答案：D

7．解析：深层土壤中纤维素含量少，纤维素分解菌的数量也少。 答案：A

8．解析：以纤维素粉为唯一碳源说明是异养型；振荡培养是为了增加溶氧，说明是需氧型。

答案：C

9．解析：若菌液浓度过大，形成的菌落连在一起，得不到单个的菌落。 答案：C

10．解析：在用划线法接种时，下一次划线应从上一次划线的末端开始。D图中第二次划线与第一次划线、第三次划线与第二次划线都有间隙。

答案：D

11．解析：CO2是无机碳源，不能作为该微生物的能源物质。 答案：B

12．解析：在只含纤维素粉而无其他碳源的选择培养基上纤维素分解菌能够生长繁殖，其他微生物不能生长繁殖。

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答案：C

13．解析：培养基中一般都应含有水、无机盐、碳源、氮源。配制培养基时加入了琼脂，因此该培养基属于固体培养基。培养基配制完成后要调pH和灭菌。牛肉膏、蛋白胨中含碳元素，可作为有机碳源。分离纯化微生物一般用平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法中每次划线前都要将接种环灼烧灭菌，以杀死上次划线时接种环上残留的菌种；采用稀释涂布平板法时稀释度要足够高，否则会使微生物不能分散成单个细胞。

答案：（1）氮源 牛肉膏和蛋白胨 灭菌 固体培养基 （2）平板划线法 稀释涂布平板法 （3）稀释倍数不够，菌液的浓度太高；划线时，划完第一次没有灭菌即接着划第二次；培养过程中灭菌不严格，受到了其他微生物的污染（任选两个）

14．解析：（1）废纸的主要成分是木质纤维，因而使其糖化的酶应为纤维素酶，由此得知①中的产酶微生物应该大多分布在富含纤维素的环境中。能分解纤维素的微生物的分离筛选需要用到以纤维素为唯一碳源的培养基。（2）由于个体差异，不同菌的产酶量不一定相同，因此可以通过对纤维素酶分解纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定来确定。（3）使纤维素糖化，即将纤维素分解为葡萄糖，该酶是纤维素酶。（4）在工业生产上通常利用酵母菌对葡萄糖液进行发酵产生酒精。发酵过程中要注意保证无氧条件，避免染上杂菌，使发酵失败。

答案：（1）富含纤维素（或落叶较多等） 纤维素

（2）不一定相同 对纤维素酶分解纤维素后所产生的葡萄糖 （3）纤维素

（4）酵母菌 发酵装置密闭（或保证无氧条件等） 杂菌污染

15．解析：培养基要经高压蒸汽灭菌处理。为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行稀释。接种到以淀粉为唯一碳源的选择培养基上，才能选择出能利用淀粉的微生物，可用未接种的空白培养基作对照。微生物利用淀粉后，以微生物为中心的周围无淀粉，加入碘液不变蓝，呈现透明状。对菌株进一步纯化一般用平板划线法。

答案：（1）高压蒸汽灭菌

（2）系列稀释（或“梯度稀释”） 淀粉 倒置 未接种的空白培养基（或接种等量无菌水的培养基）

（3）出现透明圈 分泌淀粉酶使淀粉发生水解 （平板）划线

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答案：C

13．解析：培养基中一般都应含有水、无机盐、碳源、氮源。配制培养基时加入了琼脂，因此该培养基属于固体培养基。培养基配制完成后要调pH和灭菌。牛肉膏、蛋白胨中含碳元素，可作为有机碳源。分离纯化微生物一般用平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法中每次划线前都要将接种环灼烧灭菌，以杀死上次划线时接种环上残留的菌种；采用稀释涂布平板法时稀释度要足够高，否则会使微生物不能分散成单个细胞。

答案：（1）氮源 牛肉膏和蛋白胨 灭菌 固体培养基 （2）平板划线法 稀释涂布平板法 （3）稀释倍数不够，菌液的浓度太高；划线时，划完第一次没有灭菌即接着划第二次；培养过程中灭菌不严格，受到了其他微生物的污染（任选两个）

14．解析：（1）废纸的主要成分是木质纤维，因而使其糖化的酶应为纤维素酶，由此得知①中的产酶微生物应该大多分布在富含纤维素的环境中。能分解纤维素的微生物的分离筛选需要用到以纤维素为唯一碳源的培养基。（2）由于个体差异，不同菌的产酶量不一定相同，因此可以通过对纤维素酶分解纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定来确定。（3）使纤维素糖化，即将纤维素分解为葡萄糖，该酶是纤维素酶。（4）在工业生产上通常利用酵母菌对葡萄糖液进行发酵产生酒精。发酵过程中要注意保证无氧条件，避免染上杂菌，使发酵失败。

答案：（1）富含纤维素（或落叶较多等） 纤维素

（2）不一定相同 对纤维素酶分解纤维素后所产生的葡萄糖 （3）纤维素

（4）酵母菌 发酵装置密闭（或保证无氧条件等） 杂菌污染

15．解析：培养基要经高压蒸汽灭菌处理。为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行稀释。接种到以淀粉为唯一碳源的选择培养基上，才能选择出能利用淀粉的微生物，可用未接种的空白培养基作对照。微生物利用淀粉后，以微生物为中心的周围无淀粉，加入碘液不变蓝，呈现透明状。对菌株进一步纯化一般用平板划线法。

答案：（1）高压蒸汽灭菌

（2）系列稀释（或“梯度稀释”） 淀粉 倒置 未接种的空白培养基（或接种等量无菌水的培养基）

（3）出现透明圈 分泌淀粉酶使淀粉发生水解 （平板）划线

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