正交试验法优选丹参中丹酚酸B的提取工艺

湖南中医药大学学报Ｊｏｕｒ腿ｌｏｆＴＣＭＵｎｉｖ．ｏｆＨｕｎａｎ

２００６年１２月第２６卷第６期

Ｄｅｃ．２００６Ｖ０１．２６

Ｎｏ．６

正交试验法优选丹参中丹酚酸Ｂ的提取工艺

叶

勇，谭汉梯，江

帅

（华南理工大学绿色化学产品技术广东省重点实验室，广东广州５１０６４０）

［摘要］目的优化丹酚酸Ｂ提取工艺。方法弘提取物的得率及ＨＰＬＣ法测定丹酚酸Ｂ含量为指标，考察乙醇浓度、加醇量、提取时间、温度对提取的影响。结果除提取时间外，其它因素对提取物得率的影响均达显著水平，而对其含量的影响以乙醇浓度和温度影响显著。综合最佳提取工艺为７０％醇浓度，１２倍加液量，于５０℃提取

１

ｈ。结论以此工艺可获得最佳提取物得率和丹酚酸Ｂ含量。

（关键词】丹酚酸Ｂ；ＨＰＬｃ；正交试验［中图分类号】Ｒ２８４．２

［文献标识码］Ａ

［文章编号】１０００一５６３３（２００６）０６—００２２—０２

丹酚酸（Ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄｓ）是中药丹参（Ｓａｌｖｉａ酸（２０—５５—２４—１），柱温３０℃，进样量１０肛Ｌ，流速１

ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长２７６ｎｍ，运行时间２０ｍｉｎ，理论塔板数不低于５０００。

ｍｉｌｔｉｏ乩ｉｚａｅ）中的主要活性成分，具有抗动脉粥样硬

化、保护心肌细胞、防心脑缺血损伤、抗血小板凝聚、抗肝纤维化、改善记忆、抗肿瘤等作用【ｌ】。丹参药材中

２．２标准曲线制备

精密称定丹酚酸Ｂ对照品２３ｍｇ，水溶解并定

容至５０ｍＬ。分别吸取标准液０．３１、０．６２、１．２５、２．５０、

５．００、１０．００ｍＬ，加水定容至１０

水溶性成分提取，多以丹参素或原儿茶醛为指树＇】，

但二者在药材中的含量均较低，只有丹酚酸Ｂ为丹酚酸中最主要的有效成分【３】。以丹酚酸Ｂ为有效成分的药物已成为研究开发的热点。虽然目前已有关于丹酚酸提取工艺研究报道，但是只考察了提取物得率，没有针对丹酚酸Ｂ含量考察。本研究同时以提取物得率和以ＨＰＬＣ测定丹酚酸Ｂ含量为指标，进行丹参水溶性酚酸提取的正交试验，以确定最佳

的提取工艺。

ｍＬ，即得０．０１４

４、

０．０２８８、０．０５７５、Ｏ．１１５、０．２３０、０．４６０ｍｇ／ｍＬ标准液，

分别精密吸取１０斗Ｌ注入高效液相色谱仪，按上述条件测定，丹酚酸Ｂ的保留时间为１５．３ｍｉｎ，见图ｌＡ。以峰面积Ｘ为横坐标，浓度ｙ为纵坐标，得回归

直线方程ｙ＝０．０００１０６Ｘ＋０．００５５，ｒ＝０．９９９９。表明丹酚酸Ｂ在０．０１４～０．４６０ｍｇ／ＩｎＬ范围内具有良好的线性关系。

１实验材料

１．１试药

丹参药材（湖南产），６０℃减压干燥后，粉碎过４０目筛备用；乙腈为色谱纯；甲醇、甲酸为分析醇；丹酚酸Ｂ对照品（购自中国药品生物制品检定所，纯度９９％，批号２００３１１０８）。

１．２仪器

２．３提取正交设计

选用ＩＪ９（３４）正交设计表，４因素为：醇浓度、加醇量、提取时间、温度，每因素设３水平。见表１。

表１试验因素与水平表

水平

Ａ乙醇浓度（％）Ｂ加醇量（倍）Ｃ提取时问（ｈ）Ｄ提取温度（℃）

因

素

高效液相色谱仪，ＳＰＤ紫外检测器型号Ａｇｉｌｅｎｔ

１１００。

２．４丹参酚酸的提取工艺

经过预试验，发现丹参酚酸Ｂ在稀醇溶液中溶解性好，故以稀醇提取为佳。取丹参药材粉末１００ｇ９份，分别加入药材量８、１０或１２倍，比例３０％、

Ｃ１８

２方法与结果

２．１色谱条件

采用高效液相色谱法，色谱柱Ｋｍｍａｓｉｌ

（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５斗ｍ）。流动相：乙腈一甲醇一水一甲

（收稿日期］２００６—０４一１３

（基金项目）教育部重点实验室资助，学生研究计划ＳＲＰ项目。

５０％或７０％稀醇，在３０、５０或８０℃，提取０．５、１或２ｈ，过滤后减压浓缩得丹参浸膏，６０℃真空干燥。以

［作者简介］叶勇（１９６９一），男，安徽宁国人，博士，讲师，主要从事中医药抗肿瘤研究。

第６期叶勇，等正交试验法优选丹参中丹酚酸Ｂ的提取工艺

２３

提取物得率及其丹酚酸Ｂ含量为指标，考察丹参药材提取最佳条件参数。

２．５样品测定

２．６结果

试验重复２次后，结果见表２与表３。方差分析表明，除提取时间外，其它因素对得率的影响均达显著水平，说明提取时的加液量、温度、乙醇浓度是影响得率的主要条件。而对纯度影响因素呈显著的是乙醇浓度和温度，表明它们是影响纯度的主要条件。影响得率因素作用顺序为：加液量＞提取温度＞乙醇浓度＞提取时间；影响纯度因素作用顺序为：乙醇浓度＞提取温度＞加液量＞提取时间。得率和纯度最佳提取参数分别为：Ａ出，Ｃ２Ｄ：；Ａ，Ｂ２Ｃ２Ｄ：。由于Ｂｚ和Ｂ，对纯度的影响差异不大，故选用Ａ３Ｂ，Ｃ２Ｄｚ为最佳提取条件，即７０％醇浓度，１２倍加液量，提取时间１ｈ，提取温度５０℃。以此条件提取３批（２００５１２０３，

．

．

称取提取干燥物１００ｍｇ，加水溶解并定容至

１００

ｍＬ，过滤，滤液再过０．４５斗ｍ微孔滤膜，进样高

效液相色谱仪，按标准曲线项下方法测定峰面积，见

图１Ｂ，通过标准曲线获得样液浓度Ｃ，Ｃ×１００得干

浸膏中丹酚酸Ｂ百分含量。

１

ｌＩ）

２００５１２０５，２００５１２０７），每批１０００ｇ，提取得率平均

１５

２（）

ｒ。’。’。。１。。。。。’。＇。。。。。’１’。’。’’。’，＿＿－－＿。 －＿＿＿＿＿＿’■‘————＿。－。－ －－－一

ｎ

５１０Ｊ５２（）０５

７．５０％，ＲＳＤ２８．６８％，ＲＳＤ

１．４９％（ｎ＝３），丹酚酸Ｂ含量平均为１．２６％（ｎ＝３）可见含量和纯度均较高，

（￡／ｍｉｎ）（￡／ｍｉｎ）Ｂ．提取物

Ａ．对照组

图１

说明提取条件最佳。

丹参中丹酚酸Ｂ的ＨＰＬＣ图谱

表２丹参中丹酚酸Ｂ正交试验结果

得率（％）

丹酚酸Ｂ含量（％）

序号

ｌ２３４５６７８９Ｋ１Ｋ２Ｋ３Ｒ

ＡＢＣ

Ｄ

－＿●＿＿＿＿一＿－＿●＿ｌ－－－＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿－－＿●＿＿＿＿＿－＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿●－－＿－＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿－＿－－＿－＿＿＿＿＿＿＿＿－●＿＿＿＿＿ｌ＿＿＿＿●＿＿＿＿－－＿＿＿＿＿＿＿－＿●－＿＿－－＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿—＿—－————————————一

１１ｌ２２２３３３

３７．５２／１４１．２２３９．８４／１６３．９３４１．７０／１７０．７００．７０／４．９１

ｌ２３ｌ２３ｌ２３

３５．２５／１５５．１５４１．４０／１６２．５７４２．４１／１５８．１３１．１９／１．２４

ｌ２３２３１３ｌ２

３９．７０／１５７．８９４０．６５／１５９．３０３８．７１／１５８．６６Ｏ．３２／ｏ．２４

１２３３ｌ２２３１

３６．７６／１５３．２９４２．４４／１６４．５６３９．８６／１５８．００Ｏ．９５／１．８８

∑Ｙ＝１１９．０６．ＣＴ＝７８７．５２３

∑Ｙ＝４７５．８５．ＣＴ＝１２５７９．６２

５．２５４６．９７８６．６４７６．０３４６．５７３７．７６６６．８６３７．５０９７．５３ｌ

４．８０２７．３３９６．５０ｌ６．１４２５．９７７７．３４４６．１５０７．０２７６．６２２

２３．０６２６．３２２４．６３２６．２５２７．８３２８．５３２９．２６２９．３６２７．３３

２０．８４２４．２８２２．０９２７．２６２６．３７２７．６９２８．４８２８＿４ｌ２７．８６

表３方差分析表

本试验是丹酚酸提取试验，产品中丹酚酸Ｂ的含量不高。只有经过精制，才能获得较高纯度的丹酚

酸Ｂ。

实验结果显示，乙醇浓度提高有利于提高丹酚酸的得率和含量，但是温度过高则不利，这与丹酚酸Ｂ的不稳定相关。

参考文献：

【ｌ】李认书，李永强．丹酚酸研究进展【Ｊ］．时珍国医国药，２００３，１４

（６）：３７ｌ一３７３。

【２】张荣泉，王德仁，张蓉．丹参水溶性成分提取工艺研究［Ｊ】．中药

注：ｍ．０５（２，９）＝４．２６，冈．０１（２，９）＝８．０２。４Ｐ＜０．０５，８＋Ｐ＜０．Ｏｌ。

３讨论

丹酚酸在ＨＰＬＣ测定过程中具有明显拖尾现象，故在流动相中添加少量甲酸，ｐＨ３．０，具有较好

抑制拖尾效果。

材，２００４，２４（１１）：８１８—８１９．

【３】李静，何丽一，宋万志．丹参中水溶性酚酸类成分的薄层扫描

测定法【Ｊ］．药学学报，１９９３，２８（７）：５４３—５４７．

正交试验法优选丹参中丹酚酸B的提取工艺

作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：

叶勇， 谭汉梯， 江帅

华南理工大学绿色化学产品技术广东省重点实验室,广东,广州,510640湖南中医药大学学报

JOURNAL OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE UNIVERSITY OF HUNAN2006,26(6)

参考文献(3条)

1.李认书.李永强 丹酚酸研究进展[期刊论文]-时珍国医国药 2003(06)

2.张荣泉.王德仁.张蓉 丹参水溶性成分提取工艺研究[期刊论文]-中药材 2004(11)3.李静.何丽一.宋万志 丹参中水溶性酚酸类成分的薄层扫描测定法 1993(07)

本文链接：/Periodical_hnzyxyxb200606008.aspx

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