TLC显色剂配制

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常用试剂配制及显色方法

(一) 通用显色剂 1. 重铬酸钾——硫酸

一般有机物均能显色,不同化合物显示不同颜色。

喷洒剂:5克重铬酸钾溶于100ml,40%硫酸中。喷洒后加热至150oC斑点出现。 2. 碘:检查一般有机物

(1) 碘蒸汽:在一个密闭玻璃皿先放入碘片,使缸内空气被碘蒸气饱和将薄层或纸层

放入缸内数分钟即显色,有时在缸内放一盛水的小杯,增加缸内的湿度,可提高显色的灵敏度。

(2) 0.5%碘的氯仿溶液,取出挥发散过量的碘再喷1%淀粉的水溶液,斑点转成蓝色。 3. 碘——碘化钾溶液:很我有机物虽黄色(配法见后)。

4. 5%——磷钼酸乙醇溶液:喷后120oC烤,还原性物质显兰色,再用氨气熏,则背景

变为无色。

5. 20%磷酸乙醇溶液:喷后120oC,还原性物质显兰色。

6. 碱性高锰酸钾试剂:还原性物质在淡红背景上显黄色。溶液I:1%高锰酸钾溶液。

溶液II:5%碳酸钠溶液。 溶液I和溶液II等量混合使用。

7. 中性0.05%高锰酸钾溶液:易还原性物质在淡红背景上显黄色。

8. 硝酸银——氢氧化铵(Tollen’s--zoffaronl)试剂,喷后105oC烤5~10分钟,还原性物

质显黑色。

溶液I:0.1N硝酸银溶液。 溶液II:氢氧化铵溶液。

临用前溶液I和溶液II以1:5混合。注意:放久则形成爆炸性的叠氦化银。 9. 硝酸银——高锰酸钾试剂:还原性物质在兰绿色背景上立即显黄色。

溶液I:0.1N硝酸银溶液:2N氢氧化铵溶液:2N氢氧化钠(1:1:2)。临用前配制。 溶液II:高锰酸钾0.5g,碳酸钠1g,加水成100ml溶液,临用前溶液I和溶液II等量混合。

10.四唑试剂:还原性物质,在室温或微加热时显紫色。

溶液I:0.5%四唑兰甲醇溶液。 溶液II:6N氢氧化钠溶液。临用前溶液I和溶液II等量混合。

11.铁氰化钾:三氯化铁试剂:还原性物质显兰色,再喷射2N/L盐酸溶液,则兰色加深。 溶液I:1%铁氰化钾溶液。 溶液II:2%三氯化铁溶液。临用前溶液I和溶液II等量混合。

12.浓硫酸:甲醇(1:1)溶液,或5%硫酸的乙醇溶液,喷后100oC烤15分钟,各种不同物质显不同颜色。

13.萤光显色剂溶液:试喷以下一溶液,不同的物质财富在萤光背景上可能显黑色或其他萤光斑点。

A:0.2%2.7——二氯萤光素乙醇溶液。 B:0.01萤光素乙醇液 C:0.1%桑色素乙醇溶液 D:0.05罗丹明B乙醇溶液 E:萤光素一溴,检不饱和化合物。 (1)0.1%萤光素乙醇溶液 (2)5%溴的CCL4溶液。

喷洒(1)以后,放置(2)溶液的缸内,可在UV光下检查萤光,萤光素与溴 化合成曙红(ensln)(无萤光),而光饱和化合物则与溴加成,保留了原来的萤光;若点样量较多,则成黄色 斑点,底板成红色。

14.碱式醋酸铅试剂(可做喷洒或沉淀试剂,多种有机化合物均反应)。

取Pbo14g置乳钵内,加蒸馏水10ml,研后成糊状后,倾入玻璃瓶中,乳钵用10ml蒸馏水洗净,洗液并入瓶中,加醋酸铅溶液(取醋酸铅22g,加蒸馏水70ml制成)70ml,用力振摇,放置七天,滤过,并自滤器中添加适量新沸过的冷蒸馏水使成100ml即得。 (二)生物碱显色剂 通用显色剂:

1.改良碘化铋钾(Dragendorff)试剂:生物碱和某些含氯化合物显橙红色。 溶液I:碱式硝酸铋0.85g,溶于冰乙酸10ml和40ml. 溶液II:碘化钾0.8g溶于水20ml.

储存液:溶液I和溶液II等量混合(置棕色瓶中杨以长期保存)。 显色剂:储存1ml与冰乙酸2ml和水70ml混合,用前配制。

2.碘化铂钾(碘铂酸)试剂,不同的生物碱显不同的颜色。10%六氯化铂酸溶液3ml和水97ml混合,加6%碘化钾溶液100ml,混合均匀,临用前配制。 3.碘—碘化钾(Wagner)试剂:生物碱 显棕褐色。

碘1g和碘化钾10g溶于50ml水中,加热,加冰醋酸2ml用水稀释到100ml。 4.改良碘化铋钾:碘,碘化钾(1:1)试剂;生物碱显紫棕色或灰黑色。

5.硫酸铈——硫酸试剂(改良sonnensclein试剂):喷后110oC烤几分钟,不同的生物碱

显不同的颜色。硫酸铈0.1g悬浮于水4ml中,加三氯化乙酸1g,加热煮沸,放冷,逐滴加入浓硫酸直到混浊消失为止。

6.碘化氯钾(vmayer)试剂(沉淀试剂):取HgCL2(毒)1.35g加蒸馏水60ml溶解后,量取碘化钾5g,加碘馏水10ml使溶解将两液混合,加蒸馏水稀释使成100ml即得。 7.硅钨酸(Bertrand)试剂(沉淀试剂):5g硅钨酸溶于100ml蒸馏水中,加稀盐酸使呈酸性反应即得。 (三)强心甙显色剂

1.碱性3.5——二硝基苯甲酸试剂:强心甙显紫红色、几分钟后褪色。2%3.5——二硝基苯甲酸甲醇溶液与2N氢氧化钾溶液,用前按劳1:1混合。 2.碱性三硝基苯:在浅橙色背景上显橙红色。

溶液I:间三硝基苯100mg。溶于二甲基甲酰胺40ml,加浓HCL3~4滴,加水至100ml,避光能长期保存。

溶液II:5%碳酸风溶液

先喷溶液I,再喷溶液II,喷后90~103.0oC烤5分钟。

3.三氯乙酸试剂:喷后110oC烤7~10分钟,紫外光下观察萤光。

试剂I:25%三氯乙酸的乙醇或氯仿溶液,配制后可放置数日。或用试剂II:上述乙醇溶液用前每10ml加过氧化氢溶液4滴或新配3%氯铵T水溶液按4:1混合。 4.三氯化锑试剂:喷后100oC烤5分钟,日光下或紫外光下观察。 25%或饱和的三氯化锑氯仿溶液。 5.磷酸——溴试剂

溶液I:10%磷酸溶液。 溶液II:溴化钾饱和溶液:25%盐酸溶液(1:1:1)。 薄层用溶液I喷洒后,在125oC烤12分钟(薄层太湿时则烤的时间可适当延长),在紫外光下观察一次,将薄层再烤热,趁热喷溶液II,再在紫外光下观察。 6.Keller——Kllianl试剂:(检查α——去氧糖)

试液:100ml冰HAC和FeCL3试液0.5ml混匀,试样1ml混匀。试样1ml加试液2ml溶解后,沿试管壁滴入浓硫酸2接触面即显棕色。渐变浅绿,兰色。最后HAC层全部染成兰色。

(四)黄酮甙显色剂

黄酮类成份在紫外光下大多显出不同颜色,用氨熏,喷三氯化铝溶液或喷氢氧化钠等碱性溶液,则颜色 变深或变色。 1.氨气

2.10%氢氧化钠或氢氧化钾溶液。 3.1%或5%碳酸钠溶液。 4.1%或5%三氯化铝乙醇溶液。 5.2%乙酸镁甲醇溶液。

6.饱和三氯化锑的氯仿溶液,100oC烤5分钟。 以上六种试剂在喷前喷后将薄层置日光与紫外光下观察。 7.1~2%三氯化铁乙醇溶液。 8.1%中性乙酸铅或碱式乙酸铅溶液。 9.0.1N硝酸银溶液。

10.铁氰色钾——三氯化铁试剂。

溶液I:2%铁氰化钾溶液。 溶液II:2%三氯化铁溶液。临用前溶液I与溶液II等量混合。

11.硼氢化钾试剂:双氢黄酮化合物显红、橙红色。

溶液I:1~2%硼氢化钾(钠)异丙醇溶液,必须新鲜配制。溶液II:浓盐酸 先喷I、5分钟后放入盐酸蒸气槽内。

12.Shinoda试剂:在混有锌粉的硅胶薄层上喷盐酸,黄酮醇显红紫色。制备硅胶薄层时,加入2%w/w锌粉混合,薄层展开后盐酸溶液,如展开剂为酸性,可在展开后先喷锌——丙酮混悬液,再喷盐酸溶液。 罗丹明——氨试剂。

溶液I:0.1%罗丹明B的4%盐酸溶液。 溶液II:浓氨溶液。 先喷溶液I,然后再将薄层放入氨汽槽内。 14.对氨基苯磺酸试剂。

溶液I:对氨基苯磺酸盐溶液。 溶液II:5%亚硝酸钠溶液。

将对氨基苯磺酸0.3g溶液对8%盐酸溶液100ml中,到紫溶液25ml用冰冷却,加预冷的溶液II1.5ml。

15.硼酸——柠檬酸试剂

溶液I:饱和硼酸的丙酮溶液。 溶液II:柠檬酸丙酮溶液。 先喷溶液I,再喷溶液II。

16.福林试剂(Folin Ciocalteu试剂)

钨酸钠10g和钼酸钠2.5g溶于70ml水中,再缓缓加85%磷酸5ml和浓盐酸10ml,将混合液回流煮沸10小时,然后加硫酸锂15g,水5ml及溴1滴,再回去流煮沸15分钟,所

得溶液冷却后移置100ml溶量瓶中并用水稀释到刻度(贮备液),溶液应不显绿色。 溶液I:20%碳酸钠溶液。 溶液II:临用前上述贮备液1份用水三分稀释。 先喷溶液I,稍干再喷溶液II。 (五)皂甙灶显色剂

1.25%磷钼酸乙醇溶液:喷后在140oC加热5~10分钟皂甙元均呈深兰色。

2.三氯化锑浓盐酸或氯仿溶液:喷后在90oC烤10分钟(应在通风厨中进行),不同的皂甙元在可见光或紫外光下显出各种颜色。

3.硫酸:甲醇(1:2)溶液,喷后加热,不同的皂甙元可显红褐色、紫色、黄色或黑色,所显颜色与温度无关。

4.氟磺酸:乙酸(1:1)溶液,喷后130oC加热5分钟。各种皂甙元可显天兰紫、粉红、淡棕等色,在紫外光下也显不同萤光。

5.碘蒸汽:薄层置于碘蒸汽筒中,皂甙无皆显棕黄色斑点。

6.三氯快乙酸或三氯乙酸:乙酸(1:2)溶液,喷后在100oC加热20分钟皆显黄色。 7.2%血球生理盐水混悬液(溶血试验、检皂甙)。

取新鲜兔血(由心脏或静脉取血)适量,用洁净小毛刷迅速搅拌除去纤维蛋白,并用生理盐水反复离心洗涤至上清液无色后,量取沉降红血球(可以管的离心管通接读取)用生理盐水配成2%混悬液贮冰箱内备用(贮存期2~3天)。 (六)蒽醌甙显色剂

蒽醌及其甙本身在日光下显黄色,在紫外光下则显黄,红橙色萤光。在薄层上用氨熏或喷氢氧化钾与碱溶液,则颜色变深或变色。 1.氨气

2.10%氢氧化钾、甲醇溶液。 3.3%氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液。 4.50%哌啶的苯溶液。 5.饱和喷酸锂溶液。 6.饱和硼砂溶液。

7.0.5%乙酸镁甲醇溶液:喷后90oC烤5分钟。 8.0.5%乙酸铝溶液,喷后紫外光下看萤光。

9.0.5%牢固兰B试剂,喷后则原来氢氧化钠、锂、钾等溶液碱溶液显萤光的斑点此时在可见光下显棕、紫或绿色。也可先喷本试剂,再喷稀氢氧化钠溶液而显色。也用于酚类及能偶芳香胺的显色。

溶液I:新配的0.5%牢固兰B盐的水溶液。 溶液II:0.1N/L氢氧化钠溶液。 先喷溶液I,喷溶液II。 (七)香豆精甙显色剂

1.0.5%碘的碘化钾溶液,香豆精各种颜色,很多其他类型的化合显色。

2.重氟化氨基苯磺酸试剂,香豆精显黄、橙、红、棕紫等颜色也用于酚类,芳香胺反转偶合的朵环化合物的显色。

对氨基苯横酸0.9g克加热溶于12N盐酸9ml,用水稀释到100ml,取此溶液10ml用冰冷却,加冰冷的4.5%亚硝酸钠溶液10ml,0oC放15分钟(在0oC可保存三天),用前加等体积1%碳酸钠溶液。

3.重氮化对硝基苯胺试剂、香豆精显黄、红、棕、紫等颜色,也用于酚类的显色。 对硝基苯苯胺0.7g溶于12N盐酸9ml,用水稀释到100ml,将此溶液逐渐滴加到冰冷的1%亚硝酸钠溶液5,再用冰冷的水稀释到100,需临用时新配。 4.4——氨基安替比林——铁氰化钾试剂:香豆素和酚类显橙红至深红色。 溶液I:2%4——氨基安替比林乙醇溶液。 溶液II:8%铁氨化钾溶液。 先喷溶液I,再喷溶液II,再用氨气熏之。

5.稀氢氧化钠:喷前喷后薄层在短波长的紫外光下观察萤光。 (八)挥发油显色剂

1.茴香醛——浓硫酸试剂:喷后150oC烤。挥发油中各成分显不同颜色。 浓硫酸1ml加到冰醋酸50ml中,冷后加茴香醛0.5ml必须临时配制。 2.萤光素——溴试剂:检出含乙烯化合物。(配法及使用见前)。 3.碘化钾——冰乙酸——淀粉试剂:斑点显兰色则为过氧化物。

溶液I:4%碘化钾溶液10ml与冰乙酸40ml混合,再加锌粉——小勺过滤。溶液II:新制的1%淀粉溶液。

先喷溶液I,5分钟后大量喷溶液II,直喷到薄层透明为止。

4.对二甲氨基苯甲醛剂;检出菌与菌前体在室温或80oC烤10分钟显深兰色。 对二甲氨基苯醛0.25克,溶于冰乙酸50g,85g磷酸5克和水20ml的混合液中,此试剂储于棕色瓶中能稳定数月。

5.异羟肟酸铁试剂:斑点显淡红色,可能是酯和内酯。 溶液I:盐酸羟胺5克溶于水12ml,乙醇稀释到50ml,冷处。

溶液II:氢氧化钾10g溶于很少量水,再用乙醇稀释到50ml,储于冷处。

溶液III:溶液I和溶液II以1:2混合,滤去氯化钾沉淀,所得滤液必须放入冰箱中,可

稳定两星期。

溶液IV:三氯化铁(FeCL36H2O)10克溶于36%盐酸20ml,与乙醚200ml振摇,得均匀的溶液,密塞储存可长久使用。

先喷溶液III,在室温先干燥后,再喷溶液IV。 6.2.4——二硝基苯肼试剂,醛和酮化合物显黄色。

36%盐酸10ml加到2.4——二硝基苯肼试剂1克在乙醇1000ml的溶液中。 7.0.3%邻联二茴香胺冰乙酸溶液,醛和酮化合物显各种颜色。 8.三氯化铁试剂:酚 性物质显兰绿色。 1~5%三氯化铁的0.5N盐酸溶液。

9.4——氨基安替比林——铁氰化钾试剂:酚性物质显橙红色至深红色。 溶液I:2%4——氨基安替比林乙醇溶液。 溶液II:8%铁氰化外溶液。

先喷溶液I,再喷溶液II,再用氨气熏之。 10.硝酸铈试剂:醇在黄色背景显棕色。 硝酸铈铵6g溶于4N硝酸溶液100ml。

11.钒酸铵(钠)8——羟基喹啉试剂:醇在兰灰色背景显淡红色,有时需做加热。 1%酸铵(钠)溶液1ml和25%8——羟基喹啉的6%乙醇溶液,1ml用苯30ml振摇,争出灰兰色的苯溶液使用。

12.溴甲酚绿试剂:有机酸显黄色。

双甲酮30mg溶于乙醇90ml,慢慢加入85%磷酸10ml,配制后的试剂放置于冷处能用几个星期,但新配的效果较好。

13.酚——硫酸试剂:喷后110oC烤10~15分钟,糖显棕色,酚3g及浓硫酸5ml溶于乙酸95ml。

14.3.5——二氨基苯甲酸——硫酸试剂:喷后100oC烤15分钟,2——去氧糖在日光下显红棕色,在紫外光下显黄绿色萤光。 甲基红1g及溴酚兰3g溶于95%乙醇1000ml。

15.溴粉兰指示剂,显黄色。0.04mol/L溴酚兰乙醇溶液,用氢氧化钠溶液调至微碱性。 16.溴甲酚绿指示剂:如展开剂中含乙酸,则喷前薄层在120oC烘烤除去,在兰色背景上显黄色。溴甲酚绿0.04克溶于乙醇100ml,加0.1N氢氧化钠溶液至兰色刚刚出现。 17.溴甲酚紫指示剂,喷前薄层在100oC烤10分钟,冷到室温后,喷显色剂。在兰色背景上显黄色。

溴甲酚紫0.04克溶于50%乙醇100ml,用0.1N氢氧化钠溶液调至pH10.0。 18.溴甲酚紫柠檬酸试剂

溴甲酚紫25ml及柠檬酸100mg溶于丙酮:水(9:1)混合液100ml。 19.焦红栖溶液:在灰或灰兰色背景上白色。 0.1%焦酚红水溶液:2%氢氧化钠溶液(1:1)混合。

20.百里酚酞碱溶液:在灰或兰色背景上显红色或白色。百里酚酞50mg溶于2%氧化溶液?1:1?混合.

21.二氯靛酚试剂:喷后加热片刻,在天兰色背景上显粉红色如加热时间延生,则钼酸转变为白色,而其色羧不变故可识别酮 酸。2.6三氯靛酚0.1g溶于95%乙醇100ml。 22.芳香胺——还原糖试剂

芳香胺(如苯胺5g)和还有糖(如木糖5g)溶于95%乙醇

23.碘化物淀粉试剂:在白色或浅兰色背景上显深兰色,灵敏度为2μg。 8%碘化钾溶液,2%碘酸钾溶液及1%淀粉溶液等到量混合,用前新鲜配制。 24.硝酸铈铵——引朵乙醇 溶液。

溶液I:10%硝酸铈铵溶液。 溶液II:吲哚乙醇溶液。

25.联苯胺——亚硝酸钠试剂:喷后在紫外光灯下254毫微米观察萤光。 溶液I:联苯胺2.5克溶于浓盐酸7毫升及水500ml。溶液II:10%亚硝酸溶液。 临用前溶液I3份和溶液II2份混合。 (九)氨基酸显色剂 通用试剂

1.茚三酮试剂,用于氨基酸,氨及打官司基糖,喷后110oC加热泪盈眶至显出颜色 。 试剂I:茚三酮0.3g溶于下丁醇100ml中,加乙醇3ml或试剂II,茚三 酮0.2g溶于乙醇中100ml。

为了使茚 三酮 的颜色稳定, 采用下法:

硝酸酶试剂:饱和硝酸酮溶液1ml与10%硝酸溶液及96%乙醇100ml混合。 方法:用茚 三酮剂显色后用硝酸酮 试剂喷,斑点由兰紫色转成红色。 2.吲哚醌试剂:吲哚醌于乙醇100中,加冰乙酸10。

3.茚三酮——硝酸酮 试剂(Moffatt--Lytle反应)喷后在电炉上烤至刚刚显色,颜色 在日光灯中逐渐加深,某些氨基酸首先显出颜色,用笔立刻将色点记下,许多氨基酸赕出特殊的颜色,不同的氨基酸显出的速度也有差别,。

4.2——萘醌——4——磺酸试剂(Folin试剂)喷后在室温干燥 不同的氨基产生各种颜

色。

1.2萘醌——4——碘酸钠的0.62克溶于5%碳酸钠溶液100ml制备。 5.氯气——联甲苯胺试剂。

氯化作用,薄层放在氯气中,假如氯气要从气筒中得到的放置5~10分钟,假如由1.5%高锰酸钾溶液及10%盐酸(1:1)的混合物制得的,则需放置5~20分钟,然后 将薄层置空气中顾委分钟以除去过量的氯气,再喷试剂。

试剂配制:邻联甲苯胺160mg溶于乙醇酸30ml中,溶液用蒸馏水500ml稀释,然后 再加碘化钾1克。 (十)糖显色剂

1.茴香醛——硫酸试剂:喷后100~105oC烤,各种糖显不同颜色,浓硫酸1ml加到含茴香醛的乙醇溶液50ml中需临用前配。

2.1.3——二羟基苯萘酚——硫酸试剂:在110oC予热的薄层上喷试剂几分钟后在白色背景显不同颜色,再加热,颜色加深背景也变深。

3.苯胺——二苯胺——磷酸试剂:喷后85oC烤10分钟各种糖不同颜色。 二苯胺4g,苯胺4ml及85%磷酸20ml溶于丙酮200ml中。

4.茴香胺——邻苯二甲酸试剂:喷后100oC烤10分钟。已糖显颜色。去氧已糖显色,戊糖显红紫色,醛酸显棕色。

0.1M对茴香胺和0.1M邻二甲酸的乙醇溶液。

5 苯胺——邻苯二钾酸试剂:喷后105~110oC烤10分钟,糖显红棕色。

6.α——苯胺——邻苯二钾酸试剂:喷后100oC烤3~6分钟,多数糖显兰色。鼠李糖显橙色,所显颜色于室温稳定2~3天。

15%萘酚乙醇溶液21ml,浓硫酸13ml,乙醇87ml,及水8ml混匀后使用。 7.3——二羟基嗪酚——磷酸试剂:喷后105oC烤5~10分钟,酮糖显红色,醛糖显淡兰色。

0.2%1.3——二羟基试剂:喷后120oC烤15~20分钟,多数糖在白色背景上显暗红色,继续加热则变成浅紫色。

8.百里酚及浓硫酸5ml溶于乙醇95ml。

9.双甲酮——磷酸试剂:喷后110oC烤15~20分钟,仅酮显暗绿灰色。 10.Kellev——Killani试剂:(检查α——去氧糖) 配法及使用见附录二(强心甙项下)

11.3.5二氨基苯甲酸二盐酸1克溶于80%磷酸25毫升磷酸25毫升加水稀释至60毫升。

喷后100oC烤10~15分钟,糖显棕色,在紫外光下显黄绿色萤光。 12.酚——硫酸试剂

酚3克及浓硫酸5毫升溶于乙醇95毫升。 喷后100oC烤10~15分钟,糖显棕色。 13.对硝基苯胺——过碘酸试剂。

溶液I:饱和偏高碘酸溶液1份加水2份稀释。 溶液II:1%对硝基苯胺乙醇溶液4份与盐酸1份混合。

先喷溶液II:放置10分钟,再喷溶液II,去氧糖显黄色,紫外先下显强萤光,再喷5%氢氧化钠醇溶液,颜色转绿乙二醇同样显色。 (十一)鞣质

检查鞣质的试剂除检一般酚性物试剂均能反应以外,现列出二种较专一的沉淀如下: 1.氯化钠明胺试剂

取明胺1克溶于50水中,然后加1.0gNaCL使溶解后,加水稀释至100ml即得。保存期2~3个月(10oC左右)。 2.铁铵明矾试液:

即硫酸铁铵FeNH4(SO4)212H2O

取硫酸铁铵结晶1克加蒸馏水溶解后,使成100ml即得。

本文来源:https://www.bwwdw.com/article/1gh2.html

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