大肠杆菌O104核酸扩增(pcr-荧光探针法)试剂盒说明书

大肠杆菌O104核酸扩增(pcr-荧光探针法)试剂盒说明书

大肠杆菌O104核酸扩增（PCR-荧光探针法）检测试剂盒

【产品名称】

中文名称：大肠杆菌O104核酸扩增（PCR-荧光探针法）检测试剂盒 英文名称：Real Time PCR diagnostic kit for Escherichia coli O104 【包装规格】

20次/盒 【预期用途】

用于临床样品以及环境样品中的大肠杆菌O104的检测。 【检测原理】

试剂盒采用taqman荧光探针的技术，在反应过程中大肠杆菌O104特异的荧光探针跟靶核酸杂交, 同时被Taq酶水解, 把探针上的荧光基团和淬灭基团分开, 从而通过荧光增量来实时判断大肠杆菌O104的存在。 【产品组成】

ABI、Roche、MJ、Bio-rad、Eppendorf等多种全自动荧光定量PCR检测仪 【实验操作】

1． 基因组提取

（1）取培养后的菌液约1.5ml，12000rpm离心2min，弃上清。

（2）加入200μl无菌水，充分混匀，12000rpm离心2min，弃上清。

（3）加入80μl裂解液，用移液器吹吸混匀，50℃水浴1小时，100 ℃水浴15分钟，冰上

放置10分钟后12000rpm离心3min。 （4）取上清液用于PCR检测。

2． 荧光定量PCR检测

（1）按下列组份配制反应液（反应液配制请在冰上进行）

大肠杆菌O104荧光PCR反应液： 7.4μl Taq酶： 0.3μl 样品DNA或阴阳性对照品： 5μl DEPC H2O： 12.3μl （2）PCR扩增

95℃ 2 min 95℃ 60℃ 1min 荧光检测在60℃，反应体系为25μl，荧光通道选用FAM通道。 【结果判读】 1． 基线的设定

（1） 对于ABI系列仪器，分析前把参比荧光定为none，如果没有Ct<16的强阳性标本，就

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选3-15个循环的平均荧光信号为基线分析；如果有Ct<16的强阳性标本，就将此标本定为AFUMI DNA>1010 copy/ml，并将此样品从数据库中剔除，再以3-15个循环的平均荧光信号为基线再分析Ct。

（2） 对于iCycler仪器，基线一般按照自设值（2-10）即可，在实验结束后，选择PCR baseline

substract选项扣除基线值。若某些曲线出现了规则的剧烈的跳动，应视为非正常情况，将其从结果中剔除（击活select wells,将此孔彩色点去，然后选择display wells）并注意调整坐标，使所有曲线都在坐标以内。

（3） 对于lightcycler仪器，用荧光记数值F1/F2读取结果。基线设定原则以超过正常阴性对

照扩增曲线的最高点，且Ct值不出现任何数值为准（一般在0.001-0.05范围内）。

2． 阈值的设定

应在扩增曲线的指数增长期内且高于阴性对照品的扩增曲线最高点，推荐将阈值设定在指数增长期和线性期的拐点处。

1. 实验前请仔细阅读本说明书。 2. 本试剂盒不做临床诊断。

3. 实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范，试验人员必须进行专业培

训，实验过程中严格分区进行（试剂准备区、样本制备区、扩增和产物分析区），实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备，各区用品不能交叉使用。 4. 对每次实验进行质量控制。

5. 试剂使用前要完全解冻，并混合均匀，但应避免反复冻融，探针应避光保存。 6. 所有检测样品应视为具有传染性物质，操作和处理均需符合相关法规要求：卫生部《微

生物生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管理条例》。

【保存条件】

1．本试剂盒于-20℃保存。

2．PCR反应液应避免反复冻融。

【有效期】

有效期为6个月。

【生产企业】

天津生物芯片技术有限责任公司

地址：天津经济技术开发区宏达街23号一区 邮编：300457

网址： 电话：（022）66229538 传真：（022）66229596

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