菌种室作业规程 Microsoft Word 文档

氨基酸生产作业规程

赖氨酸菌种室

1.目的与原理

1.1目的：通过菌种的优化及扩大培养为发酵车间提供优质菌种。

1.2原理：菌种筛选过程：赖氨酸生产菌属于细菌菌属，以裂殖方式繁殖。

1.3反应方程式：无

2.工艺流程

2.1工艺简述：

赖氨酸菌种培育是将优质菌种通过摇瓶进行扩大培养。

2.2 工艺流程图 2.2.1菌种流程方框图

三角瓶 钢瓶 分离 初筛 复筛 冻存管 活化平板 3.工艺参数和原辅料质量标准

3.1 平皿制作工艺参数

项目 平皿干燥灭菌 平皿培养基

单位 温度 时间 温度 ℃ min ℃ 第1页共17页 标准值 180 120 120

氨基酸生产作业规程

灭菌 时间 温度 min ℃ 小时 ℃ 20 37 24 4 平皿培养 时间 冷藏

3.2钢瓶接种工艺参数

项目 钢瓶硅胶管（一次灭菌） 钢瓶灭菌 （二次灭菌） 钢瓶冷藏

3.3菌种活化工艺参数

项目 紫外灯 菌种冷冻 消毒 平皿培养 温度

3.4菌种培养工艺参数

项目 三角瓶干燥灭菌 培养基 时间 温度 时间 温度

单位 ℃ min ℃ min ℃ 标准值 123 30 123 60 4 灭菌温度 灭菌时间 温度 时间 温度 单位 灭菌 温度 min ℃ % 小时 ℃ 标准值 30 -85 75 24 37 酒精含量 时间 单位 min ℃ min ℃ 第2页共17页

标准值 120-180 180 20 120

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消毒 新洁尔灭含量 转速 % rpm/min ℃ 小时 0.1 190 37 7 摇床培养 温度 时间

4.设备一览表

设备编号 设备名称 规格型号 设备位号 主/辅机 生 产厂家 工作压力2-22-HH-003 中型压力蒸汽消毒柜 0.21MPa 工作压力山东新华医疗器械股份有限公司 卧室圆形压力蒸汽灭2-22-HH-004 菌器 0.14MPa 张家港市华菱医疗设备制造公司 2-22-HH-005 电热恒温鼓风干燥箱 SFe-01B 400*400*450 湖北省黄石市恒丰医疗器械有限公司 2-22-HH-006 电热恒温鼓风干燥箱 SFe-01B 400*400*450 湖北省黄石市恒丰医疗器械有限公司 2-22-HH-007 电热恒温鼓风干燥箱 SKFe-01 400*400*450 湖北省黄石市医疗器械厂 2-22-HH-008 生化培养箱 SP-01型 湖北省黄石市恒丰医疗器械有限公司 2-22-HH-009 生化培养箱 SP-01型 湖北省黄石市恒丰医疗器械有限公司 2-22-HH-010 生化培养箱 LRH-150 上海益恒实验仪器有限公司 2-22-HH-011 2-22-HH-012 2-22-HH-013 2-22-HH-014

生化培养箱 恒温培养振荡器 恒温培养振荡器 恒温培养振荡器 LRH-150 ZHWY-211B HWY-2112 SKY-211C 第3页共17页 上海益恒实验仪器有限公司 上海智诚分析仪器制造有限公司 上海智诚分析仪器制造有限公司

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2-22-HH-015 恒温培养振荡器 低速大容量多管离心2-22-FL-007 机 2-22-Q-007 净化台 ZHJH-1118 上海智诚分析仪器制造有限公司 LXJ-11B 上海安亭科学仪器制造有限公司 SKY-211C 2-22-Q-008 2-22-Q-009 2-22-Q-010 2-22-Q-011 2-22-Q-012 2-22-HD-005 净化台 净化台 全自动小型发酵罐 全自动小型发酵罐 全自动小型发酵罐 冰柜 ZHJH-1118 KF-2.5L KF-2.5L KF-2.5L BD/C-2585 上海智诚分析仪器制造有限公司 江阴净化设备厂 江苏白雪电器股份有限公司 2-22-HD-006 冰柜 BD/C-2585 江苏白雪电器股份有限公司 2-22-HD-007 冰柜 BD/C-2585 江苏白雪电器股份有限公司 2-22-HD-008 2-22-HD-009 2-22-HD-010 2-22-HD-011 2-22-HD-013 2-22-HD-014 冰柜 电冰箱 电冰箱 电冰箱 分体落地式空调 分体落地式空调 BC/BD-275SB BCD-210N BCD-210N KK23E-16TI KFR-71LW/E KFR-71LW/E 210L 210L 228L 青岛海尔特种电冰柜有限公司 苏州三星电子有限公司 苏州三星电子有限公司 西门子冰箱厂 广东美的制冷设备有限公司 珠海格力电器股份有限公司

5.操作规程

5.1平板制作操作规程

5.1.1无菌平板准备：将完整无破损的平板洗净，烘干，放入平皿桶（正面朝上）。将平皿桶出气孔打开，再放入烘箱中于180度干烘灭菌2小时，灭菌完毕排气孔关闭。

5.1.2平皿配制：按照配方配制培养基，准确称量，在将药品放入烧杯，先

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用冷水将其搅匀，后加热直至溶剂完全溶解为止，溶解彻底后用30%NaOH将溶液PH调至7.2-7.3。无菌检测平板用10%KOH调节PH至7.2±0.2，定容。

5.1.3培养基分装：将配制好并调完PH值的培养基装在500ml三角瓶中，培养基体积不要超过300ml，然后塞好棉塞，用铝箔纸包好。

5.1.4灭菌：将准备好的培养基于120度×20分钟灭菌。

5.1.5平板：将干热灭菌完的平皿桶从烘箱取出，提前放入无菌室通无菌空气并打开无菌室紫外灯照射30分钟，抗生素需要提前从冰箱中拿出解冻。

5.1.6倒平板：当灭菌完毕的培养基冷却的60度以下时，将装有培养基的三角烧瓶用新洁尔灭擦拭。菌种平板应先用无菌吸管加入相应的抗生素（抗生素体积提前计算），按照一个方向摇匀。30ml/平皿(菌种平板)倒入培养基。无菌检测平皿按20ml/平皿倒培养基。

5.1.7保存：倒完平板后，打开紫外灯，等到平板冷却凝固后（1小时）再进入无菌室将屏蔽倒置平皿桶中，放培养箱中37°C培养24小时，取出无菌检测平皿放入无菌室中保存。菌种平板则放入4°C冰箱中保存。

5.2 钢瓶接种操作规程 5.2.1钢瓶准备：

5.2.1.1将硅胶管上需要夹夹子的地方缠上橡胶带，以防损坏硅胶管。 5.2.1.2钢瓶试漏，将钢瓶口与接口接好，通入0.2Mpa的空气（或氧气）进行试漏若无气泡冒出，则说明钢瓶密封完好，若有气泡出现，需要重新处理后再次试漏，直至无气泡冒出为止。

5.2.1.3将钢瓶内装上水，硅胶管放在水中于123°C×30min进行第一次灭菌，灭菌完毕将硅胶管从水中拿出，钢瓶内水倒掉。

5.2.1.4钢瓶包扎：将钢瓶内加热20ml蒸馏水，检查钢瓶口橡皮垫是否完好，将硅胶管插入钢瓶内，瓶口用铝箔纸和纱布包好，另一头先用灭菌的棉花做棉塞，再用牛皮纸包好，硅胶管卷到瓶上待灭菌。

5.2.1.5将包扎好的钢瓶123°C×60min进行二次灭菌，灭菌完毕后，对钢瓶进行检查，传入无菌室备用。

5.2.2钢瓶接种：

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5.2.2.1钢瓶接种时，先用新洁尔灭喷洒，百级及缓冲，提前1小时打开无菌风，紫外线30分钟灭菌。

5.2.2.2进无菌室前，先用肥皂彻底洗手，在缓冲间更换无菌服，戴口罩，进风淋室用无菌风吹3分钟后进百级，进百级后用新洁尔灭浸泡双手及手腕3分钟，进行消毒。

5.2.2.3将培养好的盛有菌种培养液的三角瓶传入百级。

5.2.2.4拿入无菌室的三角瓶必须先用新洁尔灭洗瓶灭菌，然后对瓶口进行灼热灭菌，及时按灭棉塞火源，传入净化台备用。

5.2.2.5每三个三角瓶并入一个钢瓶内，并瓶时，尽量将三角瓶口余钢瓶隔远一点，防止瓶口相撞。

5.2.2.6三角瓶倒入钢瓶后，对每个钢瓶做好平板检测。

5.2.2.7将准备好的钢瓶放入4°C冰箱保存，经检测平板无染菌后，方可拿到车间使用。

5.3 菌种活化操作规程

5.3.1菌种活化前，打开无菌风、紫外灯照射30min。 5.3.2检查菌种冻存管有无松动、破损。

5.3.3菌种从-85°拿出时必须自然解冻，不能直接加热，不能水浴加热。 5.3.4活化用平板提前拿出检查有无染菌，并用75%酒精纱布擦拭一遍。提前使平板达到常温。

5.3.5进行无菌室前，先用肥皂彻底洗手，在缓冲间更换连帽无菌室，带好口罩。进风淋室用无菌风吹3分钟进百级室，进百级后用0.1%新洁尔灭浸泡双手3分钟，进行消毒，再用新洁尔灭擦拭超净台。

5.3.6用75%的酒精擦拭冻存管，小心将冻存管拧开，用无菌吸管吸取0.07-0.1ml菌液到平板上，所有平板吸完后，用灭菌的玻璃棒进行涂布，涂布在平板上画圈，保证涂布均匀。

5.3.7活化时小心谨慎，若吸管和玻璃棒碰到其他地方应重新换一个，以防染菌。 5.3.8涂布完成后将平板在超净台上静止2分钟后放入，倒置放入培养箱培养。培养温度为37℃、培养时间为24hr。

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5.3.9培养箱要提前打开并专用，不得与其他杂菌培养平板混用，确保培养箱温度正确.

5.4 菌种扩大培养操作规程 5.4.1 三角瓶准备

5.4.1.1将洗净、干燥的2L三角瓶，先检查是否有破损，然后用棉花蘸水做好棉塞，棉塞一定要结实不能松软。

5.4.1.2做好棉塞的三角瓶，置于烘箱中180℃干热灭菌2小时，至棉塞发黄。 5.4.2三角瓶的配制

5.4.2.1仔细检查已经准备好的三角瓶，检查三角瓶及瓶口是否有裂纹，棉塞是否合格。

5.4.2.2按照配方配制三角瓶培养基，配制过程要精心，将各种物料加入后，调PH，定容（配制过程中，先用热水溶解物料，再加水调PH，定容）。

5.4.2.3将三角瓶棉塞顺时针旋转拿出，放好，三角瓶棉塞一一对应，不要混淆，用75%的酒精纱布清理干净三角瓶瓶口的残留棉花。

5.4.2.4将培养基倒入检查好，干净的三角瓶中（500ml/个）用酒精纱布清理瓶口培养基，旋入棉塞，盖上铝箔，准备150ml三角瓶一个，做好棉塞留样，检测。 5.4.2 灭菌

5.4.2.1将装好培养基的三角瓶灭菌120℃×20min.

5.4.2.2灭菌完毕，仔细检查三角瓶有无破损、裂纹，棉塞松动等问题后，传入百级无菌室。 5.4.3 三角瓶接种

5.4.3.1先用0.1%新洁尔灭喷洒超净台和无菌间，开启无菌风和紫外线30分钟，并提前将抗生素1、2、3拿出冷冻室，常温解冻后传入无菌室备用。

5.4.3.2接种时将活化后的平板拿入无菌室，用75%酒精小心擦拭，仔细检查平板是否有染菌，否则不准使用。

5.4.3.3进无菌室前，先用肥皂彻底洗手，在缓冲间更换连帽无菌服，带上口罩，风淋3分钟，进行消毒，再用新洁尔灭擦洗超净台。

5.4.3.4用0.1%新洁尔灭擦洗1、2、3瓶及三角瓶外壁后，放入超净工作台。

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5.4.3.5将抗生素1、2、3摇匀，用无菌吸管移取7ml、7ml、17.5ml上述溶液于无菌三角瓶中摇匀，再用无菌吸管按无菌操作分别向每个三角瓶中加入混合 抗生素2.3ml.

5.4.3.6平板菌种接种过程：用75%酒精擦洗接种环及接种棒，检查丝棒的接口是否拧紧。接种环没有问题，将接种环及棒的金属部分烧好后，接种环放入三角瓶内冷却。

5.4.3.7用接着环再平板表面刮取菌种后接入三角瓶，接种环若遇到瓶口，平板外沿及其他可能染菌的地方，都应将接种环重新烧过。若无上述情况为安全起见，应每接三个三角瓶左右，将接种环重新烧过。

5.4.3.8接种时，左手将倾斜一定的角度，右手握棉塞注意拿好，防止掉落或碰到台面，还要注意接种环、手与瓶口的距离，避免碰到瓶口。 5.4.4三角瓶培养

5.4.4.1将接种后的三角瓶放入恒温摇床，不要让其晃动，设定温度37℃转速190rpm/min进行培养，确保摇床温度、转速正确、准确。

5.4.4.2不定时对摇瓶进行巡视，确保三角瓶在正常的温度、转速下培养。 5.4.4.3三角瓶培养7小时左右，传入百级室准备倒钢瓶。

6.异常情况处理规程

6.1染菌

6.1.1平皿染菌，将平皿培养基刮入不锈钢锅内进行加热灭菌。

6.1.2三角瓶染菌，将三角瓶放入高压锅内进行灭活处理，灭菌温度123℃时间30min。

6.1.3钢瓶染菌，将钢瓶放入高压锅内进行灭活处理，钢瓶用5%的NaOH进行一次加热温度123℃时间30min灭菌。 6.2紧急停电

6.2.1如在操作过程中，突然停电，由当班人员立即把运转设备关闭，并迅速通知分厂值班人员及生产调度，来电后，未接到分厂通知，任何人不得开启任何带电的设备。 6.3紧急停蒸汽

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6.3.1如在操作过程中突然停蒸汽，由当人员立即关闭蒸汽总阀并记录好灭菌时间，并及时通知分厂及生产调度，待来蒸汽后，必须经过分厂的同意方可使用。 6.5紧急停水

6.5.1如在操作过程中突然停水，由当班人员立即关闭正在水洗的器皿，并迅速通知分厂及生产调度，需要用的设备，严禁开启，以防烧坏机器。来水后，必须经过分厂通知后方可用水。

7.菌种室岗位职责

菌种岗位工序的主要岗位划分：主任、班长、操作 7.1菌种室主任岗位职责 7.1.1岗位任职资格：

7.1.1.1《劳动法》、《工会法》等相关国家法律法规；

7.1.1.2《员工奖惩条理暂行规定》、《现场管理制度》等公司和分厂相关管理规定和规章制度；

7.1.1.3本工序《安全生产作业指导书》中的目的、原理、反应方程式、工艺流程图、安全因素、安全注意事项、岗位职责、工艺质量控制指标、及设备工作参数和性能；

7.1.1.4安全生产工艺操作规程；

7.1.1.5具有较高水平的菌种培养经验，负责平皿的活化及上摇瓶。 7.1.1.6会使用高压锅，熟知各种试剂的配制； 7.1.1.7具有较强的保密意识。

7.1.1.7.1保质、保量地完成菌种筛选任务； 7.1.1.7.2搞好卫生区域和设备卫生；

7.1.1.7.3积极参加培训，努力提高自身素质，适应丰原发展； 7.1.1.7.4遵章守纪，服从分配； 7.1.1.7.5严格执行保密规定。 7.1.1.8履行职责标准：

(1) 带领班组人员努力提高菌种质量，定期进行菌种的分离、筛选，保证为发酵

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提供优质高产的菌种；

(2) 抓好现场管理工作，提高无菌意识；认真执行分厂各项管理制度，搞好安全

文明生产；

(3) 严格遵守公司保密规定。不该说的坚决不说，不得随便谈论有关菌种培养的

话题。

7.1.1.9职责目标：

为发酵连续提供优质高产的菌种。 7.1.1.10履行职责： ㈠、履行职责的程序和措施：

(1) 通过分离，筛选出优质的菌种，安全顺利的接入增殖罐中。 (2) 做到严格无菌操作。

(3) 现场卫生管理按“5S”标准执行。

(4) 积极参加安全工艺培训，不断充实自己，提高自身素质。 (5) 遵守公司各项规章制度，服从管理。 ㈡、履行职责的责任：

1、如果能够正常履行职责，区别考核要求、目标视为胜任工作，不奖不罚。达到较高目标，根据有关规定进行奖励。 2、履行职责责任人应当履行以下职责。 (1) 履行分厂各项工作管理职能。 (2) 履行质量职能。 (3) 履行安全生产职能。 (4) 履行保密职能。

如果履行职责不力，按情节轻重，按有关规定处罚。 7.2菌种室班长岗位职责 7.2.1安全生产工艺操作规程； 7.2.2负责平皿的活化及上摇瓶

7.2.3会使用高压锅，熟知各种试剂的配制； 7.2.4具有较强的保密意识。

7.2.5保质、保量地完成菌种筛选任务；

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