生物化学实验讲义(最后修改版)
更新时间:2023-11-24 00:20:01 阅读量: 教育文库 文档下载
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生物化学实验讲义
生物工程教研室
2007. 1
实验学时数:32 课程类别:基础课 应开实验项目数:8 开课学期:5 面向专业:生物工程专业 考核办法:考查
实验教材名称:生物化学实验讲义(自编) 制定大纲的依据:
专业方向及生物化学教学大纲 实验课教学目标:
验证及巩固课堂基本理论知识,培养学生动手能力和分析问题能力。 实验教学基本要求:
了解实验目的、原理、方法、步骤、设备结构及仪器的使用方法;要求学生具备对新实验的基本设计能力,准确测定和读取数据,整理数据,最后得出正确的结论。
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应开实验项目情况
计划学时数 每组人数 同开组数 实验要求 实验现状 实验性质 实验项目名称 实验目的、要求 主要仪器设备 双缩脲法测定蛋白质含量 4 掌握双缩脲法测定蛋白质含量原理和方法;学好使用722型分光光度计,了解仪器基本原理 掌握醋酸纤维素薄膜电泳的实验原理及操作方法;学习电泳仪、电泳槽的使用方法 了解酶的特异性;掌握检查酶特异的方法和原理 掌握测定酶性质的方法和原理 掌握核酸的一种水解方法和原理;学习测定核酸的组成成分 学习和掌握包埋法固定化酵母细胞 学习掌握维生素C测定方法 学习水解蛋白的制备过程及水解蛋白理化性质测定方法 学习多糖的提取方发及多糖理化性质的测定方法 1 32 必开 已开 验722型分光光度证 计(8台) 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 4 1 32 必开 已开 验电泳仪、电泳槽证 (8套) 酶的特异性 pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响 核酸的水解及组成成分的鉴定 包埋法固定化酵母细胞 维生素C的定量测定(磷钼酸法) 燕麦水解蛋白的制备和理化性质测定 香菇多糖的提取和理化性质测定 (二选一) 2 1 32 必开 必开 必开 必开 必开 已开 已开 已开 待开 待开 验恒温水浴槽(8) 证 离心机(6) 验恒温水浴槽(8) 证 离心机(6) 验恒温水浴槽(8) 证 可调节电炉(8) 验电泳仪、电泳槽证 (8套) 验722型分光光度证 计(8台) GPC高效凝胶色谱分析仪(1台) 水浴锅(8个) 综722型分光光度合 计(8台) 恒温摇床(8台) 离心机(4个) 2 1 32 4 1 32 4 2 16 4 2 16 8 4 8 必开 待开
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目录
实验一 双缩脲法测蛋白质含量???????????????????4
实验二 实验三 实验四 实验五 实验六 实验七 实验八
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳????????????????6
酶的特异性(专一性)???????????????????9
激活剂、抑制剂、pH、温度对酶活性的影响 ?????????11
酵母核糖核酸的水解及其组成成分的鉴定 ??????????15
包埋法固定化酵母细胞????????????????17
维生素C的定量测定(磷钼酸法) ?????????????19
综合设计实验(二选一) ?????????????????21
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实验一:双缩脲法测蛋白质含量
一、 实验目的
了解并掌握双缩脲法测蛋白质浓度的原理和方法
二、 实验原理
具有两个或两个以上肽键(-CO-NH-)的化合物皆有双缩脲反应,在碱性溶液中蛋白质与Cu2?形成紫色配合物,此反应和两个尿素分子缩合后生成的双脲(H2N-OC-NH-CO-NH2)在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的反应相似,故称之为双缩脲反应。这种紫红色络合物在540nm处有最大吸收。在一定浓度范围内,蛋白质浓度与双缩脲反应所呈的颜色深浅成正比,可用比色法定量测定。
双缩脲法最常用于需要快速但不要求十分精确的测定。硫酸铵不干扰此呈色反应,但Cu2?离子容易被还原,有时会出现红色沉淀。
三、 实验器材
1. 试管1.5cm×15cm 8支。 2. 试管架:1个
3. 吸量管:5.0ml 3支、2.0ml 1支、 1.0ml 1支。 4. S22pc型分光光度计。
四、 实验试剂
1.双缩脲试剂:溶解1.50g硫酸铜(CuSO4?5H2O)和6.0g酒石酸钾钠(NaKC4H4O6?4H2O)于500毫升水中,在搅拌下加入300毫升10%氢氧化钠溶液,用水稀释到1升,贮存在内壁涂以石蜡的瓶中。此试剂可以长期保存,以备使用。
2.标准牛血清蛋白溶液:牛血清蛋白溶液浓度为5mg/ml,用0.05N(2g氢氧化钠溶于1升水中)氢氧化钠溶液配置.
3.未知液:可用酪蛋白配制,未知液浓度为0.5~5mg/ml。
五、 实验操作
1.标准曲线的绘制
取干净试管6支,分别加入0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0毫升的标准蛋白溶液(牛血清蛋白溶液),用水补足到2毫升,然后加入4毫升双缩脲试剂,在室温下(15-25℃)放置30分钟,于540nm波长下用分光光度计比色测定。最后以吸光度为纵坐标,蛋白含量为横坐标绘制标准曲线,作为定量的依据。 未知样品蛋白质浓度的测定
2.吸取1毫升待测液,用水补足到2毫升,操作同前,平行做两份,于标准曲线的各管同时比色,比色后以标准曲线中查出其蛋白质浓度。
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