生物化学实验讲义（最后修改版）

生物化学实验讲义

生物工程教研室

2007. 1

实验学时数：32 课程类别：基础课 应开实验项目数：8 开课学期：5 面向专业：生物工程专业 考核办法：考查

实验教材名称：生物化学实验讲义（自编） 制定大纲的依据：

专业方向及生物化学教学大纲 实验课教学目标：

验证及巩固课堂基本理论知识，培养学生动手能力和分析问题能力。 实验教学基本要求：

了解实验目的、原理、方法、步骤、设备结构及仪器的使用方法；要求学生具备对新实验的基本设计能力，准确测定和读取数据，整理数据，最后得出正确的结论。

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应开实验项目情况

计划学时数 每组人数 同开组数 实验要求 实验现状 实验性质 实验项目名称 实验目的、要求 主要仪器设备 双缩脲法测定蛋白质含量 4 掌握双缩脲法测定蛋白质含量原理和方法；学好使用722型分光光度计，了解仪器基本原理 掌握醋酸纤维素薄膜电泳的实验原理及操作方法；学习电泳仪、电泳槽的使用方法 了解酶的特异性；掌握检查酶特异的方法和原理 掌握测定酶性质的方法和原理 掌握核酸的一种水解方法和原理；学习测定核酸的组成成分 学习和掌握包埋法固定化酵母细胞 学习掌握维生素C测定方法 学习水解蛋白的制备过程及水解蛋白理化性质测定方法 学习多糖的提取方发及多糖理化性质的测定方法 1 32 必开 已开 验722型分光光度证 计（8台） 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 4 1 32 必开 已开 验电泳仪、电泳槽证 （8套） 酶的特异性 pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响 核酸的水解及组成成分的鉴定 包埋法固定化酵母细胞 维生素C的定量测定（磷钼酸法） 燕麦水解蛋白的制备和理化性质测定 香菇多糖的提取和理化性质测定 （二选一） 2 1 32 必开 必开 必开 必开 必开 已开 已开 已开 待开 待开 验恒温水浴槽（8） 证 离心机（6） 验恒温水浴槽（8） 证 离心机（6） 验恒温水浴槽（8） 证 可调节电炉（8） 验电泳仪、电泳槽证 （8套） 验722型分光光度证 计（8台） GPC高效凝胶色谱分析仪（1台） 水浴锅（8个） 综722型分光光度合 计（8台） 恒温摇床（8台） 离心机（4个） 2 1 32 4 1 32 4 2 16 4 2 16 8 4 8 必开 待开

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目录

实验一 双缩脲法测蛋白质含量???????????????????4

实验二 实验三 实验四 实验五 实验六 实验七 实验八

血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳????????????????6

酶的特异性（专一性）???????????????????9

激活剂、抑制剂、pH、温度对酶活性的影响 ?????????11

酵母核糖核酸的水解及其组成成分的鉴定 ??????????15

包埋法固定化酵母细胞????????????????17

维生素C的定量测定（磷钼酸法） ?????????????19

综合设计实验（二选一） ?????????????????21

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实验一：双缩脲法测蛋白质含量

一、 实验目的

了解并掌握双缩脲法测蛋白质浓度的原理和方法

二、 实验原理

具有两个或两个以上肽键（-CO-NH-）的化合物皆有双缩脲反应，在碱性溶液中蛋白质与Cu2?形成紫色配合物，此反应和两个尿素分子缩合后生成的双脲（H2N-OC-NH-CO-NH2）在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的反应相似，故称之为双缩脲反应。这种紫红色络合物在540nm处有最大吸收。在一定浓度范围内，蛋白质浓度与双缩脲反应所呈的颜色深浅成正比，可用比色法定量测定。

双缩脲法最常用于需要快速但不要求十分精确的测定。硫酸铵不干扰此呈色反应，但Cu2?离子容易被还原，有时会出现红色沉淀。

三、 实验器材

1． 试管1.5cm×15cm 8支。 2． 试管架：1个

3． 吸量管：5.0ml 3支、2.0ml 1支、 1.0ml 1支。 4． S22pc型分光光度计。

四、 实验试剂

1．双缩脲试剂：溶解1.50g硫酸铜（CuSO4?5H2O）和6.0g酒石酸钾钠（NaKC4H4O6?4H2O）于500毫升水中，在搅拌下加入300毫升10％氢氧化钠溶液，用水稀释到1升，贮存在内壁涂以石蜡的瓶中。此试剂可以长期保存，以备使用。

2．标准牛血清蛋白溶液：牛血清蛋白溶液浓度为5mg/ml,用0.05N(2g氢氧化钠溶于1升水中)氢氧化钠溶液配置.

3．未知液：可用酪蛋白配制，未知液浓度为0.5~5mg/ml。

五、 实验操作

1．标准曲线的绘制

取干净试管6支，分别加入0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0毫升的标准蛋白溶液（牛血清蛋白溶液），用水补足到2毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂，在室温下（15－25℃）放置30分钟，于540nm波长下用分光光度计比色测定。最后以吸光度为纵坐标，蛋白含量为横坐标绘制标准曲线,作为定量的依据。 未知样品蛋白质浓度的测定

2．吸取1毫升待测液，用水补足到2毫升，操作同前，平行做两份，于标准曲线的各管同时比色，比色后以标准曲线中查出其蛋白质浓度。

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本文来源：https://www.bwwdw.com/article/149t.html