微生物检验学之细菌的生物化学试验
更新时间:2023-12-23 10:48:01 阅读量: 教育文库 文档下载
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细菌的生物化学试验
● 考点
碳水化合物的代谢试验 蛋白质和氨基酸的代谢试验 碳源和氮源利用试验 各种酶类试验 抑菌试验 复合生化试验
不同细菌具有各自独特的酶系统,因而对底物的分解能力各异,其代谢的产物也不相同。这些代谢产物又各具有不同的生物化学特性,为此,可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌。在临床细菌检验工作中,除根据细菌的形态、染色、培养特性进行初步鉴定外,对绝大多数分离的未知菌的属、种鉴定,主要通过这些生物化学试验。
一、碳水化合物的代谢试验
原理:细菌各自具有不同的酶系统,对糖的分解能力不同,有的能分解某些糖产生酸和气体,有的虽能分解糖产生酸,但不产生气体,有的则不分解糖。据此可对分解产物进行检测从而鉴别细菌。 1.糖(醇、苷)类发酵试验
原理:由于各种细菌含有发酵不同糖(醇、苷)类的酶,故分解糖类的能力各不相同,分解糖类后的终末产物亦不一致,有的产酸、产气,有的仅产酸,故可利用此特点以鉴别细菌。
培养基:在培养基中加入0.5%~1%的糖类(单糖、双糖或多糖)、醇类(甘露醇、肌醇等)、苷类(水杨苷等)。培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型。 方法:接种,培养。结果:产酸:培养基中的指示剂呈酸性反应。
产气:可使液体培养基中倒管内或半固体培养基内出现气泡,固体培养基内有裂隙等现象。 不分解:培养基中除有细菌生长外,无任何其他变化。
应用:是鉴定细菌最主要和最基本的试验,特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。 2.氧化-发酵试验(O/F试验) (1)原理:细菌在分解葡萄糖的过程中,必须有分子氧参加的,称为氧化型。氧化型细菌在无氧环境中不能分解葡萄糖。细菌在分解葡萄糖的过程中,可以进行无氧降解的,称为发酵型。发酵型细菌无论在有氧或无氧的环境中都能分解葡萄糖。不分解葡萄糖而分解蛋白胨的细菌称为产碱型。利用此试验可区分细菌的代谢类型。 (2)培养基HL:Hugh-Leifson培养基。
(3)方法:将待检菌同时穿刺接种于两支HL培养基,其中一支培养基滴加无菌的液状石蜡(或其他矿物油),高度不少于1cm。将培养基于35℃培养48小时或更长。
(4)结果:两支培养基均无变化为产碱型或不分解糖型;两支培养基均产酸为发酵型;若仅不加液状石蜡的培养基产酸为氧化型。
(5)应用:主要用于肠杆菌科细菌与不发酵菌的鉴别,前者均为发酵型,而后者通常为氧化型或产碱型。也可用于葡萄球菌与微球菌间的鉴别。 3.β-半乳糖苷酶试验(ONPG试验)
(1)原理:有的细菌可产生β-半乳糖苷酶,能分解邻-硝基酚-β-D半乳糖苷(ONPG),而生成黄色的邻-硝基酚。
(2)试剂:0.75M ONPG溶液
(3)方法:从培养基上取菌,于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液,加入一滴甲苯并充分振摇,使酶释放。将试管置37℃水浴5分钟,加入0.25mlONPG试剂,水浴20分钟~3小时观察结果。 (4)结果:菌悬液呈现黄色为阳性反应,一般在20~30分钟内显色。
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