骨髓间充质干细胞条件培养液对心脏成纤维细胞的影响

骨髓间充质干细胞条件培养液对心脏成纤维细胞的影响

姜振宇许颖姚程宋晓燕（吉林大学第一医院血液科，吉林长春１３００２１）

（摘要］目的探讨体外２％氧条件下培养骨髓间充质干细胞（ｍｅｓｅｎｅｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＭＳＣｓ）培养液对成年大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成情况的影响。方法分离Ｗｉｓｔａｒ大鼠下肢骨获取ＭＳＣｓ进行培养，收集培养３、６、９、２４ｈ培养液，用其刺激成年Ｗｉｓｔａｒ大鼠的心肌成纤维细胞３０ｈ，采用ＭｒＩＴＩ’法和３Ｈ一脯氨酸掺入法检测心肌成纤维细胞的增殖及胶原合成情况。结果经３、６、９ｈ的ＭＳＣｓ条件培养液刺激后的心肌成纤维细胞３Ｈ－脯氨酸掺入量与无血清对照组比较显著增加，分别增加２３％（Ｐ＜Ｏ．０１）、４４％（Ｐ＜０．０１）和３１％（Ｐ＜０．０１），而２４ｈ组与无血清对照组比较差异无显著性；ＭＳＣｓ条件培养液刺激后的心肌成纤维细胞Ｍｒｒｒ结果与对照组比较差异无显著性。结论ＭＳＣｓ低氧条件培养液可以促进心肌成纤维细胞胶原合成，改善心功能。

［关键词】骨髓间充质干细胞；心脏成纤维细胞；胶原

［中图分类号］飚４３（文献标识码］Ａ［文章编号】１００５－９２０２（２００７）０９＿０８１２ｍ３

Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄｍｅｄｉｕｍｏｆｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｏｎｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ

ＪＩＡＮＧＺｈｅｎ－Ｙｕ，ＸＵＹｉｎｇ，ＹＡＯＣｈｅｎｇ，ｅｔａ１．

ＨａｅｍａｔｏｌｏｇｙＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＪｉＨｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３００２１，Ｊｉｌｉｎ，Ｃｈｉｎａ

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ｇｒｏｕｐａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．ＴｈｅＭＴｒｒｅｓｕｌｔｓｏｆＣＦＢｓｓｔｉｍｕｌａｔｅｄｂｙＭＳＣ．ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄｍｅｄｉａ

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已证实干细胞心肌移植已成为心力衰竭治疗的新途径¨’２ｏ。多数学者认为，骨髓间充质干细胞（ＭＳＣｓ）具有多向分化潜能，在一定条件下可以分化为软骨细胞、成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞和心肌细胞等＂。ｏ。同时有学者研究发现，骨髓基质细胞可促进血管生成，并认为在血管生成的过程中，起关键作用的可能是干细胞分泌的细胞因子∞Ｊ。目前国内外对于ＭＳＣｓ移植心肌缺血区后其旁分泌途径的研究较少，本研究对此领域做一初步探讨，为临床应用提供理论依据和技术支持。

１材料与方法

１．１试剂及仪器ＤＭＥＭ、新生小牛血清、胰蛋白酶（１：２５０）购自ｈｙｃｌｏｎｅ公司；四氮唑盐（ＭｒＩＴ）和二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）购自Ｓｉｇｍａ公司；３Ｈ－脯氨酸购自中国原子能研究院同位素研究所；ＣＯ：孵箱（为可调氧浓度的ＣＯ：孵箱）。

１．２ＭＳＣｓ分离培养雌雄不拘Ｗｉｓｔａｒ大鼠（８０４－５）ｇ，麻醉、抗凝，无菌条件下剥离大鼠股骨和胫骨，经ＰＢＳ漂洗用含１５％血清的ＤＭＥＭ培养液冲洗骨髓腔，细胞悬液接种于培养瓶中置于３７℃，５％ＣＯ：孵箱中培养。实验采用第２—５代细胞。

基金项目：吉林省科技厅资助项目（２００５０５２０２）

通讯作者：姚程（１９５６一），男，教授，主要从事肿瘤临床研究。

作者简介：姜｛）ｌ乏’乒（１９５８一），女，教授，主要从事肿瘤及白血病临床研究。１．３心脏成纤维细胞分离培养雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠（２００±

１０）ｇ，麻醉、抗凝，无菌条件下手术开胸取心脏。经ＰＢＳ冲洗后，分离去除心房和大血管，将心室剪碎，于恒温水浴振荡器中３７℃振摇消化（１５０次／ｍｉｎ），消化液为含０．１％胰酶和０．１％胶原酶的ＤＭＥＭ）１０ｍｉｎ，吸取收集消化所得的细胞悬液，剩余的

组织块另加消化液再次消化，如此重复７次。收集第２—８次消化所得的细胞悬液至离心管，加入等量的含２０％新生小牛血

清的ＤＭＥＭ，离心（１０００ｒ／ｍｉｎ，ｌＯｍｉｎ）、弃上清，加入含２０％新生小牛血清的ＤＭＥＭ吹打成细胞悬液后过筛（３６０目）、再次离心、弃上清，加入含２０％新生小牛血清ＤＭＥＭ吹打成悬液、接

种至６孔培养板，于ＣＯ：孵箱中３７。Ｃ、５％Ｃ０２、９５％湿度孵育３０ｒａｉｎ后ＰＢＳ轻柔冲洗、换液，以后每２ｄ换液１次。常规培养、传代，取第２代细胞进行实验‘７．８１。

１．４ＭＳＣｓ条件培养液的收集培养第２～５代ＭＳＣｓ用ＰＢＳ漂洗２次，去除残留的完全培养基，加入不含胎牛血清的

ＤＭＥＭ培养液，然后将细胞置于可调氧浓度的培养箱，２％Ｏ：，无菌条件下收集３…６９２４ｈ的培养液，置一７０。Ｃ冻存备用。

１．５采用３Ｈ－脯氨酸掺入试验测定心脏成纤维细胞胶原合成功能对数生长期心脏成纤维细胞接种在９６孔板中，５×１０３个细胞／孔，３７℃、５％ＣＯ：及饱和湿度下培养至细胞接近汇合。弃上清，加入含１％血清的ＤＭＥＭ继续培养２４ｈ，使细胞进入生长静止期。分别加入ＭＳＣｓ条件培养液１００ｉ，１，３Ｈ．脯氨酸

姜拯芏笠盟焦回五厦士塑厘釜住接差速盟！坠避盛筮堡绁厦的显堕复！翅

９２．５

ＭＢｑ／Ｌ和维生素ｃ５０斗ｇ／Ｌ，共同孵育３０ｈ。用０．０８％胰

蛋白酶溶液消化并收集细胞悬液，在０．２２肛ｍ的醋酸纤维素微孔滤膜上负压抽滤，生理盐水和１０％的三氯乙酸冲洗滤膜，９５％乙醇脱色，烘干后置人闪烁瓶中，加入ＰＰ０／ＰＯＰＯＰ／二甲苯闪烁液静置过夜后，在液体闪烁计数器上测定放射性强度。

１．６

ＭＴｒ试验取对数生长期心脏成纤维细胞接种在９６孔

板中，５×１０３个细胞／孔，３７。Ｃ、５％Ｃ０２及饱和湿度下培养，２４

ｈ

后换无血清ＤＭＥＭ培养液，３７℃继续孵育２４ｈ，使细胞生长同步进入休止期。弃上清，分别加入ＭＳＣｓ条件培养液１００斗ｌ，继续培养３０ｈ，各组于培养结束前４ｈ，每孔加入ＭＩＴ（５ｇ／Ｌ）

１００

ｐ，１，３７℃继续培养４ｈ后终止培养，吸弃孔内培养上清液，

每孔加入１５０山二甲基亚砜，振荡１０ｍｉｎ使结晶充分溶解。在酶联免疫检测仪上４９０ｎｍ波长处测定光吸收值（Ａ。值）。１．７统计学处理结果以石±Ｓ来表示，采用ｔ检验。

２结果

２．１

ＭＳＣｓ条件培养液对心脏成纤维细胞胶原合成的影响成

年Ｗｉｓｔａｒ大鼠心脏成纤维细胞在经过ＭＳＣｓ条件培养液孵育

３０

ｈ后，可见ＭＳＣｓ条件培养液可促进成纤维细胞的胶原合成

（图１）。成纤维细胞，３、６、９ｈ组３Ｈ一脯氨酸掺入量与无血清对照相比，分别增加了２３％（Ｐ＜０．０１）、４４％（Ｐ＜０．０１）和３１％（Ｐ＜０．０１）；２４ｈ组３Ｈ—Ｐｒｏ掺入量与无血清对照组无显著差别。

蚓

鑫嚣

售笋

ＣＫ

３

ｈ６ｈ９ｈ２４ｈ

ＣＫ：用不含胎牛血清的ＩＭＤＭ培养液孵育心脏成纤维细胞；其余各组：用ＭＳＣｓ无血清缺氧３，６，９，２４ｈ的条件培养液

图１ＭＳＣｓ条件培养液对心脏成纤维细胞胶原合成的影响

飞

ｏｏｋ

置０．０６

Ｏ

ＣＫ３ｈ６ｈ９ｈ２４ｈ

图２

ＭＳＣｓ条件培养液对心脏成纤维细胞的增殖作用

２．２

ＭＳＣｓ条件培养液对心肌成纤维细胞增殖的影响成年

Ｗｉｓｔａｒ大鼠心脏成纤维细胞在经过ＭＳＣｓ条件培养液孵育３０

ｈ

后，ＭＳＣｓ的条件培养液不能促进成纤维细胞的分裂增殖（图２）。成纤维细胞，３ｈ组、６ｈ组、９ｈ组和２４ｈ组，各组问的０Ｄ４９０吸收值与对照组比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５），说明ＭＳＣｓ的条件培养液不能促进心脏成纤维细胞的增殖。

３讨论

长期以来，心肌细胞被认为是不可能发生损伤修复的。但是，近年来随着干细胞移植的兴起，这一观念发生了改变，许多研究已证实心肌可通过多种途径发生再生和修复，缺血心肌的再生和修复已成为心血管病研究领域的一大热点。而ＭＳＣｓ是存在于骨髓基质中的一种非造血系干细胞，它不但能够在体外扩增，而且具有多向分化的潜能，可通过诱导分化为心肌细胞，促进血管新生等多种途径参与心肌的再生和修复。

最近，Ｄａｉ旧１等将ＭＳＣｓ移植到心梗大鼠的梗死区后，ＭＳＣｓ只存活了６个月。３个月后可在ＭＳＣｓ上检测部分肌细胞表型，而全部表型的出现则在６个月后，但心脏功能的改善却主要发生在４Ｗ后，由此Ｄａｉ推测ＭＳＣｓ的旁分泌在细胞移植治疗心肌梗死的过程中可能发挥了重要的作用。Ｋｅｎｎａｒｄ等拍。利用大鼠的后肢制作一缺血模型，然后将自体的ＭＳＣｓ注射入其缺血部位。发现移植的干细胞分泌的血管生成因子，促进大鼠后肢血管的再生并且改善了血供。

本实验在保证分组细胞生长状态基本一致的前提下，取对

数生长期中后期的细胞，观察在缺氧不同时相干细胞条件培养液对心脏成纤维细胞３Ｈ－脯氨酸掺入的变化，能较全面地考察缺氧对心脏成纤维细胞胶原合成的影响。结果发现成纤维细

胞，３ｈ组、６ｈ组、９ｈ组３Ｈ一脯氨酸掺入量与无血清对照相比，分别增加了２３％、４４％和３１％。提示在心肌缺血区干细胞释

放某些细胞因子，通过旁分泌途径促进心脏成纤维细胞合成胶原。而２４ｈ组３Ｈ一脯氨酸掺入量与无血清对照组无显著差别，

这可能是由于随着缺氧时间的延长，干细胞分泌的细胞因子促进心脏成纤维细胞胶原合成能力弱于其胶原的分解能力，Ｆｒａｎ．ｇｏｇｉａｎｎｉｓ等¨叫报道，骨髓造血干细胞移植后，改善心功能的可能机制是合成基质金属蛋白酶及其抑制物，调节细胞外基质的代谢，改善心肌重构。ＭＩＴ结果表明这种合成的增加并不是由于心肌成纤维细胞数目增多引起的，而是由于成纤维细胞本身胶原合成能力的增强而产生的。

本实验的结果还显示，在缺氧３、６、９ｈ的干细胞条件培养

液可刺激心脏成纤维细胞胶原合成增加，限制了心室特别是梗死区膨展；而在缺氧２４ｈ的干细胞条件培养液与对照组比较胶原合成无显著变化，说明胶原的合成不再增加，抑制了心脏重构，使舒张和收缩功能改善。本实验在一定程度上解释干细胞移植后心肌功能改善的一些机制，并为临床提供技术支持。迄

今为止，干细胞的研究刚刚起步，干细胞移植治疗心脏疾病的

研究仍处于探索与试验阶段，远未达到临床应用的成熟地步。

４参考文献

１史力生，齐晓勇，李树人，等．粒细胞集落刺激因子动员大鼠骨髓间

∞

∞

∞

∞

∞

ｏ

５８

１

４

７３２２ｌ　

８１４?

充质干细胞移植治疗心肌梗死的实验研究［Ｊ］．中国老年学杂志，２００６；２６（２）：２１６－９．

２ＰｅｒｉｎＥＣ，ＤｏｈｍａｎｎＨＦ，ＢｏｒｏｊｅｖｉｃＲ，ｅｔａ１．Ｔｒａｎｓｅｎｄｏｅａｒｄｉａｌ，ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｆｏｒｓｅｖｅｒｅ，ｃｈｒｏｎｉｃｉｓｃｈｅｍｉｃｈｅａｒｔｆａｉｌｕｒｅ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００３；１０７（１８）：２２９４－３０２．

３徐鹏，赵子义，高鹏，等．免疫磁珠法分离纯化骨髓间充质干细胞及向成软骨细胞分化ＣＪ３．中国老年学杂志，２００６；２６（１０）：１３７０－２．

４ＷｏｏｄｂｕｒｙＤ，ＳｃｈｗａｒｚＥＪ，ＰｒｏｃｋｏｐＤＪ，ｅｔａ１．ＡｄｕｌｔｒａｔａｎｄｈｕｍａｎｂｏｎｅｍａｌＴｏｗｓｔｒｏｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｉｎｔｏｎｅｕｒｏｎｓ［Ｊ］．ＪＮｅｕｒｏｓｉｃＲｅｓ，２０００；６１（４）：３６４－７０．

５鲍翠玉，马业新，郭军，等．细胞因子对骨髓间充质干细胞增殖及其向心肌细胞分化的影响［Ｊ］．中国老年学杂志，２００７；２７（１）：２９－３２．

６ＫｅｎｎａｒｄＴ，ＳｔａｂｉｌｅＥ，ＢｕｒｎｅｔｔＭＳ，ｅｔａ１．Ｍａｒｒｏｗ—ｄｅｒｉｖｅｄｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓｅｘ—ｐｒｅｓｓｇｅｎｅｓｅｎｃｏｄｉｎｇａｂｒｏａｄｓｐｅｃｔｒｕｍｏｆａｒｔｅｒｉｏｇｅｎｉｃｅｙｔｏｋｉｎｅｓａｎｄｐｒｏ—ｍｏｔｅｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｉｎｖｉｖｏａｒｔｅｒｉｏｇｅｎｅｓｉｓｔｈｒｏｕ曲ｐａｒａｃｒｉｎｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ

生国蕉生堂苤盍！！！！生！旦筮！！鲞

［Ｊ］．ＣｉｒｅＲｅｓ，２００４；９４：６７８—８５．

７ＣｒａｂｏｓＭ，ＲｏｔｈＭ，ＨａｈｎＡＷ，ｅｔａ１．ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡｒｅ?ｅｅｐｔｏｒｓ

ｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄａｄｕｌｔｒａｔｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ［Ｊ］．ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ，１９９４；

９３（６）：２３７２－８．

８ＬｅｅＡＡ，ＤｉｌｌｍａｎｎＷＨ，ＭｃＣｕｌｌｏｃｈＡＤ，ｅｔａ１．ＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡｓｔｉｍｕｌａｔｅｓｔｈｅａｕｔｏｃｒｉｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－－６１ｉｎａｄｕｌｔｒａｔｃａｒ—ｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ［Ｊ］．ＪＭｏｌＣｅｌｌＣａｒｄｉｏｌ，１９９５；２７（１０）：２３４７—５７．

９ＤａｉＷ，ＨａｌｅＳＬ，ＭａｒｔｉｎＢＪ，ｅｔａ１．Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｎｐｏｓｔｉｎｆａｒｃｔｅｄｒａｔｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ：ｓｈｏｒｔ—ａｎｄｌｏｎｇ—ｔｅｒｍｅｆｆｅｃｔｓ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００５；１１２（２）：２１４－２３．

１０ＦｒａｎｇｏｇｉａｎｎｉｓＮＧ，ＳｍｉｔｈＣＷ，ＥｎｔｍａｎＭＬ，ｅｔａ１．Ｔｈｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅｉｎｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ［Ｊ１．ＣａｒｄｉｏｖａｓｃＲｅｓ，２００２；５３（１）：３１４７．

［２００７—１—１３收稿２００７－０２－２１修回］

（编辑章木）

万寿菊提取物改善老龄大鼠抗氧化功能的研究

裴凌鹏惠伯棣１董福慧（中国中医科学院骨伤科研究所，北京１００７００）

［摘要］目的研究万寿菊提取物（叶黄素）对Ｄ一半乳糖致衰老大鼠抗氧化能力的影响。方法用Ｄ一半乳糖注射Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠５个月，建立衰老模型。对衰老模型组、叶黄素组血清丙二醛（ＭＤＡ）含量、肝脏匀浆ＭＤＡ含量和血液超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活性进行测定及比较。结果叶黄素组血清ＭＤＡ含量和肝脏匀浆ＭＤＡ含量均比衰老模型组有所降低，而血液ＳＯＤ、ＧＳＨ—Ｐｘ酶活性有所升高（Ｐ＜０．０１）。结论摄入适量万寿菊提取物可以有效地增强大鼠机体抗氧化能力，从而延缓Ｄ一半乳糖诱发的大鼠衰老。

［关键词】丙二醛；超氧化物歧化酶；谷胱甘肽过氧化物酶；万寿菊

［中图分类号］Ｑｓ４［文献标识码］Ａ（文章编号］１００５－９２０２（２００７）０９－０８１４－０３

ＥｆｆｅｃｔｏｆＴａｇｅｔｅｓｅｒｅｃｔａＬ．’Ｓｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｎａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎａｇｅｄｒａｔｓ

ＰＥＩＬｉｎｇ－Ｐｅｎｇ，ＨＵＩＢｏ－Ｄｉ，ＤＯＮＧＦｕ－Ｈｌｌｉ．

ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｏｎｅＴｒａｕｍａｔｏｌｏｇｙ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅＳｃｉｅｎｃｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ

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Ｄ一半乳糖致衰老机制是指在一定时间内，给动物连续注射大剂量的Ｄ一半乳糖，使机体细胞内半乳糖浓度增高，在醛糖还原酶的催化下，还原成半乳糖，此物质不能被细胞进一步代谢而堆积在细胞内，影响细胞的正常渗透压，导致细胞肿胀、功能障碍、代谢紊乱，导致机体衰老‘“。万寿菊（ＴａｇｅｔｅｓｅｒｅｃｔａＬ）

基金项目：国家自然科学基金项目（３０１７１１６９）；北京市自然科学基金对外合作项目（ＳＺ２００５１１４１７０２０）

１北京联合大学应用文理学院

通讯作者：董福慧（１９５１一），男，主任医师，博士导师，主要研究骨折愈合。

作者简介：裴凌鹏（１９７６一），男，在读博士，主要研究营养与骨折愈合。属菊科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ）万寿菊属（ＴａｔｅｇｅｓＬ．）原产于中南美洲，有３０余种。我国传统上种植两种，除万寿菊外，还有孔雀草（ＴａｇｅｔｅｓｐａｔｕｌａＬ．）。万寿菊属的植物以其绚丽的黄色花朵和特殊的气味而著称。万寿菊花的类胡萝卜素化合物主要为叶黄素、玉米黄素、Ｂ．胡萝卜素和大量的叶黄素酯等。其中，叶黄素及其酯占大多数，具有多种生物学功能，尤以抗氧化、防止心血管疾病、提高免疫力和抗癌作用突出心】。本实验旨在通过万寿菊提取物对Ｄ．半乳糖诱导大鼠衰老模型的血清ＭＤＡ含量、肝脏匀浆ＭＤＡ含量和血液ＳＯＤ、ＧＳＨ—Ｐｘ酶活性测定，并与模型对照组进行比较来研究此类化合物对Ｄ一半乳糖致衰老大鼠抗氧化能力的影响。

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